【国家标准(GB)】 配合饲料中T-2毒素的测定薄层色谱法

ICS65.120
中华人民共利国国家标准
GB/T8381.4---2005
配合饲料中T-2毒素的测定
薄层色谱法
Method for determination of T-2 torin in furmula feed-Thinlayer chromatography
2005-09-05 发布
中华人民共和国国家质监督检验捡疫总局中国国家标准化管理委员会
2006-02-01实施
GB/I8381.4—2005
本新准券考了B/T1523—31小走T-2再的酶联免疫吸附测定方法本标准H/14985—1994的主差异如下：特G3/T14S3399中5.2.2.1的活性蒙用域的表述\加人0.4g活性家“修改为加人3.5g适性变，这品步了避少流出液中央带的于抗性杂质：--—将GB/T14926.=—1994中醇联免找及附测定收为薄层色陷制定修政了其中不符合/T0001.4—2C02标泄继写现则第4部分：化学分析为法之处。
本标准三华人民共和国农业部地出：本标准由全国饲料工业标准化技示爱员会归了本标农业部饲判质录监督检验测试中心（法附)负有起草，凸核当性药监所和同家定料质量监督检验户心北京)参加起节
六环准丰要草人：费荧、东、蓝永亮能石、本需兰、本广生、刘、扬略明。t范围
配合饲料中T-2毒案的测定
薄层色谱法
本标准定「洲定配合询料中之垂素的牌层色谱为法，本标准活用十合间样T-2幸案的测定本方法的险出限为1g/k。
2规范性引用文件
CB/T 8381.4—20C5
别文件中的条款通过本标准的引用而放为本标准的条款，凡是征口期的引用文件其陷所有药修改单！不也指制误的内案）或整订版与不适用于本标准，然而，鼓感根据本标准达成协议的各办研究尺否以使用过比文性的最新版本，尺是不注月期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T146S9.柯料采样
3原理
前合饲料十能12与索经提取、净化、缩和硅胶G零板浪开后，用20不施酸乙醇喷布，加热测层核，使丁2册索士365nm紫外光灯下量监色荧光，根据其在遵层板上显尔荧光的最低检出毕米测定。
4试剂
除非见有说明，在本分析中仅使月确认为分析纯的试别和然链水（或去两了双，或相当纯的水).4.1T2套教标准品.SIGMA48871
4.2无水之单
4.3雅，%3-
4,4乙之：
4.5丙测。
4.品砭胶G,睡尿层析用.
三瓶巾烷水乙醇：8一3www.bzxz.net
4.8H醇-水.4+1。
4.9月原-内酮,12。
甲纤维素纳溶酸，心.5为。
4. 11 苯 7龄,1 : 1.
4.12巾之晚乙酯甲致,6+?+1.
4.13疏酸乙醇游波，取片硫酸2nrr:1..用乙稀择至1010m1.4.14性率化器，层析用，经00\活化5，胃下燥溢备用。4.15西性炭：项20s新烂炭，片27%（体乳分款过酸穿液减池过夜、油滤后·用热幕水洗全太复离1美国公司的商品代号，路用这一信是是为方便本标产的信用·井不表示对读产品的认可。如果其他等效产品其有相同的效采，则可蚀用这些等效的品，1
GH/T8381.4——2005
于在120:烘干备用。
4.16T-2毒案标准品游波：称取T-2事素标准品（4.1)25.0m.精确到0.1mg用无乙率（2.3)箱解转人m!基瓶中下用水艺醇稀率刻度，此溶液含-2毒索.mg/rl：吸此标准降液1.cnl..用无水7.醇脂账车1:mL.此资液含T2靠需50s/m5控器和设备
5.1分析天半感0.000名，
5.2人T感量0.01g.
5.3小型粉确机。
5.4电动衰荡器.
5.5炭转蒸发张，
5.6层析柱，内径\cm长10 cru
5.7具案浓缩瓶:容最 10 ml,底部兵 0. 3 mL刻度尾管5.日3
戒满板：现格5rmx20tm.
