【国家标准(GB)】 真菌农药母药产品标准编写规范

ICS 65. 100. 01
中华人民共和国国家标准
GB/T 21459.1-—2008
真菌农药母药产品标准编写规范Specificationguidelines
for fungal pesticide technical concentrates(TK)2008-02-14发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-08-01实施
GB/T21459分为五个部分：
-GB/T21459.1—2008真菌农药母药产品标推编写规范；--GB/T21459.2-2008真菌农药粉剂产品标难编写规范；GB/T21459.3—2008
真菌农药可妮性粉剂产品标谁编写规范，—GB/T 21459.4-2008
-GB/T 21459.5—2008
真菌农药油感浮剂产品标准编写规范：真菌农药仙剂产品标准编写规范。本部分为GB/T21459的第1部分。本部分的附录A为规范性附录，附录I为资料性附录。本部分由中华人民共和国农业部提出并归口：本部分起草单位：农业部表药检定所，中国农业科学院植物保护研究所。GB/T 21459. 1—2008
本部分主要起草人：农向群、王以燕、张泽华、顾案根、刘绍仁、李宝巫、高松、陈景琴、张礼生本部分首次发布。
GB/T 21459. 12008
微生物农药是生物农药中的一类，包括细菌、点菌、病毒和原生动物等天然的或经人工诱变处理及基因修饰的微尘物，通过人工繁随和加工而成的用于防治病虫，常、鼠等有害生物的制剂。真菌农药是微牛物农药的一-种，其有效成分是相关靶标生物的病原真菌活菌体。菌体形态主要有孢子（如分生包子、芽尘抱子、休眠孢子等和菌丝体等。分生孢了是一种无性繁殖细胞，为真菌农药中通常存在的形态，并作为有效成分基本单元
真菌农药母药是指由真菌纯菌种经生物发酵获得单一形态或组合形态的高食量的真菌活菌体制剂，并包含伴随发醛过程的相关生物组分和（或）少量化学杂质的产品。目前广泛应用的大多是以分生抱子为活性成分的杀卓类真菌制剂，据不完全统计，在全球口登记注所的有7间10余补的50多个产品，产品类型多数为粉剂，少数为油忌浮剂及其他剂型：目前国际组织中尚未有真菌农药丹药标推的通用编写现范。本部分是在参考了联合国粮农组织（FAO）、世界卫生组织（WHO)联合发布的2002年第一版PESTICIDFSPECIFICATIONS”（农药标准）第九章中的细菌农药标准和HG/T2467.82003《农药母药产品你准编与规范》及其他相关标推的基础上制定的，在规定技术指标的内容和检测方法时充分考意了真菌的生物特性和当前真菌农药生产的技术水平。本部分是以分作孢子为活性成分的杀虫真菌母药为基准制定，对其有其他功能的或非分生孢子形态的真菌农药可作相应调整。1范围
真菌农药母药产品标准编写规范GB/T 21459. 1—2008
GB/T21459的本部分规定了具菌农药母药产品标准中的产晶要求、试验方法以及标志、标签、包装、贮存和运输等规范性技术要素的内容和编写要求。本部分适用于真菌农药母药产品的国家标推、行业标准或企业标准的编写，2规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/T21459 的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用丁本部分，
包装储运图示标志（GB/T91-2000,egISO780：1997）GB/T 191:
GR/T 1250
极限数值的表示方法和判定力法GB/T 1601
农药PH值的测定方法
GB/T 1604
商品农药验收视则
CB/T1605
商品农药采样方法·
GI3796农药包装通则
