【国家标准(GB)】 饲料中北里霉素的测定

1CS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T8381.5—2005
饲料中北里霉素的测定
Delernination of kitasamycin in feed2005-09-05发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会　
2006-02-01实施
GB/T8381.5—2005
牢标准参考了国内外有关北男荐素生产、检验等资料.丧据我国询料工业的实示值说制定。本殊准的际录人为规范性附录。本尔准士中华人民共相国农业部庭出.本标证主全围饲料工业标准化技术委员会内口。本标准出江宁省兽药饲料监察所负声起幸，青林省两监器所和国家伺料监严检验测试中心（北京象加起草。
本标准主要起草人：陈堂堂、营东，年永光、刘红，曲筋坤，战石、卢明，学广牛刘向民、桥崛明，T
，范围
饲料中北里毒鑫的测定
木标准规定了间料中北里系的测定方法。本标准适用干险综制料.配台制料中北业每衰的鉴别知含量划定，来用本古法别北每索的最小含草为2.5g/kg：GB/T 8381.5—2005
采用本方法测定北坚霉求实量的检测限为年下克饲料中含的北里零求效价单位。2规范性引用文件
下列文件中的条救过过木标准的引用而成为本标准的策武。几是注月期的用文件,其随后所有的修改单（不已活勘误书内咨）或像订版均不适用干本标，热而，鼓励投期本标准运收协改的各方研究走否可使用这些文件的最版本，品不许日期的引压文件，其最新版木适用于本标准，H95.饲料英样
中华人民共和巨兽药典（年版一部）3术语和定义
下列未港利足交适用于本标准。3. 1
北用再素效价单位
用微生物法耐的北里率索的生书活性羊位：用1表示。北里垂素中所含的抗菌活性部分的质且与生活性单惊的关系为1mg相当：100m非单筹素效价单位.4试剂和溶液
药非另有说明，在本分机中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸谣求（或去离子求，或相当度的水）4.1北里海素标准折，符合中华人民共和国单药典3200℃年版一部的要求4.2联英微球（Mienocese）,心MCC28ool4,3甲醇。
乙霞艺。
正H烷。
族胶行，薄层会护用。
盐落液，取市色软酸.1ml.用水称至1oun.I.。氢氧化销率变.氢氧化帮4R·对水落新并据科创1C9m1.4. 9
展并列1,想传用醇+5.
展开剂2.苯丙用,1十3.
4.1123%疏酸乙柠屏液。
4. 12 甲醇水,1 1 1.
4.13盐酸游液,c(HCI)—1 Trwl/1 ,4.14北里弃素标准品济液.称取50cg北里等素标作品（4.1).精矿至0.1mg置50mL盘瓶中，用中醇（4.3)率解并筛将或浓良药为1mR/ml.的落疫，供薄层鉴别用4.15北甲需索标准品吃各微你取50mg单端素标准品，精确至U.上mg.5UmL早瓶中，用甲醇CB/T 8381. 5—2005
落辨并稀押成约为10CCu/ml.的率落。存2么--10℃可以保存7天。供含量测定用。5酮及设备
5.1分机大半忘盘0.CC0二。
5. 2 天平,感量 0. 01 ..
5.3旋转蒸发器。
5.4依瓶：容域1cml，底庭部其0.2mL效准民替。5.5我培板.热格20cm×10cm.
