【商检行业标准(SN)】 进出口油籽及粮谷中黄曲霉毒素的检验方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1101—2002
进出口油籽及粮谷中
黄曲霉毒素的检验方法
Delernination of aflatoxins in oil seedsand cerealsfurimport and exporl2002 -03-15发布
出华人民共和阔
国蒙质量监督检验检总局
2002-09-01实施
:SN/T1T01—2002
本标准是根把GB/T1.1一1993标准化工作导购第1单元，标准的起本与表述规期第「部分：标准编写的基本账定及SN/T00011995出口商品中农药、普药残留量及生物事素检验方法标准缩互的基本规定>的员求进行编写的。其中测定方法第一法；荧光光度法，采用了老口公职分析化学家协会公定分析方法带16版中所载的黄曲辞事套含量分析方法，技术内容与原方达根同，经验正后，按规定格式要求作了编举性修改，弟二法：幕层色谱法：是参专国内外有关文献，整研究、改进和骏证后制足的：测定低限品根据国际上对油籽及粮谷中黄曲寻丧求展高限盘和测定方法的灵敏度面制定的本标准的随录八为示的附录。
本标准由中华人民共和国国家认证认可监做简现委员会提出并凸口。本标准虫中华人民共和国山东山入境检验检校局质资起草。本标准主要起草人：第一达：张艺兵、张弱、卫东、顾正志第二法：张勝、赵卫东，张艺兵、李少赛，。
本标难系首饮发布转检验检疫荐业标措。1范固
中华人民共和国出入培检验抢梅行业标准进出口油籽及粮谷中
黄曲塞垂暴的检验方法
Pelermination of nflaloxlns in oil seedsand cereals for Import aul export5N/T 11012002
本标准规定了迷山口油籽及粮谷中岚曲考而素检验的、制洋和荧光光度法及薄尽色谐法的酬定方法。
本标推中荧光光变法道用进出口花坐仁，花牛果和土米中黄山每毒率总量（B一B十G一G，的益验薄层色诺法适用于进出口北生仁，花宁果和玉米中费牵牵紊BIB、G，或G，的检。2引用标准
下列标准所包含的杀文，通在在本标准中用们构成为本标准的条文，本标准自版时，所示版本均为有效。所有标准部会效修订，使用本标施范各方应探时使用下列标准限薪版本的可能性，SV/TC799—15S9进出口粮油、伺料检验检验一般规叫SN/TCR00.1—1S99进粮油，何料检验抽单和制样方送3捆样和制样
抽样和制样掀N/门08心.的规定迅行。第法荧光光废法
4定方法
4.1方法提要
试样中的满前需毒塞用中游-水（7十3)提单，提取波经过滤，稀释后，用免疫亲和柱净化，以甲整洗脱，加人换落满位成行生化物，以提高测定灵效，费曲零毒素总量（B，十B，十G十G月荧光光度法测定。
4.2成剂和村料免费标准下载网bzxz
除与有规定外，所用成剂均为分析纯，水没重蒸销水，1.7.1“甲醇,用全玻响装置年蒸均。4.2.2币毒：减相色谱纯：
4.2.3氧化钠。
4.2.4黄曲等市载免疫来和性：F主或相当者，4-2-6流济液储备液：称报道盘的漠，熔水小，配制成U.01%的储备激，避光保存4.2-6澳落液，0.0R/1.，取10ml澳接获储备减加人4mT.水混勺+供翁牛用，当日制备：中华人民共和国国牵质量监督验检疫总局2002-D3-15批[2002-09-01实施
SN/T 1101-2002
4.2.7硫酸弃液：0.05mol/取2.8m做确酸（95~9%>，爆慢加入适量水中，冷却定容至1.
