【国家标准(GB)】 动物源产品中聚醚类残留量的测定

ICS 65. 020. 30
中华人民共和国国家标准
GB/T20364—2006
动物源产品中聚醚类残留量的测定Determination of polyether ionophore residues in products of animal origin2006-05-25发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准花管理委员会
2006-09-01实施
本标准的附录 A为资料性附录
本标推由山东省质量技术监督局提出并归口。GB/T20364—2006
本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局、山东省质量技术监督局。本标准主要起草人：林黎明、张鸿伟、梁增辉、士岩.孟兆宏。http：//foodmate.ne1范围
动物源产品中聚醚类残留量的测定方法一液相色谱-串联质谱法
GB/T20364—2006
本标准规定了动物源产品中能菌素、盐索、甲基盐霉素3种聚醛类残留量液相色谱-串联质谱的测定方法。
本标准适用于禽、兔等动物源产品中奠能菌素、盐每素、甲基盐毒素残留的确证和定量测定2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括误的内容）或您订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的五复性和再现性GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法（GB/T6682-1992，neqISO3696：1987）3原理
试样中骤醚类残留，采用异辛烷提取，提取液用硅胶柱净化。液相色谱-串联质谱仪测定·外标法定量。
4试剂和材料
4.1水：应符合GB/T6682中一级水的规定。4.2异辛烷:分析纯。
4.3甲醇：液相色谱级。
4.4二氯甲烷分析纯。
4.5甲醇-二氯甲烷(1十9)：甲醇、二氮甲烷按体积比1：9混勾。4.6无水硫酸钠：分析纯，500℃灼烧4h.置于干爆器中备用。4.7甲醇-水（13十2)：中醇、水按体积比13：2混勾。4.8莫能菌素、盐荐素、甲基盐霉素标准品：纯度≥99%：4.93种聚醚类标准储备溶液：200μg/ml。分别准确称取适量的莫能菌素、盐霉素和甲基盐霉素标准品,用甲醇配成 200 μg/mL 的标准储备溶液(4℃避光保存可使用 6个月）。4.103种案醚类标准中间溶液：10μg/mL。分别准确量取适量的标准储备溶液（4.9）.用甲醇-水(4.7)稀释成10μg/ml.的标准中间溶液(4℃避光保存可使用1个月）。4.113种聚醚类混合标准工作溶液：准确量取适量的标准中间溶液（4.10),用甲醇-水（4.7)配制成浓度系列为10.0ng/mL.25.0ng/mL、50.0ng/mL，100.0ng/mL.250.0ng/ml..500.0ng/mL的案醚类混合标准工作溶液（4℃避光保存可使用1周）。4.123种聚醚类混合标准添加溶液：100ng/mI.。准确量取适量的聚醛类混合标准中间游液（4.10），用甲醇-水（4.7）稀释成100ng/mL的聚醚类标准添加溶液（4℃C避光保存可使用1周）。5仪器
5.1液枯色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。1
GB/T 20364—2006
5.2均质器。
5.3涡流混勾器。
5.4旋转蒸发仪。
5.5固相萃取装置。
5.6氮吹仪。
5.7离心机：转速4000r/min。
5.8樂四氟乙烯离心管：50ml
5.9固相萃取硅胶柱：500mg，3mL。5.10移液器：200μL、1000μL、5000μL5.11三角烧瓶：50ml。
分析天平：感量0.！mg和0.01g各一台。5.12
5.13一次性注射式滤器：配有0.45#m微孔滤膜。5.14样品瓶：2mL.带聚四氟乙烯旋盖。6试样制备与保存
6.1试样制备
从原始样品中取出部分有代表性样品，经高速组织捣碎机均匀捣碎，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，装人清洁容器内，加封后作出标记，一份作为试样；·份作为留样。6.2试样的保存
试样应在一20℃条件下保存。
7测定步骤
7.1标准曲线制备
制备混合标准工作液（4.11），浓度系列分别为10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL100.0ng/mL、250.0ng/mL、500.0ng/mL（分别相当于测试样品含有2.0μg/kg、5.0μg/kg、10.0μg/kg、20.0μg/kg、50.0μg/kg、100.0μg/kg日标化合物）。按7.4的规定测定并制备标准曲线，7.2提