GB/T16160农药粉剂可湿性粉剂细度测定方法H/T2467.8-2003农药母药产品标准编写规范3术语和定义
下列术语和定义适用卡·GB/T21459的本部分。真茵农药母药fnngalpesticidetechnical cemeentrate(TK）相关靶标生物的病原真菌的纯菌种经生物发酵生产而获得的高含觉的单一或组合形态的活菌体母药，適常情况下还会包含伴随发酵过程的相关生物组分和少量化学杂质。3.2
孢子 spore
真荫的繁殖体，有多种类型。
分生孢子coniditm
真菌的一种无性繁殖细跑，山分生孢子梗上产孢细胞产尘，是真菌农药中最常见的形态。含葡量 [ungal density
真菌农药的单位质量中所含有效成分真菌的数量。含孢量spore density
形态为孢子的真菌农药的单位质量中所含有效成分真菌孢子的数量。GB/T 21459. 12008
活菌率fungal viability
点菌农药的有效成分真菌中可崩发生长的荫最占该菌总量的百分率，3.7bzxZ.net
杂菌率microbial contaminant
真荫农药中除了有效成分其菌外，其他菌（真菌和细菌等）景占总荫员的凸分率。3.8
每力viralence
真菌药对靶标有害生物(虫、、菌、草、鼠等)的致死或抑制。死中量I.1)s、致死中时［,Ts0.抑制率等表示3.9
贮存稳定性
storagc
在一没室温和(或)
贮稳定性
stfhilityat eleva
在高于一般室源
更稳定性数据时为
4要求
4.1有效成分描套直
应提供真菌漫
较短时
药有效戒分
所提供的信惠括菌补中文
代码，菌种生物学粉类！
意位及其鉴
能提供从国际公认馨能得到的鉴息，对有特定基因序
夏存在形态、非物活
4.2组成和外观
粒指出登
鑫治对象
应说期母药的组最能
4.3规范项目及指标
赶前后，产品族
生而进
本生化参数
考文献。
物态,形状等。
以通过活像牛物测定得到的致
率与其錦明值薛相对百分率。
相对白率。
意般是在没有取得
与在标题之、范围之前。
极其异名，种源，株系分或
生物化学戴遗优学特征，应尽可修饰过的髓株还应陈述相关信
记号或编需，母药中有效成分的主等参数（婚式现附录A)，
真菌农药母药的规范赢给表1的要求，具体指标由各产是作山规真菊农药母药规范项是及指标
含幽鼠/[（单位名称)/]
活菌率/%
菱力/T.I)，I.T，或兴等单位名称）(在茶件下）
杂菌率/%
化学杂质\/%
干燥减量/%
细度（通过μ试验筛)/%
影站惠
学(或规是范围）
贮存稳定性和(或)热贮稳定性/%表1(续）
（规定范围）
（℃贮存个月或周的活菌率与其标明值的百分率】注：所列頭月可根真菌的特性.功和产品具体情况适当增减。a可选项目。
b定期检测项目，
5试验方法
GB/T 21459.I—2008
【建议不低于80%】
除非另有说明，试验方法所用试剂级别应为化学纯以上，所述溶液均为水溶液，5.1抽样
按照GB/T1605中商品原药采样方法进行，用随机数表法确定抽样的包装件，最终拥样量不少于100g.
5.2鉴别试验
5.2.1菌种鉴别
根据所提供的菌种形态学、生物化学DNA分了特征或国际公认机构的鉴定特征，用显微观察法从生物形态上进行鉴定或采用其他（如生物化学、DNTA片断序列)方法进行鉴定。根据形态学特征鉴别的表述般应包括：菌落的颜色和形状，产孢器结构、产抱细胞以及孢子的差生方式、几何形状、排列方式、细胞分隔、细胞核数、表面叫凸和或)纹铆、大小等（参见第B、1章）如果具有明显区别于其他相似真凿的形悉；应特别指出。必要时可附图和照片。根据生物化学特征的鉴别应指明所鉴别的化学物质名称、检测方法和注意事项等。必要时可附图或图谱。
根据DNA分了特征的鉴别应措出检测方法，包括引物碱基序列、克隆载体名称、操作步骤和注意事项等，并给出由鉴别试验得到的DNA.片断序列图。5.2.2菌种仲裁鉴定
