【国家标准(GB)】 大豆皂苷

1CS 67.060
中华人民共和国国家标准
GB/T22464—2008
大豆皂苷
Soybean saponin
2008-11-04发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-01-01实施
本标的附录A为规范性附录。
本标准由国家粮食局提出。
本标由全国粮油标罹化技术委员会归口。本标推负责起草单位：南京财经大学。GB/T 22464--2008
本标雅参与起草单位：上海交通大学、武汉工.业学院、黑龙江九兰粮油工业集团公司、黑龙江双河松嫩大豆生物工程有限公司。
本标准主要起草人：衰建、翔兴荣、汪海峰、赵大云、张世宏、卡消德、罗莉、工哲。1范围
大豆皂苷
GB/T 22464--2008
本标推规定了大豆皂苷的术语和定义、质量要求和卫生要求、检验方法、检验规则、标签标识，以及包装、运输、存要求。
本标准适用于以大豆、大豆粘或大豆胚芽为原料提取的商品大豆皂苷。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标谁的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用了本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.2食品.卫生微生物学检验菌落总数测定GB/T4789.3食品.卫牛微生物学检验大肠菌群测定GJ3/T4789.4食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验G13/T1789.5食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验GB/T4789.10食品卫生微生物学检验金黄色葡葡球菌检验GB/I1789.15食品卫生徽生物学检验霖菌和酵母计数GB/T5009.1食品卫生检验方法理化部分总则GB/T5009.3食品中水分的测定
GB/I'5009.1：食品中灰分的测定食品中总砷及无机砷的测定
GB/T 5009. 11
GB/T5009.12食品中铅的测定
GB/I5492粮食、油料检验色摔、气味、口味鉴定法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB7718预包装食品标签通则
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
大豆皂苷 soybean saponin
以大豆，大豆粘或大豆胚芽为原料生产的，山非极性的三苷元（aglycote或sipogenol)和低聚糖链（glyconces)组成的五环三类齐墩果烷型皂戒产品。4质量要求和卫生要求
4.1成分特征
大互皂苷产品中主要成分为A类、B类、E类或DDMP类皂苷，其主成分的化学结构见图1.1
GB/T22464—2008
A类大豆皂苷结构
B类、E类和 DDMP 皂苷的结构
大豆皂苷结构图中 R,、R,、R,基团组名
h（）
β-D-Gle
β-D-Glc
α-L-Rha
β-D-Glc
a-L-Rha
a-L-Rha
图1大豆皂苷主成分的化学结构
CHOCOCH
CHOCOCII
CH, OCOCH
CIIgCOCHs
4.2质量指标
大豆皂苷质垦指标见表1。
色涕、外观
气味，口味
水分/%
灰分(以于基计)/%
大豆皂苷含量(以干基计)/%
pH值(1%水溶液）
4.3卫生指标
4.3.1大豆皂苷卫生指标见表2.
菌落总数/(CFU/g）
大肠菌群/(MPN/100g)
霉菌和酵母菌总数/(CFU/g)
致病菌(指肠道致病菌和致病性球菌）总(以As计)/(mg/kg)
铅(Pb)/(mg/kg)
图1（续）
大豆皂苷质量指标
大豆皂苷卫生指标
4.3.2植物检疫按照国家有关标谁和规定执行。5检验方法
5，1样、分样：按G13/T5009.1执行。5.2色泽、气味、口味检验：按GB/T5492执行。R
B--Gle
α-I-Rha
P-I-Glcbzxz.net
α-L-Rha
q-L-Rba
质壁指标
CB/T22464--2008
黄色至棕费色粉末
气味、口味正常，无异味
无肉眼可见杂质
6, 5± 1. 0
卫生指标
不得检出