称取5.0g试样，置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加人15mL异辛烷，均质3min，另取10mt.异辛烷冲洗刀头，合并于上述离心管中，涡流混勾，振荡30s，于离心机上以35001/mnin的速率离心3min，转移上清液于50mL三角烧瓶中。离心残渣用10ml.异辛烷再提取次，将上清液合并于上述三角烧瓶中。
7.3净化
于硅胶萃取柱上加人灼烧后的无水硫酸钠1.0，用5mL异辛烷润湿，然后将三角烧瓶中的提取液缓慢加人到举取柱上，施以适当压力，使其以3mL/min的速度流出，注意不得使柱子流于，而后用15ml.二氯甲烷以2mL/min的速率淋洗萃取柱，奔去淋洗液，待二氯甲烧流尽后再加压冲柱0.5min使萃取柱中残存的二氯甲烷充分流出。再加入甲醇-二氯甲烷（4.5）15ml.,以1mL/min的速率洗脱收集洗脱液，于40℃减压蒸发至近下，氮气吹干，准确加人1mL甲醇-水溶液（4.7）溶解残渣，涡流混勾后，用一次性注射式滤器过滤至样品瓶中，液相色谱-串联质谱仪测定7.4测定
7.4.1液相色谱条件
a）色谱柱：Cis柱（可用Intersil0Ds-3，粒径5μm，柱长150mtn，内径4.6mm或相当者）；b）流动相：甲醇+1%甲酸溶液(梯度洗脱见表1)；2
时间/min
流速:0. 9 mL/min
柱温：26℃
进样量：10 μL。
质谱条件
离了源;电喷窦离子源;
扫描方式：正离子扫描：
检测方式:多反应监测；
电喷雾电压：5500V；
雾化气压力:0.344MPa，
气帘气压力：0.241MPai
辅助气压力：0.344MPa;
离子源温度：400℃；
甲醇/（%）
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压，见表2。GB/T 20364—2006
1%甲酸溶液/(%）
表 23 种聚醚类的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去族电压名
莫能菌素bzxz.net
盐毒素
甲基盐囊紊
定性离予对/(m/z)
(母离子/子离子）
692.9/479.2
692,9/461.2
773,1/431.2
773.1/513.3
787.5/431,2
787.5/513.3
液相色谱-串联质谱测定
定量高子对/(m/ z)
(母离子/子离子)
692.9/479.2
773.1/431.2
787.5/431.2
碰撞气能量/cV
去熹电压/V
用混合标准工作液(4.11)分别进样，以蜂面积为纵坐标，工作液浓度(ng/ml.)为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中3种目标化合物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下,3种目标化合物的参考保留时间见表3。3种目标化合物标准品的总离子流图和选择离子流图参见附录 A中的图 A. 1、图 A, 2。表 3 3 种聚醛类标准品的参考保留时间名
莫能菌素
盐斑素
甲基盐毒素
8结果计算
试样中每种案醚类残留量按式(1)计算：X=cx
品伙伴网httn：
ree dmo+ ene
保留时间/tmin
GB/T20364—2006
式中：
-试样中被测组分残留量，单位为微克每干克（μg/kg）：X
-从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mI.)：V—试样溶液定容体积,单位为毫升(mL)；m—试样溶液所代表的质量，单位为克(g)。注：计算结果应扣除空白值。
9检出低限(LOD)和定量限(LOQ）9.1检出低限(LOD)
莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素为1.0μg/kg。9.2 定量限(L0Q)
莫能菌素、盐素、中基盐霉素为5.0μg/kg。10精密度
精密度数据按GB/T6379的规定制定，其重复性和再现性的值以95%的可信度计算。10. 1或复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限（r），动物源产品中3种聚醚类残留含量范国及重复性方程见表3。如果差值超过重复性限(-)，应舍弃实验结果并重新完成两次单个试验的测定。10.2再现性
在再现性条件下，状得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限（R），动物源产品中聚类残留含量范围及再现性方程见表4。表4含量范围及重复性和再现性方程名称
莫能曲素
甲基盐霉素
含量范围/（μg/k区）
5, 0-~100
5, 0~100
注：为两次测定值的平均值。
重复性限r
r=0. 107 3+0. 149 8.
