【商检行业标准(SN)】 大鼠流行性出血热间接免疫荧光试验

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T t444—2004
大鼠流行性出血热间接免疫荧光试验lndirect imnmunoiluorescent antibody teclnique lor epiemichemorrhagic fever of rats
2004-06-01发布
华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2004-12-01实施
本标准的醛录A尼规范性附录
本标准虫国家认证以可监任管理委员会供出产归口，本际准起草单位中华人共和国上出人统检验拾渡局。本环准主医起草人：湖未通，李树消、王巧全、徐丝。平标准系首饮发存的出人境迹验检疫行业标准。SN/T1444—2004
1范围
大鼠流行性出血热间接免疫费光试验本标准规定了间要免要炎消试验检测火鼠流行性出血热抗体的方拉，本标准造用于大鼠流行性出血效的检、流行病学凋查利免疫流测。2材料
2.1试别
2.1.1多二钠NHP0,+12,0:
2..2磷酸二氢钾tKH.PO.）
2..3蒙化钩I)。
2..伊文渐益。
2. 1.5 甘荐。
SN/ 1444—2304
2.1.6.:30)/LpHIY,4费酸经液.0,01%--2.22讲文斯蓝商和S5洲微冲水的配制无附A.
性1所有化学讼剂均方分行练.
2.2仪器设备
2.2.1单通流可切够液器及样头，2染色正：
2.2.3保湿盒，
2.2.4盖披片
5恒温箱：
2.2.6低温冰箱。
2.2.7酸底计。
2.2.8美光显微镜
2.3标准试剂
2.3.1多理流行件出血热半抗原片（一℃保行）。2.3.2流行性出土热阳性“评。
2.3.3流行性出血热明性二污。
2.3。升值鼠酸紫光黄（TITC)标记免抗大鼠IgC火完护件，3梁样
被后大脱无密来血3.-uf,~1.nml.,待血液凝固后，以2occ r/min离.：10mi.分高血消。血消经=6℃3)miz灭活后，丘一2n保存备用4操作方法
4.1准备抗原片
从低虚冰箱中段品流行性出射热病毒细胞抗原片·冷风吹干.1
SN/T1444—20D4
4.2秘释血清
将被险、阳比放朗性血情1：2C梯择，分别取0.1mL加人0.01mol/LpI47.4磷酸望冲液1.L混句，
4.3加样
扩源片缩号后，报1：20稀维的镀检而清10产L点人病声抗填片于内，每张抗原片均设供生血消、性而清对肌及标本自发炎光对照，医性血滤、阳性血清也与效验血清同样取10加入病率抗原片f_内，标本自发荧光对照生对照孔内划人0.0mnl/1.1H7.4磷费绥冲被10L：4.4反康
抗原巧骨握盘内，恒温分min：
4.5洗玻片
取！1抗原片·用0.01m=l/Lp？.4瞬酸级冲般中间更换一次>派洗降三次.每欧5an，再用热增水源洗次：冷风吹干.
4.6帮荧光抗体
用3.01%--3.02%伊文薪蓝液筛降FI心标记的免抗火限G表抗体至工作限实，4.7和荧光抗体
拉原北+每孔加人！工作浓使的炎光抗本，4.8反应
接1.强作。
4.9选玻片
势4.5慢作。
4.10观票结果
连范源片上滴加30影甘油线拍造水，封片学荧光昱改镜下现察钻具，5吴别定
5.1判室方运
在荧光与微检下观察、正书组织细胞设获或红色。细胞内病特异控免安荧光为黄绿么颗粒，分布在滋整灿吸的险浆内，出血势病声的特暑件荧光一般长教在的气少大十的继取抗，相必可为扭商较、团块，共至片状荧光。
5.2.13发炎光对期.无炎光，维跑被染成兰包。5.2.2医件血消对照：无炭光纸跑被染皮红色。5.2.3性血读别膜：卵脑内病率替异性免按荧光闪充，呈针尖状或片状。5.=检和样本判定
对照系立方中进行别定，被垫栏太细服案内无炎光，细胞被染成色判为限性反应：被格样本细胞浆内出现用显黄经色荧光题拉，划为阳性反。A.11/15 niol/r.磷眼氧二钠的配制附录
（规范性附录）
试剂配制
NaH20,12025,?5，获水缩解后定旁至100mLA21/15mol/上磷醛二氢钾的配制你KH,FO.S.5g.加热水落餐后定溶金1000mLA.3生理茎水的配制
秘8.5gNaC:加癌饰水鹿源片.定空至1ootml.A,40.01 mol/1.pH7.4醛缨冲液的配制1/1:ma1/:,磷酸氢一钠91 n:[,
1/1=mo:/L弹酸二销191L
非理益水
用酸实计测应r:H,乎用:/15 1r:l/L.磷酸盐获校正至2[T7. 1,A.50,01mnl/I.pH7.2隧缨冲液的配制1/: am?.磷酸氢.73 --T.
1/15 mal/..磷酸=氢 27 m..
兰现楚术
SN/T1444~-2304
月酸度到定H.并用1715mcl/.磷酸盐波校上至H7.2.121汇高主平菌1=min务用：A,60.01%~0.02%伊文斯蓝液的配制你0.2件文斯监落解于1000.01m01/H7.P%中，家温保存，使厅时再月可样PRS作10稀拜，
1.790%甘消峻冲盘水的配制Www.bzxZ.net
取纯！油九份，.m.3我酸缓浓一份，泥。
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