当对鉴别结果有怀疑或争议时；应到具有菌种认证资质的单位，将在菌种保凝中心保藏的牛产菌种及呼药与榄式菌种描述进行对照，山2名以上的专家确认后，出具菌种始定报告，作为仲裁依据。5.3含菌量的测定
5, 3. 1 方法提要
根据母药中其菌的生物形态提山检测方法，简述方法基本原理，对分牛抱子巡态的丹药建议采用显微计数法，即将母药润湿并稀释至适当倍数，在显微镜下用血球计数板计孢子数，然后计算含孢量（参见第B.2章）。分怎孢子或其他形态的母药均可采用菌游形成单位（colonyformingunit;CFU)的方法（参见第B.3章)，即将母药润溉、稀释后，定量接种到培养基上，计有效成分真菌的菌落数，计算含菌量。5.3.2试剂和溶液
试剂：(列山名称及其纯度或级别)。液或悬浮液：（标出其液度，对特殊的应写山其体配制和保存方法）培养基应列出其组分和比例，叙述配制方法和灭菌条件等。5.3.3仪器及设备
列山试验用主要仪器、设备，并说明其主要特性（技术要求)和特殊要求。当特殊要求在方法中影响安全以及方法的准确度和精确度时，必须写出。3
GB/T 21459. 1—2008
特殊类型的仪器设备及其部件，应按制图标准，绘图说明。采用显微计数法计含孢量时，一般包括天平（精度为0.01），显微镜（物镜×目镜倍数不低于400倍），高速组织捣碎机（最高转速不低于5000r/min），旋涡混合器（转速≥2000r/min，振幅=5mm），m球计数板（1/400mm×0.1mm精度，建议用25×16规格），计数器（19999），玻璃器m等。
采用菌落形成单位法时，除上述仪器外，一股还包括蒸气火菌（标明规格），恒温培养箱（5℃~60℃范围），移液器等。
5. 3. 4 试验步骤
一般包括取样、配制均匀总液、稀释、计数、接种、观察等，如有应准确叙述试验的每一操作步
预操作或箫要定量的都应明确指出。测定步骤中乎可能涉吸仪器饺正、塞户测定、工作曲毁、安全措施等都应敏述清楚。
5.3.5测定结果
应列出计算公式、简化
5.3.6充许误差
写明公式
应规定每次平行庭续果误差
般应不低于标明剪
5.4活菌率的测寇
如果5.3采用菌落影成单位法
根据母药中鲁
件物形态特
微观察孢子萌发邮旺（参贝第B
编写要求和果误差的限
5.5杂茵率的测
一般采用菌澤形单位法，即擦
并计菌花电菌（
培养基可选用息
露细菌道用
性培养基，低应作详软
根据要可修订航
编写要求和测定结康
5.6化学杂质的测定
片他方
号代号和蒸
瑜定活菌的力湾
的限范围参照5.
柜据舟药特性和实际需要测
5.7毒力的测定
为含义、单：
作为真菌农药母药的含菌量，
量，可取批项检测试验。
态的母药叠般來用接种培养后貌生物形态能母药
菌落形态臂征，歇平板工直接分翰的专用增养基必要时可用选择、测定骤础计算方法等。
根据母药中所含真菌的生物性助能不尚与奔灯测楚方法可能韬差较大：一般应包括以下内容。5.7. 1 方法提要
应采用活体生物测定方法,简述测定方法的基采原理和步骤要点，5.7.2试材
5、7.21试材(中菌,植物等)的选择尽最选用规范试材，应指明试材的种名、品系，生物龄、米源及编号，并说明选择该试材的适当现由。选择试材的理由一般有以下几方而：a）与防治对象同种或为近缘种：b）实验案纯品系最佳，犬然试材应果自同一地点，尽缩小范围，试材应便于人工养或培植；生物龄容易判断和整齐化：
d）培育基质材料容易获得，且易于规范化。4
GB/T 21459.1—2008
5.7.2.2试材(虫、菌、植物等)的培育（伺养、培养或种植）尽量采用规范的培育方法，应详细述培育试材所用的材料、器具、环境条件，操作步骤，以及培育基质组分、制备和培育方法等，并注明参考文献：5.7.3试剂和溶液
视需要而定，应列出试剂名称及其纯度或级别，标出辫液浓度。特殊辫液应写出具体配制步骤，保存方法和参考文献。
