【水产行业标准(SC)】 草鱼出血病组织浆灭活疫苗检测方法

中华人民共和国行业标准
草鱼出血病组织浆灭活疫苗检测方法1主题内容与适用范围
SC 1002-92
本标准规定了草鱼出血病组织浆灭活疫苗制品的取样和试验方法，以及判定原则等。本标准适用于草鱼出血病组织浆灭活疫苗的检测，不适用于检测其他鱼用菌(疫)苗。2引用标准
SC 1001 草鱼出血病组织浆灭活疫苗NY7成品检验的有关规定
3取样
3.1每批制品随机取样作为待检样品。取样量：制品在50瓶以下者，取2～4瓶；制品在50～100瓶者，取样5瓶，制品在100瓶以上者，取样10瓶。3.2在无菌条件下，将每批待检样品混匀，并分装到灭菌小瓶中，数量根据检测项目和要求而定，置于4 C冰箱中待检。
4pH检验
采用经计量部门检定的市售pH比色计或精密试纸进行测试。pH值为5.5～7.0者为合格品。如pH小于5.5或大于7.0,则为不合格品。5无菌检验
在无菌条件下，用生理盐水将待检疫苗稀释10倍，从每管吸取0.2mL的量分别接种到普通肉汤、厌气肉肝汤和琼脂斜面上各管，在37℃条件下培养96h，均应无菌生长。如有菌体生长，则为不合格品。
6安全性检验
6.1试验容器
6.1.1选用容积为1～2m的水泥池或水簇箱等容器。容器需配有控温和通气增氧装置。6.1.2容器在使用前用100Ppm漂白粉水溶液消毒24h，消毒后用自来水冲洗干净，并放入适量经活性碳处理的自来水曝气24h后待用。6.2试验鱼种
6.2.1应选用全长为8～~15cm体质健壮，游动活泼，无任何损伤和疾病的当年草鱼种，并在试验前用2%的食盐水浸浴5～10min。
6.2.2将符合6.2.1条的鱼种放入符合6.1条规定的容器中，于28～30℃水温下饲养，观察15d，所有鱼均应活动正常。如发现有鱼种出现有出血病症状，则该批鱼种不得使用。6.3安全性试验
中华人民共和国农业部1992-11-06批准1993-04-01实施
SC 100292
用无菌生理盐水将待检疫苗样品稀释10倍。取符合6.2条规定的鱼种10尾，将稀释后的疫苗用无菌注射器对鱼种作腹腔或背肌注射，注射剂量为0.3~～0.5mL/尾。注射后的鱼种放入试验容器内，25～28℃水体中饲养，观察15d,如发现有鱼患出血病，则该批疫苗为不合格。7效力检验
7.1鱼种免疫
7.1.1按6.1条规定准备试验容器，按6.2条规定选择试验鱼种。7.1.2将经安全试验的待检样品用无菌生理盐水稀释10倍，用无菌注射器对鱼种进行注射免疫，每尾注射剂量为0.3～0.5mL，试验鱼种不少于25尾。注射后的鱼种在25～28℃的水温下饲养15~30d。该鱼种即为免疫鱼种。
7.2免疫保护率的测定
7.2.1免疫鱼攻毒
7.2.1.1病毒液的制备：按SC1001附录A的规定制备未经灭活的活毒悬液（活毒悬液的毒力测定见附录A）。
7.2.1.2攻毒试验：用生理盐水将活毒悬液稀释成毒力强度为100LDs/0.5mL后，以0.3~0.5mL/尾的剂量，分别注射经免疫的试验组鱼种和未经免疫的对照组种各20尾。攻毒后的鱼种在25～28C的水体中观察15d,记录各组的死亡鱼数,计算死亡率。7.2.2免疫保护率的计算
根据7.2.1.2条的试验结果，按下式计算：对照组鱼种死亡率一试验组鱼种死亡率×100免疫保护率(%)=2
对照组鱼种死亡率
判定：免疫保护率在80%以上的制品为合格品。8物理性状检验
制品的感观性状应符合SC 1001的规定。凡含有异物、摇不散的凝块、霉团及变质有异味者，均应剔出。同时应检验装量是否准确，封口是否严密，瓶签有无差错不清等。出厂检验应逐瓶进行。
9有效期检验
按标签上注明的保存方法进行保存，在保存期内应定期进行pH值、无菌性、安全性、效力和物理性状的检验。如发现制品质量发生明显改变，则应重新确定制品的有效期。10样品保存
按NY7的规定执行。
11检验报告
每批制品的检验经过和结果，应详细记载在记录本上，填写检验报告单（见附录B），检验人员签字或盖章。
SC1002-92
附录A
活毒悬液毒力的测定
（补充件）
活毒悬液毒力的测定方法采用动物半数致死剂量(LDso)法。A1试验容器与试验鱼种的准备
按6.1条与6.2条规定准备试验容器和选择试验鱼种。A2鱼种攻毒
A2.1将待测毒力的活毒悬液用生理盐水作10倍连续梯度稀释成6个梯度（10-110-2、、10-6）。A2.2用灭菌注射器对鱼种进行腹腔或背肌注射活毒悬液，每一一梯度注射10尾鱼种，并分别饲养于各试验容器中。注射剂量为每尾0.3～0.5mL。同时设只注射生理盐水的10尾鱼种作对照。所有的鱼均在25～28℃水体中饲养15d。记录各容器中鱼种的死亡尾数，计算各梯度活毒悬液的鱼种累计死亡率。A3攻毒鱼种半数致死量计算
A3.1半数致死量：能使半数攻毒鱼种死亡的活毒悬液的稀释度，作为病毒致病能力判定的终点，通常以能使半数攻毒鱼种死亡的活毒悬液稀释度倒数的对数表示。A3.2计算
攻毒鱼种半数致死量（LDso）
=高于50%死亡的活毒悬液稀释度倒数的对数十距离比例×稀释系数的对数其中：
高于50%的死亡率百分数一50%
距离比例=高于50%的死亡率百分数一低手50%的死亡率百分数....(Al)
产品编号：
产品制造单位
PH检验
无菌检验
安全性检验
效力检验
物理性状检验此内容来自标准下载网
（逐瓶检验）
结果判定
检验单位：
附加说明：
SC100292
附录B
草鱼出血病组织浆灭活疫苗成品检验报告单（补充件）
检验日期
年月間
产品批号(或生产日期)：
检验方法
检验结果
普通肉汤培养
厌气肉肝汤培养
琼脂培养
试验鱼数
试验结果
试验鱼数
免疫保护率
不散结块
密封度
本标准由农业部水产司提出。
本标准由中国水产科学研究院长江水产研究所归口。本标准由浙江省淡水水产研究所负责起草。本标准主要起草人杨广智、叶雪平、罗毅志。508
（尾）
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检验人签名或盖章：
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