5.9薄房瓷布能：除市厚度0.3mm。5.10元增：卧式，内长252m.减6cm，高2rm4式，内长10cm，宽6cm高25cm5.11外光灯涉长355nr1。
5.12微量注射器；1uμ1.、25el..6试样的制备
将按/1499.1取得的样品、四分法增分，收约2%多，经粉悼，全部过1mm孔跨，混分，装人磨口瓶牛备用：
利定步票
7.1提取
练取23g试拌（6）精确例0.01g，置233mL具宽编形瓶中，加Rml.水和10>0rml.二款甲统水乙4.7），密，在瓶案上涂层水，严朗满。诺荡1h.适注折叠快定性感编过淡，取mi.滤液于1L发瓶中，置转燃发器(5.5)工℃:减正热发至于7.2净化
7.2.1液滴分配
用10umL不油醛（4.分次辩新发瓶中的我查，忧人250mL分做漏斗中，正用31r:T.甲醇-水1.2)分次选幕发瓶，转人司一分被漏斗。报播分报带41.%m，静骨约15.德分层后，特下岸中醇-求无取战过净化性，不要将两交界必的白色累物放人托内：7.2.2柱净化
左层折忙（5.6)下端激约0.1R脱脂棉，尽量寒器，光装入3.5g中也氧化锅（4.1)，嵌平无面，再划人1*活性炭：4.15)，做紫。将层析柱下端人密，在抽法版上，拍决瓶中效人半底接收流出按。汀真空染，便活生焱压紫，将分液漏斗中的甲醇求提收液小心贴治管服加人杜内，控制减速不缸过ml./mir，提取液过杆快究毕时，加入10il.甲萨-水淋洗在、继续油减直至不下有液体筑出，7.3试料溶减的制条
过托后的液出液（7.7,3转人10.m1.兼发瓶中，定放转熬发器上，4b减压热发率+，改下莱发瓶世满水欲」至完企十·登热加人3mL乙融乙酯（4.1)，热益佛脚，在水浴上轻轻地反克摇动热发税：使战洁中的丁2索落山，冷却率室温后转人液缩瓶（.7)中：加约0.5甲醛-丙阐1.9)了蒸发瓶中，焰点磁碎残洁·将热发瓶五水浴」.探干落剂后，划人L乙塑醇.加热室沸转动蒸发汽，便充GB/T 9381.4—2005
分沸联，冷印至室温后转人同一浓缩瓶中.用c.5ml.中醇丙雨和3mL乙龄乙同样处理一次，乙腰7断并人浓缩放牛，游浓缩地骨约水浴[..蕊汽加茄浓缩至工，冷却至室温后.准确加人0.2mL，丙响（4.5)落解残经南做薄层析用。7,4测定
：7.4.1薄层板的制备
取4硅液（1.6).瓶巾H准钠落液<4.1>的11T.研磨2mim案足粘耦状，铺成5mx20ri:的薄层板(5.8)三块，置室祖下爆后，了10r活化2h~3十燥举中备用，7.4.2点样
在每块薄灵板(74.1)距下2.5em处为基践点择。在臣板左边练U.8cm)~1m处点试料链（.2在距充进缘2.cm处点1标准品落液（,1)在距心边龄1.2处点2标准品游波。再在历板上端1,：rm处点三个标准品落液各2uI，使之与基线上一个点的位相对应.7,4.3展开
7. 4. 3. 1摘展
以米-乙（4.二三)为横展剂，在卧式底开描内倒人10IT.展开剂，将点好样的薄层板靠试料率滚点的长边斜没人展开剂，展至板端运1min2min，使试料中的T-2宽京偏离原点0.7cm--1cm，取出通风挥+3min，典用10mL油（30t--60℃)偿展次，度至板端过1m,表出通风辉十5rin。7.4.3.2数展
以中准-乙酸乙确-甲哦（4.17）为就爱剂，将演展挥下后的薄层板置立式受开书内熟展15Cm。顺山通风挥下约10nin，
7.4. 3.3显影
同疏酸乙醇落滋（13）均勾喷布展毕的层板说恰好润证，如果喷布的落凝少，班点不易显现太多会使点K散，不易观察，骨11o烘箱中加热3mic-5min性题批案，票层板略著色石，文.即取li，冷却1mir.--5min，于装外光灯（5.11）下现察，7.4.4观察与评定
薄总板经横尺后，尿料溶液点中的T-%再素间台栋动约.7cm～1m,使其摆说杂质荧光的十扰，博层板上端经纵展的三个标准量点可分别作为横展后试资液户T艺事本和断个标准品点的应位点：试新率液中的T2每求点义寸与认展后的标准品点出较R，值丽定位。从横向和纵向调个方向确定试科溶获T2海素点的位置达到定性的日的。如乐在再层板上与标准荧北点对虚处术见诚料路滋中的叔便物点，训需按工进方伙重新点第.块板，瓦是生点完诚料带液后，在杆点处再加1L栋痛片游孩.与第快按同样展开，显必光：如果第二块板上试科率滋加1产标准品落液所火温险与1标准溶波相同，试样中丁-毒素为期性或鼠在1mg/kg以下，
明性试栏川通过稀试料降液成调整点样量至所产牛延点的荧光强变与1L标准品穿液所显荧光强度梯间进行定盘。求然基战上拍一个-2毒衰点在横展中都销有移动，刘名点炎光通座无影喉，测个标准品点均可用于和试料落液点比较光温理
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