5.7.4仪器及设备
列出试样溶液配制、试材培育、接种观察整测等所靠要的仪器设备，并说明其主要特性或规格。有特殊要求的应详细叙述，必要吋經图说明5.7.5试验步骤
尽童采用规范的操作
中，可能沙及仪器校正
一般步骤为：
a），样品的配制
视不同产品制规程
b）不同试事连
确叙述试验的每一操作教骤，包据率要的预操作在内。测定步骤工作曲线，安全捐施等都应叙述清趋的设置
测定时应至秒设
同时应有白对
c）接种与
指明接种用
量5个剂旦
后的管理
操作方法、接
（虫）瓷水（植管理条件。
d）观察果
包括观察曦间、癫次，试材病
·般以试材更门戴被抑制作
作用，应详细说称准的判
5. 7. 6测定结果
应列出计算公
意能公式
一般先根据空
武中：
还理至少
达到有效价
宣复试摄个体数量可视情况而定，事项及规燃温度、湿度、光照、饲喂如果采用欺他推判断母药的有效义、单信
tt表或按帮计算校正死
率或师制Y（%）：
(T-- C)X100
T-处理死亡率或抑制率%：
C—空白对照死亡率或抑制率。
C一般不大于10%，否则试验无效。(1)
计算LD。的方法是将处理各剂量换算成对数值，校止死亡率转换成死亡几率值，用最小二乘法求出。I.Ts的计算方法相同。
5.7.7充许误差
应规定每次平行测定结果的误差范画，建议≤20%。样品各剂量引起的死亡率应在10%～90%之间。
5.8干燥减量的测定
5.8.1仪器及设备
扁型称量瓶：直径40mm
电热恒湿于燥箱：控温误卷土2℃；GB/T 21459.1—2008
十燥器，
5. 8.2 试验步骤
称取试样（名：准确至1mg），置于先称重的称量瓶中，将此瓶放人105℃士2C电热恒温干燥箱内干燥，1h后出，在干燥器中冷却至室溫,称。5.8.3测定结果
下燥减量X(%)按式(2)计算：
武t：
m…-试样的质量，单位为克（g)；X(mm)X100
m1于燥后试样的质量，单位为克（g）。5.9细度的测定
采用GB/T16150中的下筛法进行。5.10pH值的测定
按G13/T1601进行
5.11购存稳定性和（或)热贮稳定性试验{2
根提产品特性进行贮存稳定性和（或）热贮稳定性试验。一般是将样品在规定温度和条件下贮存，检测产品活菌率与其标明值的相对百分率，以确定不低于标明值80%的贮存时间来表示。真菌宜存于低温环境中，如果有在室激或低了室温贮存至少6个月，…-般为1年或2年的贮存稳定性试验数据，可直接采用。如果没有，热贮稳定性试验的结果可以作为产品贮存稳定性的步行括计。
在没有更合适的测定方法和指标时，可按以下建议选择至少一项进行检测：2）在5℃下按规定时间（标明月数或天数）贮存后：活菌率不低于标明值的80%；b）在15℃～20℃下按舰定时间（标明月数或天数）贮存后，活菌率不低于标明值的80%；c）在20℃～25C下按规定时间（标明月数或天数>贮存后.活菌率不低于标明值的80%或检测确定的数值：
分别在45℃±2℃、40℃+2℃，35℃上2℃、30℃±2℃下按规定时间（标明周数或天数）贮存后d
进行测定，活菌率与其标明值的相对百分率不低于80%或检测确定的数值。但如果平均值有士25%的被动，就需要充分考虑，6捡验规则
应符合GB/T1601有关规定。极限值的处理按GB/T1250.采用修值比较法。7标志，标签、包装和贮运
7.1标忠标签
真菌衣药母药的标志及标签应符合GB3796的规定。标签上还应注明贮运条件、7.2包装
综合企业具体包装情况及真菌农药母药特性要求进行缔写，应符合GB3796和GB/T191的规定。根据用广要求或订货协议，可采旧其他形式的包装。7.3购运
其真菌农药母药包装件应贮存于于燥，阴凉、避光的库房内，并根据产品特性和需要，指明贮运限定温G
GB/T 21459.12008