5.3杂质测定：取一定量的试样平摊后，在自然光线下，肉眼观察有无与产品颜色差异的斑点或其他物质。
5.4水分测定：按CB/T5009.3执行3
GB/T22464—2008
5.5灰分含量测定：按GB/T5009.4执行。5.6大豆皂苷含量测定:按附录 A执行。5.7菌落总数测定：按GB/T4789.2执行。5.8人肠菌群测定按 GB/T 4789. 3 执行。5.9致病菌检验：按GB/T4789.4、GB/T4789.5.GB/T4789.10执行。5.10菌和醇母数检验：按GB/T4789.15执行。5.11总种含量测定：按GB/T5009.11执行。铅含量测定：按GB/T5009.12执行。5.124
5.13pH值测定：称取1.00g样品，加人到99.0ml.水中，搅拌均匀，制成1.0%的样品溶液，用pH计测定样液 PI 值。
6检验规则
6.1检验批
同一批原料，向一班次生产的产品为一批。6.2出厂检验
按本标准4.2的规定对每批产品检验。6.3型式检验
6.3.1避有下列情况之一时，应进行型检验：常年连续生产的每年至少进行一次；当原料、设备、艺有较大变化可能影响产品质量时：质量蓝督部门提出要求时。
6.3.2型式检验按本标准4.2、4.3规定执行。6.4判定规则
6.4.1检验结果全部符合本标准要求谢，判定该批产品为合格品。6.4.2卫生指标中有项检验结果不符合本标准要求时，判定该批产品为不合格产品。6.4.3除卫生指标外，其他项国检验结果不衍合本标准要求时，可在原批次产品中双倍抽样复检一次，若仍有指标不合格，则判该批产品为不合格产品。7标签标识
应符合GB7718的规定及要求。
7.2凡标识“人豆皂苷”的产品均应符合本标准。采用转基因大豆为原料生产的产品，应按国家有关规定进行标识。7.3
7.4应注明产品原料的生产国名。8包装、运输及贮存
包装材料或容器应符合相应食品卫生要求，包装应完整、无破损、无污染。8.1
应便用符合卫生要求的工具、容器运送，运输中应注意防正耳晒、淋，污染和标签脱藉。应贮存于清洁、十燥、阴凉处。不得与有毒、有害物品混存。8.3
A.1高效液相色谱法
A. 1. 1 范围
附录A
(规范性附录）
大豆皂苷含量测定
本方法规定了采用高效液相色谱测定人臣皂背中皂含量的力法。本方法皂苷各单体的检山限为0.1g/kg。A.1.2原理
GB/T 22464—2008
试样用80%乙醇溶解后，经0.45Hm滤膜过滤，采用反相键合柑色谱测定，根据色谱峰保留时间进行定性，根据峰面积或峰高定最，计算大豆启苷各单体的含量之和为大豆皂含量。A.1.3试剂
除非另有说明，仅使用确认为优级纯的试剂。A.1.3.1水：符合(GB/T6682规定的一级。A. 1.3.2 甲醇。
A.1.3.380%乙醇溶液：量取800mL无水乙醇加水稀释至1000mL：A.1.3.4人豆皂苷标准溶液：称取A类、B类、E类及DDMP类大豆皂单体标推品（含量≥98%)各10.0 mg置于 100 ml1.容量瓶中,用 80%乙醇溶液溶解并稀释至刻度,摇勾。每毫升溶液分别含每种大豆皂苷单体标准品0.10mg。
A,1.4仪器与设备
除常规实验离仪器设备外，还包括以下仪器设备：A.1.4.1商效液相色谱仪：具紫外检测器。A.1.4.2高效液相色谱分析参考条件：色谱杆:Nuya-ak Cu柱 3.9 mnX300 mm,或相同性质的填充柱一流动相甲醇水溶液,V(甲醇)+V(水)=80十20。流速:l.0 mL/min。
检测器：紫外炝测器,205 nm波长.0.2.AUFS色谱柱温度:30℃。
进样量10 μL。
A. 1.5 操作步骤
A.1.5.1试样制备
称取试样约 0.1 g,精确至 0. 001 g,加 80%乙醇溶液溶解并稀释定容牟 100 rmL,混匀,通过0.45 μm 微孔滤膜过滤，滤液备作高效液相色谱(HPLC)分析用。A, 1. 5. 2测定
在相同的色谱分析条件下，分别取10μL大豆皂苷溶液和试样溶液注人高效液相色谱分析，根据保留时间定性,外标峰面积定量。
A, 1,6 结果计算
大豆皂苷的含量按式(A,1)计算：Z(A.) X VX 100
V/×m×1 000×(100-w)×100
GB/T 22464—2008
X-…产品中大豆皂苷的含量（以质量分数计)，%；A.进样体积中大豆皂片单体组分i的质量，单位为毫克（mg)；V—样品稀释总体积，单位为微升(μL)；V，一进样体积,单位为微升(μL)；m一样品质量，单位为克(g)，