4.2.8荧光光度计按准资，你取3.40g二水合统酸宁ICHN),）-H,S)，·2H,O)、用0.05mol/的最破择氧100mL，比落孩的费光强相当于20mg/ml.浓厚的英曲每市素标雅培准的荧光隍。
4.3仪器和设备
4.3.1荧光光度计，
4.3.2高速均质器
4.3.3戒璃维纸。
4.34穿气压为系。
4.3.5玻薄试普：12×75mm.无荧范特性。4.4测定步
称取试样约25g树确至Q.1）于250L具室谁形瓶中，加人5g氧化及13L申醇（4.2.1)-水（7十3>，以均质器高速揽择提取2min，过缺，移取15.Cml.游较至350mL只塞懂瓶中，并划人31.0mL水稀释泥列。以表璃虾维滤纸过滤几次.直至滤瘦橙情，随进行免疫亲和净化操作。4.4.2免疫亲和在净化
将免疫亲析批连接于20二效境筒下。清确移取15.0m（相当于1*试样）上还湿清滤液，注人垂率简+，渐空气压力系与针简连越，调节压力使落滤以约5ml./min流速全部过免度亲和杜，再使2L～3l.空气遇过柱件，以×：0mL水淋沈在，奔光全部出液，耳售2m3ml室气通过体，准确加l人1.0ml，甲醇(4.2.2>避行洗脱，洗脱流速为1mL/mm~2mlL/min。收全部洗税液于坡璃试管中，供检测用。
4.4.3.1必光光度的校准
在激发谈长360nm，发射被长45Cnm条件子，以殖酸溶液（4.2.7)为空自+调节炎光光度的炎光强度但该数为0.G;以按准存策（4.2.B)谢节荧光光准计的炎光理值读数为30.。4. 4. 3. 2样糖的测定
在上述聪胶(4.1.2)中加人1.0ml.决籍液(4.2.6),混勾，静置1in，按1.4.3.1案片进行疑作，测定其炎光强度值，再从荧光致度换算得黄曲每舞素的浓度值。4.4.4空白试验
除不称取试样外，均夜上述测定步骤进行，4.5特果计算和衰述
按式1)让算试样中黄山筛毒帝兼含量：欢中：
试祥中总黄曲需#款含景，/g
一--从炎光光度计上求得的样液中黄曲穿衰的依度-/El.FV样微最签定容体职.1.：
X最姿样滤所代表的试量R，
任：十其结果需北配空广正
5测定低相、回收率
5.1谢定低限
本方法的测定低限为2.0g/kg。
5.2回收率
SN/T 1101—2002
花生仁、花生果和玉来中黄曲声幸举即能度改其回收率实验数据如下。5.2.1花生仁中的回收本
在2.(1*g/kg时同收率为87.5%
在10.0g/kg时，买率为92.0%
在20.0/kg时，包浓华为99.0%。5.2-2花生来的回收
在2.0μg/kg时,回收率85.0%；
在10.C期时,同收率为90.0%
在20. 0 /kg时,回收率为96.0%
5.2.3玉米巾的回收账
在2./kg时，回收率为83.0%：
在1C. 0 xR/kg 时,F:收率为 92. 5%;在29.0gkg时回改96.0%
第二送薄屋色避法
6测定方法
6.1方法提要
试样中的黄曲考详豪B、BG，或心，用中·水（7一3)拨房，提取糖经过波，伴杆后免度亲和排净化。以比甲游洗脱，将选说液以氨气吹干，烤清以米·晴（98一2)落解个定容以荐层色谱法荧光扫播测定各种黄出需毒意的吉量，外标法定所，6.2试和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纠，本为蒸愉水。5.2.1平醇，用全玻端装置重蒸谁。6.2.2氧化钢，
6.2.2东-乙脏（98-2收2ml7带苯稀得至1006.2.4内酬-飘口烷(十):联30mL三氯甲烷月丙酮降车1Cm6.2.5黄曲存免滚利，P柱或相当者6.2.6黄每毒素B3.G减G标准品.范度均%.6.2.7标注情备液:分别称收诱量的黄曲微走素B,、B;,G,G.标准品,以革-之(98-2)配制成浓度为 0. I00 g/mE 的标:临储各液。6.？.6含标推上作液：根据需要准确移取造单的黄曲率毒案B,P，G，或G，的标准储各获.以苯-乙脏（S8+·2)释探成适尚度的标确T作液。心-3税薪和备
6-3.1满房色诺扫描仪配有炎光粒燃装置。6.3.2应速均质器，
6.3.3最质注射器：=01.