度及条件，运输时要轻拿轻效，避免挤压，防止雨淋、日晒。不应与粮食、食品、饲料混放或混运。避免与皮肤、眼睛接融，随止由口异吸人。7.4安全
在使用说明存或包装标签上应注明毒性、防扩措施等。7.5验收期
应规定真菌农药母药从交货到验收的最长期限(以月计)SE
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附录A
（规范性附录）
真菌农药母药有效成分描述格式产品中有效成分的名称、登记号和基本生化参数如下：菌种中文通用名
菌种中文别名…
菌种拉」文学名：属,补，种、变种或专化型及定名人。菌种拉丁文学名异名:属，种，亚种、变种或专化犁，菌种来源及株系分型或代码：获得地点或单位、原等主、人工处理如诱变等生物学分类地位:纲、日、科。
鉴定特征：形态学、生物化学或遗传学特征。应尽可能提供从国际公认机构能得刻的鉴定特征的参考文献。如果使用基因修饰过的菌株，还应陈述相关信息，对有特定基因序列的应指出登记号。菌种保藏机构及登记号或综号
菌种保存条件：温度，混度、避光、封装等。有效成分主要存在形态：分生孢了、芽生孢子、菌丝体等生物活性；防治虫、螨、菌、草、鼠或线虫等的类别或忌体名称。适宜生长条件：培养基碳、氮源，特需组分；最适温、显度；具他指定条件。适宜贮存温、湿度
注：此部分应写在标题之后,范围之前。8
附录B
(资料性附录)
真菌农药母药鉴定、检测方法及示例B.1以分生孢子形态学为鉴定特征的表述示例GB/T21459.1-2008
在培养基，菌落的菌丝呈色状如绒状、状、卷毛状、粉状等，背面色或无色，菌落产孢后呆·色或由色转变为.色分生孢子梗单尘/案集，有/无分隔，有/无分枝，直立弯曲，壁光滑/粗糙.·。产孢细胞呈·形如瓶形、雄形等》，单生/对生/轮生/候生于分生孢子梗的顶端，分生孢子为单细胞/多细胞，呈形（如圆形、椭圆形，肾形，菱形、针形等），表面光滑/粗/有疣炎或纹饰，大小为.m
B.2含孢量的测定示例
适用于真菌形态为分生疱子的母药，含孢量即含菌量：B.2.1方法提要
将母药润湿并稀释至适当倍数，在显微镜下用而球计数板计孢子数，然后计算含孢量。R.2.2试剂和溶液
试剂：吐温80（化学纯);
溶液：0.1%吐温80。
B.2.3仪器及设备
天平（精度为0.01g）；
显微镜（物镜×目镜400倍），
高速组织鹅碎机（最高转速≥5000r/min)：旋涡混合器（转速220001/mim，振蝠5mm)；血球计数板（1./400mm×0.1mm，25×16规格）；移液器；
手撤计数器(1~9999)。
B.2. 4 试验步骤
a）称取母药样品g（至少1g，精确至0.01g），共称取n个试样（一般n会3)，分别进行以下操作。
将1份样品置于摘锌机的盛液杯中，加入0.1%吐温80落液.mL（试样量1g时般加b）
100mL)，缓慢搅拌，尽量使孢了充分润湿：加蒸馏水-mL（-般为200ml.,所加水体积可根据盛液杯大小调整，以浸没钻头刀片之上2cm左右为宜）以5000r/min速度（或接近的转速）搅择..rnin（般为1min），静置约min（一般为1min）后，以相同速度再搅择..min(一般为imin)。
静置-s(—般约30s),用移液管从溶液中部移孢了悬浮液-mL(一般为2mL)到试管c
中加馏水mL（一般为8mL)，F旋涡混合器上振荡s（一般约80s）。重复步骤n饮[根据称取称量和预计样品含菌而定，应使f步骤中计数5中格孢子数为d)
100～500为宜1
用玻棒護1小滴水涂抹在血球计数板计数区两侧的问条上，盖上盖玻片，使之贴紧定。在)步骤后静置.s（一股约30s），用细头吸管从溶液中部吸取孢了悬浮液，在盖玻片边缘滴1满，使液体沿边缘渗人盖玻片下，刚好充满益玻片与计数板计数区域之间，应无气泡且计数9
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