u-样品水分（以质量分数计),%。计算结果保留三位有效数字。
A. 1.7重复性
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。A.2分光光度法
A,2. 1范围
本为法规定了采用分光光度法测定大豆皂苷中皂苷含量的方法。本方法大豆皂的检出限为0.1g/kg，A.2.2原理
样品用50%甲醇水溶液溶解后，在酸性条件下水解，以乙酸乙酯萃取出首元，与香草醛、高氟酸反应显色，在560nm波长下测定吸光度，与标准曲线比较定量。A.2.3试剂
A.2.3.1高氯酸。
A.2.3.295%乙醇。
A.2.3.3乙酸乙酯。
A.2.3.450%甲醇溶液：量取100mL甲醇加入100mL水中，摇勾。A. 2. 3. 5 2 mol/L HCI 溶液:量取 16. 5 mL HCl 加水稀释至 100 mL.A.2.3.65%香草醛冰乙酸溶液：称取5.00g香草醛溶于100mL冰乙酸中，摇匀。A,2.3.7大豆皂苷标准溶液：称取大豆皂苷单体标准品或混合标准品（含量≥98%)10.01g用少量50%甲醇落液溶解后，加人2mol/LHCl60mL100C水解5h，用70mL乙酸乙酯分数次萃取，提取液用旋转蒸发器蒸干后，用95%乙醇溶解并转移率100mL穿量瓶中，以95%乙醇定容至刻度，摇勾。每毫升溶液含大豆皂苷0.10mg。A.2.4仅器
除常规实验室仪器设备外，还包括以下仪器设备：分光光度计：其1 cm比色Ⅲ。
A. 2.5操作步骤
A.2.5.1试样制备
称取试样约0.1名，精确垒0.001g，溶于50mL.50%甲醇溶液中，用50%的甲醇溶液定容于100mL，取10mL加人2mol/LHCl60mL，100℃水解5h，用70mL乙酸乙酷分数次萃吸，提取液用旋转蒸发器蒸干后，用95%乙醇溶解并转移至容量瓶中，以95%乙醇定容至100mL作为待测样液。A.2.5.2标准曲线的绘制
取大豆皂苷标准溶液(A.2.3.7)0mL.0.1mL、0.2mL、0.3ml,0.4mL.0.5mL、0.6mL、0.7mL(相当丁大豆皂0mg、0.01 tug.0.02mg、0.03mg,0.04 mg、0.05 mg、0.06mg,0.07mg)于10mL具塞试管中，水浴挥十，5%的香草醛冰乙酸溶液0.2ml,加人高氯酸0.8mL.摇勾，60℃水浴加热15min，取山后立即用流水冷却，加人4mL冰乙酸稀释摇匀后，在560nm处以0管调零，测定吸光度，每个浓度平行测定两次，计算平均吸光度值，以吸光度值为横坐标，火豆皂苷质量（ng）为纵坐6
标，绘制标准曲线。
A.2.5.3测定
GB/T 22464—-2008
吸收待测样液（A.2.5.1）0.4mL子10mL具塞试管中，水浴挥于，加5%的香草醛冰乙酸溶液0.2mL，加人高氯酸0.8mL，摇勾，60℃水浴加热15min，取出后立即用流水冷却，加人4mL冰乙酸稀释摇匀后，在560nm处以0管调零，测定吸光度，与标准曲线比较定。A.2.6结果计算
大豆皂苷的含量按式（A.2)计算：A XV× V2 × 100
Vi×V,×m×1 000×(100-m)
式中：
X——产品中大豆皂苷含量（以质量分数计），%；A—样液中人臣皂苷的质量，单位为毫克（mg）；V..．样品稀释总体积，单位为毫升（mL)；V...一水解时取样液体积，单位为毫升（mL)；一水解液定容体积，单位为毫升（mL）；V.…测定用水解液定容体积，单位为毫(mL)；-样品质量，单位为克(g)；
-样品水分(以质量分数计)，%。计算结果保留三位有效数字。
A.2.7重复性
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平-均值的5%。-(A.2
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大豆皂苷
GB/T 22464—2008
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2009年1月第一版
2009年1月第一次印刷
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