【国家标准(GB)】 食品卫生微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验

GB4789.28—1994
中华人民共和国国家标准
食品卫生微生物学检验
蜡样芽胞杆菌检验
Microbiological examination of food hygieneExaminationof Bacillus cereusGB4789.14—1994
1主题内容与适用范围
本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。2引用标准
GB4789.2食品卫生微生物学检验菌落总数测定GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料
3.1温箱：36±1℃。
3.2普能冰箱。
显微镜。
恒温水浴46土1℃。
天平。
电炉。
吸管：1mL，10mL。
载玻片。
均质器或乳钵。
3.10L型涂布棒。
灭菌刀，剪，镊子。
三角瓶：容量500mL。
培养基和试剂
肉浸液肉汤培养基：GB4789.28中4.1。4.2
酪蛋白琼脂培养基：GB4789.28中4.65。4.3
动力-硝酸盐培养基：GB4789.28中4.72。4.4
缓冲葡萄糖蛋白陈水：GB4789.28中3.4。4.5
血琼脂培养基：GB4789.28中4.6。3%过氧化氢溶液。
甲萘胺-乙酸溶液。
4.8对氨基苯碘酸-乙酸溶液。
革兰氏染色液：GB4789.28中2.2。4.9
4.10甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂培养基：GB4789.28中4.64。4.11
0.5%碱性复红染色液：GB4789.28中2.8。4.12木糖-明胶培养基：GB4789.28中4.66。5操作步骤
中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施
GB 4789.28—1994
蜡样芽胞杆检验程序下：
6操作步骤
6.1菌数测定
以无菌操作将检样25g（mL）（按GB4789.2测定），用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-～10的稀释液。取各稀释液0.1mL，接种在两个选择性培养基一甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂培养基上，用L形棒涂布于整个表面，置36土1℃温箱培养基12～20h后选取适当菌落数的平板进行计数，蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色（表示不发酵甘露醇）周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。计算后，从中挑取5个此种菌落做证实试验。根据证实为蜡样芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克（或毫升）样品中含蜡样芽胞杆菌数，例如MYP平板的可疑菌落数为25个，取5个鉴定，证实为4个，乘上稀释倍数（如10*），再乘上1g（或mL）检样数（取的是0.1mL样）则为：
25×4/5×10*×10=2×10
6.2分离培养
取检样或稀释液划线分离培养于选择性培养基（MYP）上，置37℃培养12～20h，挑取可疑的蜡样芽胞杆菌菌落（见6.1）接种于肉汤和营养琼脂做成纯培养，然后做证实试验。
6.3证实试验
6.3.1形态观察
本菌为革兰氏阳性大杆菌，宽度在1μm或1μm以上，芽胞呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。6.3.2培养特性
本菌在肉汤中生长混浊，常微有菌膜或壁环，振摇易乳化；在普通琼脂平板上生成的菌落不透明、表面粗糙、似毛玻璃状或融蜡状，边缘不齐。6.3.3生化性状及生化分型
6.3.3.1生化性状
本菌有动力：能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶；过氧化氢酶试验阳性；溶血；不发酵甘露醇和木糖；常能液化明胶和使硝酸盐还原；在厌氧条件下能发酵葡萄糖。6.3.3.2生化分型
蜡样芽胞杆菌可根据对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化性状的试验，将该菌分成不同的型别，见表1。表1蜡样芽胞杆菌生化分型
柠檬酸盐利用
」硝酸盐还原
中华人民共和国卫生部1994—03—18批准+
生化试验
淀粉水解
明胶液化bZxz.net
V-P反应
1994—09—01实施
GB4789.281994
与类似菌鉴别
本菌与其他类似菌的鉴别见表2。蜡样芽胞杆菌与其他类似菌的鉴别表2
炭疽芽胞杆
蕈状芽胞杆菌
苏云金芽胞
蜡样牙胞杆
巨大芽胞杆
过氧化氢酶
硝酸盐还原
酪蛋白分解
卵黄反应
葡萄糖利用
（厌氧）
甘露醇
对动物和人
假根样生长
对昆虫致病
的内毒素结
产生肠毒素
已知致病菌
注：+90%～100%的菌株阳性；-90%～100%的菌株阴性；土大多数菌株阳性；王大多数菌株阴性。
本菌在生化性状上与苏云菌芽胞杆菌极为相似，但后者可籍细胞内产生蛋白质毒素结晶加以鉴别。其检查方法如下：取营养琼脂上纯培养物少许，加少量蒸馏水涂于玻片上，待自然干燥后用弱火焰固定，加甲醇于玻片上，半分钟后倾去甲醇，置火焰上干燥，然后滴加0.5%碱性复红液，并用酒精灯加热至微见蒸气维持1.5min，移去酒精灯，将玻片放置半分钟，倾去染液，置洁净自来水充分漂洗，晾干，镜检，在油浸镜下检查有无游离芽胞和深染的似菱形的红色结晶小体（如未形成游离芽胞，培养物应放室温再保存1～2d后再检查），如有即为苏云金芽胞杆菌，蜡样芽胞杆菌检查为阴性。1994—09—01实施
中华人民共和国卫生部1994—03—18批准GB4789.28—1994
附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人白竟玉。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施
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