5.6展开糖，立，规格10cm火5em×20cm薄层除布器，综市厚度n.3m.m
微盘注射25.50J
5. 9振热器
5.10离心机：
5.11心热恒温水浴。
5.12平底双媒：直价约901rm高16mm--17Ⅱm：荷合中华人民共和国鲁药典3200）年版一部的要求。
5. 13人锈部小管高10,0 mml=0. 1 rm,外径e. 1mn±0. 1 mm+内径6,0 mm=0. 1 mm;符合户华人民共和国单药3200年版·--部的要求5.14性温培养箱
5.15高后灭菌佛。
5.16格标下尺（精度C,C2mm）成抑或国测量仪6试样的制备
将接GH/T14399,1取得的样品，四分法渐分，取约20g经粉确，全就过1mm孔.解，混付.发人口瓶中。
7监测
7.1原理
用H3的水符来从试样的7.腰7.断游商中提求北里毒紊，调节水溶綫的pII值到3再月乙践乙脂苏取水落减中的北单等轰，经浓缩.溶剂转换，与标难品同时在硅腔G薄尽板上层.斤，比较两种展万剂件下者的R：慎，鉴别试样中是否含存北里需亲。7.2测定步肇
7.2.1提取
取21g试样（6）.确至0.01g+到150ml.具锥形版宁，域入20mLZ晚Z路（4.4).振播30min，过泄，滤落及容器用10rT.乙酸乙酯分四次冲洗，合并滤减于旋转然发器<5.3)的热发瓶中.在低十60减片蒸发至约余。
7.2.2净化
将浓缩液(7.2.1>转移到123mL分微润4中，用：mL乙酸乙分2次洗涤薰发板，洗液并人分液漏（此时溶满体积以控制在约l.为定），取事先用盐酸落液（4.7)谢仍至H3的水5ml.到分液漏斗巾，录择1min，收集下质水提波，反提取3次含水提取，用80m1.正已烧（4.5)分3次洗谈水提较液，产云止已烷。用1mol/1.氢氧化钠落减（4.8)谢节水换限商至FH5，再用30ml.乙酸乙酷分改向上述酸性水提方法提取，小心分出上层乙酸乙脂提取能于热发瓶中，在低十60减压燕十。
7.2.3试样落滤的制岛
GH/T8381.5—2005
用5nl.甲醇分3次路解线检（7.2.2>，将磨兼熟格到浓箔报(5，4)巾，于60它水中举F.冷卸至室温后加人.1111.尺醇落解残渣留作薄层层析7.2.4别定
7.2.4.1观层板的制备
收硅胶G(4.6),证水终11 m.,研2mr至呈粘调然,铺成三决薄是板25,5),置室湿T燥,与于105℃活化2h~3h，下燥器备用，>41内使月，7.2.4.2点样wwW.bzxz.Net
或两块尊层板（7.2.4.1>)，在每块薄层板距下2c处作为基载点栏，每块板各点三个样点：10μL北里每家标准品榕液（1.14)、5试价器液（72.3)和5μT.北里每求标准起落液、101.试样落滋，放3nmin，各点间中离不小于2cm。7.2.4.3晨开
在两个展开港内分别加入展开剂1(4.9)和展并：2(413)客10.将点如栏的两扶海版分别胃爱开剂中纵展13m，放出风辉十7. 2. 4. 4 显影
在辰开后的薄板1喷层均勾，强虑合站的%旋敦乙醇落（4.11），」通区处教世显色·也可以在1C流通空气中划势，加读显色，7.3赔与判定
化较两层嵌上各班点的位室以及朝色，剂定方法妇下：一在为块薄层板！试样路在与尔准品落液主盘点（面积最天的、颜色量深的舞点对应处向无斑点山现·且泥合加样点的充点额色比标准品溶被班点浅+判定试样中北里母家附性！-.一两块薄层板中，其中一或板上的减样箱被准与标准品落液斑点对应处无斑点出现而另一块板出现斑点，判定试中北里露索阴性一在两决游英板上，加果试详游液在与标非品流液取点对应处均山现斑点：泻合加样点只显现一个班点凡斑点范性及额色与标品降度点相同，；能判定北呈霉京剂性、维续以下金证制定。
8含置两定
8. 1康理
衣酸性圳热亲虾下，试样中的北里避索被纯化，失去牛物茄性，该挑化薇帮择标准品溶液，使与末经先化的试栏落减处相同其，以抵消杂质的于扰，用效生物标准出线法测定含量8.2刘定步屏
8.2.1茜量液的制备
取廉黄敲球酉(1.2)的替英基胎斜面培养物·按种于盛有费养源脂培着世（第4，4章)的培养中。在227菲1采用当方法制备的菌斜面，用0.5灭萄氯化钠游滚（第1章将的含说下，置小冰箱保存(不宁超过两用).日.2.2双的制备
收平拉培养基（第A章》加热融化神却至0：1川人适量函悬液.2，以参考浓度险T作搬所至扣菌直径在15mm1.nr为），必恶时，邮13ml培养基中可加人%制菊糖溶获（第A.3草)2mL据句。每个双碟（5.12人7mL均寸催布，效置本平台上冷待培菲基凝固游双碟倒骨」4.冷媒15以上，前区出，在每个双磷内率径为2.3m.周上等距离放网5个本诱钢小弯(5.13).
