【国家标准(GB)】 食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验

GB4789.11—1994
中华人民共和国国家标准
食品卫生微生物学检验
溶血性链球菌检验
Microbiological examination of food hygieneExaminationofStreptococcushemolyticusGB4789.11—1994
主题内容与适用范围
本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球的检验。2引用标准
GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料
3.1温箱：36±1℃。
3.2水浴：36±1℃。
显微镜。
离心机。
试管架。
灭菌平血。
灭菌小试管。
载玻片。
灭菌吸管：1mL、10mL。
灭菌镊子。
均质器。
酒精灯。
3。13接种环。
4培养基和试剂
4.1葡萄糖肉浸液肉汤：按GB4789.28中4.1规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4.2肉浸液肉汤：按GB4789.28中4.1规定。4.3匹克氏肉汤：按GB4789.28中4.62规定4.4血琼脂平板：按GB4789.28中4.6规定。4.5人血浆。
4.60.25%氯化钙。
4.7灭菌生理盐水。
4.8杆菌肽药敏纸片（含0.04单位）。5检验程序
中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施
GB4789.11—1994
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6.1样品处理
称取25g固体检样；称取25mL液体检样，加入225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
6.2一般培养
将上述混悬液吸取5mL，接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36土1℃培养24h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。6.3形态与染色
本菌呈球形或卵圆形，直径0.5～1Hm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者20～30个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。6.4培养特性
该菌营养要求较高，在普通培养基上生长不良，在加有血液、血清培养基中生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5～0.75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2～4mm界限分明、无色透明的溶血圈。
6.5链激酶试验
致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶（即溶纤维蛋白酶），此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入18～24h36土1℃培养的链球菌培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL（如氯化钙已潮解，可适当加大至0.3%～0.35%），振荡摇勺匀，置于36土1℃水浴中10min，血浆混合物自行凝固（凝固程序至试管倒置，内容物不流动）。然后观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。草酸钾人血浆配制：草酸钾0.01g放入灭菌小试管中，再加入5mL人血，混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。6.6杆菌肽敏感试验
挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上，于36士1℃培养18～24h，如有抑菌带出现即为阳性。同时用已知阳性菌株作为对照。附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由北京市卫生防疫站负责起草。本标准主要起草人刘以贤。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施
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