G.34思江：×13
6.4.1是取按4.4.1换作。
6.4.2免疫效和柱咨化按4.4.2操作。将洗股液于C~50面气流吹十。准确加人C.5mL萃a
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乙脐（2以游解残适，帝液供薄甚色法测定。64.3微定
6.4.3.1色谱条件
8）薄层色推板，高效硅腾G6010×14或20×10c1b）点样位益：样点新薄层板下沿15mm，间距10mmlc> 点样量,20. 0 μL.
d）菜开剂.两酵-三氯早烧（7+3);=）格测条件：荧光直毁扫捕，案发满长S65mm，袋射被长440m6.4.3.2点样与晟开
摄据样减中黄曲慈森高B，B、G：G，的含罩情况，选定高相近的泥合标准工作被，混合标准工作被和样波中费由要带系B,马、G.,G：的响应信均应在收器检测的线形范自内。对混合标唯工作被和样液按上述条性等体积参差点样，待样点接剂挥发后，将薄层板放入放展开缸中，用刷升剂展开至遵层板上沿。取出，使在空气中干燥。6.4.3.3包谐定
在上连色带余长（6.4.3.1)下，对搏层色谱版进行打描别定。黄曲穿毒帝B、B.G、G，的出移值分别约为0. 63.0. G,0. 57、0. 5,标准品的薄层色谱费,比扫描图免附录 A中图 A1,6.4.4空白式验
除不称取试样外，与按上递测定步骤进行。6.5结果算和表违
新数据处理板或接式汁英成样中更曲塞变素G，的含量X,-xexy
武中；长
这样中黄州西（B，BG.或G)含过.ng/g液出邮每(B,B,.G,联G)的峰高mm;合标准作波中费曲据毒表（B:.HG，或G,)的峰高，mTU合杯准工作液中放曲每毒索（B.B.或G的浓度：/L样赖应终定等体积，ml：
最终样滤所代表的试样最。
注：计基站果备相除率当位
7测定低限，回收率
7.1测低限
本方法测定低限：黄曲等市索n为1.0g/ig:B，为1.Cg/ig：G，为1.0g/kg:G1.0/kg7.2收率
花生仁、花益果和主米中黄曲避毒素添加浓也及其回收率实验数据如下：7-2.1花生仁中的回收率
器加获度//kg）
回收车
SN/T 1101
乖剂敏度/（pg/kg）
花生果中的回妆中
添如浓度/（ug/kg）
玉米中的四收率
黄曲游然
额加浓度/pg/kg）
回收率
回收率
回收率
黄曲海
SN/T11G1—2002
涨加旅度/（μg/kg）
回收率
SN 11012002
《提示的谢录
标求品色谱围
注：色证峰号1.2.3.4分别为黄也需毒家（G3、B1比移值分别为V.45.0.51.0.56.5.53。图A1黄曲游毒素B，心，标准品的薄层色谱图SN/T1101-2002
Foreword
This standard was drafted in Bccordance wlth the requirements of GB/T 1.1-1993\Direclives [orthe work of stendardization-Unit T:Drafting and presentation of standards--Part 1:General rulesfordrafting standsrds'endSN/TDo01-196'General rules for drafting the standardmsthods forthg determination of pesticide,veterinary drug residues and biotoxins in cammodities for export\.In this standard.the testing method for quantitative dleterminatian of aflatoxin in the AQAc OfficialMethod 16th.Ed. Is adopted at the Method 1 (Flunrometric melhod) which is thus technicalyidantical with thiat of the original;only minor editorial modification required for the stipulatad far.mat was made after going through vg:ificatian.The Method 2 oi this standard (Thin layer chrp-matographic method, was drafted by refcrring to the relcvant dornustic and foreign literaturesthroughrasaarch,modiffcatlonandvarificatian.The limit of dotemination in this standard is dufinad on the basis of the current intermational maxi-mum limit for aflataxine in ail saeds and cereals and the sensitivity of the methad.Annex A of this standurd is an imformative annex.This tandard wes proposed by and is iuinder the aharge of the Certificatian and Accreditation admlnatration of the Paople' Aepubllc of Chlna.This standard was drafted by Shandong Entry-Exit Inspcction and Quarantine Burcau of the People's Republic af China.