GB/T 8381.5—2005
8.2.3特化液的制各
量取制备试栏游液【8.2.5)的上清减20L到51l;mL其密详形瓶中，1rml/1.盐酸踏液（415）1n.1.抵,查蛋,在10n:求裕中热1h,冷却至室粗后.用1ml/1.氢氧化钠落液调节TT至7.R~%,0,加5m1.甲醇，用氯化钠醛眠益冲液（第A.幸1稀释测上试样箱较相同的浓度，8.2.4标准曲线的制备
8.2.4.1标准工作溶液
量取北里霉索标准贮备液（4.15）用纯化液（8.2.3)稀释使成0.05u/1m).0,1r-T.,0,2Cu/mT.n,4./ml.兼度的标准工作溶泌，议0.1u/mT.为参考液度标准二作溶液。8,2,4.2培养
取当天制备好的双避8，7.2)平均分为1准，标准工作液（，，4,1)单一涨实为组。每一十求评的6个不锈钢管中，位的个滴加参专浓度标准工件籍液另外3个满加该组标准工性落液，年组滴加至少3个双裸，于337培并16h~8：8.2.4.3标准曲线
测且各组参专浓度标焦工作游液和该组标准工作溶液拆菌圖数值，分别让算平均值·再计算所有欢详参考银度标准工栏落液抑商图的总马值，作为修下值。各浓度组的冲菌图效值按试（1）修止，4. = , -R+4
式中：
4.——核浓度标证工作落液微候正后的拍首图数值-.整正值
—校依成组参考能度标工作游液所至迎菌断读数平均值，A—核浓标证下作诺液冲圈读效平均值，1
以各组渡侬度的对数与该组游候正只的抑需测数值作裁性回归，求山回如方程。相关系数：应不小0.99
8.2.5试样溶液的制备
取25，确至0.1，15ml.具举形就中准加人50m，甲醛-水4.12）系播30min转至离心中H3/mia离心5rin用氟化磷酸盐经冲液准确稀释至运当浓虚（便游中北里每素的涨度在c.c5t/ml.~0.10m/m.T.之间>制战试栏诺液，当天处用。保剩余上消液，用丁制备纯化液.8.2.6剩定
取与标准载间时制备的至少3个双碳，按标准曲载的制备力法（8.2.4）分滴加试游液（3.2.5）和参考依虚标准下作举液，与标准山驾同时操作和落养。9判定与喆果计弹
9.1判定
试择效疫不产生抑菌图润定北业英豪陶作：试样落液产生抑菌国，判定北！！每素性并算含量.9.2范果计算
日日归方求出标准工作漆滴数考浓思别应的神闲困数佰作为修让佰，按式（1校山试详咨液抑剂因读教的了伯，再用向归方求山试样穿液中北需的实测旅c试样中北业款的含量按式(2)计片：w-cX\xi nao
武户：
试样北果得款的含量：单位为比军素效价单位每千克（u/kg）：GB/T8381.5—2005
试样落液中比出每索的实婆浓盘，羊位为北里重东效价单位每录于（u/.L）；7
试样的稀群俯敷：
试样质量，单为克(2).
测定站采用平行溯定的算术半均值表示，保至数位。10重复性
同一换作名对同一试样同时两次平行测定所得结果的相对偏求不人于2%。5
GB/1 8381.5—2005
.10.9%灭菌氧化钠溶液
附录A
（规范性时录）
溶液及培养基的配画
吸氧化销3g·如水便感1000L滤过.分装，00灭齿20minA.2颤化钠磷酸盐线冲液(pI[7.日）取氟化钠10、磷酸氢5.Sg降醛：氢钾0418，t1水像成1(m滤过，分发：11>灭 s rain.
A.350%谢带糖溶
收曲萄糖50g.水慎成100mL.满边、分装，3灭菌3)min。A.4营养琼脂培养基
氯化钠
肉摄液
1= g~ 21 g
除琼脂外，据合上述或分，调节pII值使比最终的pTI值略高n.~C，1如琼胎，加热落化后滤对，评克pH信灭后为7.2~7，4.分落：5火声30tin整热放快凝成斜面，A,5平板培养基
牛肉学出树
酵母复山楼
葡萄拂
15g~·2ug
除琼指和葡梳外，泻合上速或分，调节I快比展签的>H道峰高，2-).4，加人琼加热落化滤过，加他甸快落韩后，探勾，动节H估使火菌后为7.3--8.0、分装，15七灭菌30mir培养基可以采州相同成分的方生旁战生物检定境养HⅡ小华人贝共和国并约典2000血险一部)的干燥塔养需代替，临用时，照促用说配到和次菌。6
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。