【国家标准(GB)】 食品卫生微生物学检验 产气荚膜梭菌检验

GB 4789.13—1994
中华人民共和国国家标准wwW.bzxz.Net
食品卫生微生物学检验
产气英膜梭菌检验
Microbiological examination offood hygieneExaminationofClostridiumperfringensGB4789.13—1994
1主题内容与适用范围
本标准规定了产气荚膜梭菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中产气荚膜梭菌的检验。2引用标准
GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料
3.1均质器。
3.2显微镜。
3.3温箱：36土1℃。
3.4水浴。
3。5厌氧培养装置：常温催化除氧式或碱性焦性没石子酸除氧式。3.6吸管：1mL，10mL。
3.8平皿。
3.9接种环或接种针。
培养基和试剂
疱肉培养基：GB4789.28中4.67。亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂（SPS）：GB4789.28中4.69。4.2
液体硫乙醇酸盐培养基（FT）：GB4789.28中4.70。4.3
动力-硝酸盐培养基：GB4789.28中4.72。4.4
4.5含铁牛奶培养基：GB4789.28中4.71。卵黄琼脂培养基：GB4789.28中4.68。4.6
0.1%蛋白陈水稀释剂：GB4789.28中4.86。4.8硝酸盐还原试剂：GB4789.28中3.17。4.9革兰氏染色液：GB4789.28中2.2。5检验程序
产气荚膜梭菌检验程序如下：
6操作步骤
6．1活菌计数培养
中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施
GB4789.13—1994
6.1.1按无菌操作称取食品检样25g（mL）放入均质器，加0.1%蛋白陈稀释剂225mL，低速搅动1～2min，使之均质化，作为1：10稀释液。6.1.2以上述1:10稀释的均质液按1mL加0.1%蛋白陈稀释剂9mL做成10~10的系列稀释液。
6.1.3吸取各稀释液1mL分别放入2个灭菌平血内。每个平血浇注约50℃的SPS琼脂15～20mL，仔细转动平血，使稀释液和琼脂充分混匀。6.1.4上述琼脂平板凝固后，倒置于厌氧培养装置内，于36土1℃培养24h6.1.5选取长有30～300个黑色菌落的平板，计数黑色菌落数。6.2确证试验
6.2.1由平板上任取10个黑色菌落，分别按种FT培养基，于36土1℃培养18～24h。
6.2.2用上述培养液涂片，革兰氏染色镜检。产气膜梭菌为革兰氏阳性粗大杆菌，其耐热株可能形成卵形芽孢，位于菌体中央或近端，其宽度一般不大于菌体。
6.2.3用接咱环（针）穿刺接种动力-硝酸盐培养基，于36土1℃培养24h，观察接种线的生长情况，判断有无动力。然后，滴加甲萘胺液和对氨基苯碘酸液各0.5mL，观察硝酸盐是否被还原。产气荚膜梭菌无动力，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。
6.2.4取生长旺盛的FT培养液1mL接种于含铁牛乳培养基，在46℃水浴中培养2h后观察有无“暴烈发酵”现象，5h内发酵者为阴性。产气荚膜梭菌发酵乳糖，凝固酪蛋白并大量产气，呈“暴烈发酵”现象，但培养基不变黑。6.2.5用接种环取FT培养液点种于卵黄琼脂平板（每张平板至少可接种10点），于36土1℃厌氧培养24h，观察接种点的变化。产气英膜梭菌产生卵磷脂酶，分解卵黄中的卵磷脂，接种点的底部及周围形成乳白色的混浊带。6.3菌数计算
根据黑色菌落的计数（6.1.5）和确证试验的结果（6.2），计算每克（毫升）食品检样的含菌数。
例如：10稀释液的平板长有黑色菌落100个，而供做确证试验的10个菌落中有7个被确证为产气荚膜梭菌，则每克（毫升）食品检样所含产气英膜梭菌数为：
100×0.7×10=7×10
附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由卫生部兰州生物制品研究所负责起草。本标准主要起草人王成怀。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施
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