The main draftors af this standard are Zhang Yibing.Zharig Peng,Zhao Wcidoig and Gu Zherrgzhifor Method 1, and Zhang Peng, Zhan Waidong, Zhang Yibing, Li Shaoqian and Ma Hnnglai farMethod 2.
Thig stundard is a prufoasional stondard prornulgaled furthe first tirteNole: 1his Fnylish yipim. translatinmi [rvni thw Cline:a: taxt,is xalely fur guidance,Professional Standard ofthePeople'sRepublic ofChinaForEntry-Exit[nspectionandQuarantineDetermination of aflatoxins in oilseeds and cereas for import and export1Scope
SN/T 1101—2002
Thls standard specifies the methocls of sampling,6ample preparation and determinatian of aflatox-ins by fluorometry and thin layer chromatography In oll seeds and cereals for import and export.Method 1 of this standard Is applicable to the detemninetion of totel efletoxins (B, + Bz + G, + G2)in peanut,peanut in shell und maize for import and cxport.method 2 of this standard is applicableto the determinatior of aflatoxin ,,Bz.G;,or Gz content in Deanut,peanut In shell and malze forimport and export.
2Normative reference
The following standard omtaln provislons whlcn, through raferance in this text, constitute provi-sinns of thls standard.At the time of publication,the editiong indicated were valid.All standazdsare subject to revision, and parties using this stundurd shell invustigatc thc possibility of applyingthe rnst recent editions of thc standards indicated below.SN/T 0799 1999 Inspaction of cereals, oils and feedstuffs for import nd axport-Ggrerat rulesfor thg inspection
SN/T 0800.1 1999 In6pactlon f careals.oilg and feadstuffs far import and export-Methotg olsampling and preparation of samples3SamplingandsamplepreparationFallaw the instructions glvan in SN/TDBDo.1.Method 1:Fluorometrlc method4Method of determination
4.1 Principle
The aftatoxins in the tesl soniple re extrarted willi melhanol water (7 + 3). The extract is filtrateddilulec with water; and applied to immunoaffinity column for claanup. Aflatoxins are eluted withmethanol and rreated with bromine snlution,resultln in tha formation of derivatives.Totai af:atox-ins arg uamtltatad by HuorometryApproved by General Administrutiun of ulitySupervisior , lnspcction and Quarantine of thePeoples Republic of China on200?03-15Imiplcmcnted from 2002-09-0n4.2.Reagenta and materials
$N/T1101—2002
Unless otherwise specified, all the reagents used should be analyticslly pure; \weter\ ia distilledwatat.
4.2.1Methanal;Radlsdllad in all-gla6sdistilingsystem,4.2.2Methanol:LC grade
4.2.3Sodiurrachlonide
4.2.4 Aflatoxin immuno:ffinity column;P or equivalent.Bromine stock solution:Weigh an adequate amount af bromine,diasolva and dilute in4.2.5
proper aniount of water to prepare the stock solutions ofo.D1% in concentration.Keep away fromlight.
4.2.eBromine blulion:0.02 g/L.Prepare fresh deily by mixing 10 mL of bromine stuck sulutionwith 4o mE ofwater.Usethissolution forderivstization.4.2.7
Sulfuric acid golutian:0.05 mol/L, dilute 2,8 mL of concentrated sulfuric scid (95%-98%) to 1 L with water.
4.2.B Fluorameter calibration-solution:Weigh 3.40 g of qulnine guHate dihydrte i(CHz4N,Q2)H,SO,-2HO1,dissalvc and diluto to 100 ml with 0.Q6 inal/L sulfuric acid solution. Thg fluorcscance imtensity of this solution is equivalent to that of aflataxln ztandard solution af 20 ng/mL inconcentration.
4.3Apparatusandnqulpment
Fluorometer
High-speed blender.
Glass fiber filter parer.
4.3.4Airpump.
4.3.5 Test tube:12 ×75 mm,without fluorescanc.4.4Procedure
4.4.1Extraction
Welgh ca 25 of the test sample (accurate to 0.1 g) into a 250 mL conical flask with stopper.Add
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