Igr=—0. 359 7+c. 736 7lg2
r=0. 315 9+0. 156 2.r:
方法二
液相色谱-质谱法
11范围
再现性限R
R-0. 316 9+0. 191 3.r
R-0, 424 2+ 0. 152 4t
IgR= —0. 509 5 +0. 815 6lgx:本标准规定了动物源产品中莫能菌素、盐霉紊2种聚醚类残留量液相色谱-质谱的测定方法。本标准适用丁声、禽肉及肝脏中莫能菌素、盐霉素线留量的测定。12规范性引用文件
同第2章。
13原理
GB/T 20364--2006
试样中真能菌素、盐需素残留，用异辛烷提取，提取液用硅胶柱净化。液相色谱-质谱仪测定，外标法定量。
14 试剂和材料
14.1水：应符合GB/T6682中一级水的规定。14.2异辛烷：分析纯。
14.3甲醇，液相色谱级。
14.4乙腈：液相色谱级。
14.5—氯甲烷：分析纯。
14.6甲醇-二氯甲烷（1+9)：甲醇、二氟甲烷按体积比19混匀。14.7无水硫酸：分析纯，500℃灼烧4h，置于干燥器中备用14.8中醇-水(13+2);甲醇、水按体积比132混匀。14.9莫能菌素,盐毒素标准品，纯度99%。14.10莫能菌素、盐霉紊标准储备溶液的制备：200μg/mL。分别准确称取适量的莫能菌素、盐霉素标准品，用甲醇配制成200g！mL的标准储备溶滋（4避光保存可使用6个月）。14.11莫能菌素，盐霉素标准中间溶液的制备：10\g/mL。分别准确量取适量的标准储备溶液(14.10）,用甲醇-水（14.8)稀释成10μg/mL的标准中间溶液（4℃避光保存可使用1个月）14.12莫能菌素、盐霉素混合标准工作溶液的制备：准确量取适量的标推中间游液(14. 11),用甲醇-水(14.8）配制成浓度系列分别为莫能菌素：50.0ng/ml、100.0ng/mi.、200.0ng/ml..400.0ng/ml.、1000.0ng/ml盐霉素：25ng/ml.,50ng/ml.、100ng/tnL，200ng/ml、500ng/mL的混合标准工作溶液（4℃避光保存可使用1周）。14.13莫能菌素、盐塞素标推添加溶液：100 μg/mL。准确量取适单的莫能菌素、盐霉素混合标准中间溶液(14. 11),用甲醇-水(14. 8)稀释成 100 ng/mL的案醚标准添加溶液(4℃避光保存可使用 1周）。15仪器
15.1液相色谱-质谱仪：配有电喷雾离子源。15.2均质器。
15.3涡流混勾器。
15.4旋转蒸发仪。
15.5固相萃取装置。
15.6氮吹仪。
15.7离心机.转速4000r/minc
聚四氟乙烯离心管;50 mL。
15.9固相萃取硅胶柱;500 mg,3 mL。15.10移液器:200 μL,1 000 μL、5 000 μL.。15.11三角烧瓶：50mL。
15.12一次性注射式滤器：配有 0.45μm微孔滤膜。15.13分析天平，感量0.1mg和0.01g各台15.14样品瓶：2ml.，带案四氟乙烯旋盖。5
GB/T 20364—2006
16 试样制备与保存
同第6章。
17测定步骤
17.1标准曲线制备
制备混合标准工作液（14.12)，奠能菌素浓度系列为50.0ng/mL、100.0ng/ml.、200.0ng/ml.、400.0ng/ml.、1000.0ng/mL；盐霉素浓系列为25ng/mL、50ng/ml.,100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL（分别相当于测试样品中含有10.0μg/kg、20.0ug/kg、40.0μg/kg、80.0μg/kg、200.0μg/kg的莫能菌素和5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、40μg/kg、100μg/kg的盐霉素）。按17.1的规定测定并制备标准曲线。
37.2提取
同7.2。
17.3净化
净化步骤同7.3，测定仪器改为液相色谱-质谱仪测定。17. 4测定
17. 4, 1液相色谱条件
色谱柱：Cra柱（可用IntersilODS-3，粒径5μm，柱长150mm：内径4.6mm或相当者）；a)
b）流动相：乙睛+0.1%甲酸溶液（90+10)，流速:0.8 mL/rnin;
d）柱温：35℃：
进样量：10 μl.。
17. 4. 2质谱条件
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描；
检测方式：选择离子监测！
d）毛细管电压：3000V，
c）干燥气流量：8.0L/min
喷嘴压力：35 Pa;
于燥气温度：350℃；
定性离子、定量离子、碰撞电压和增益，见表5。表5莫能菌素、盐霉素的定性离子、定量离子、碰撞电压和增益名
莫能菌素
盐番素
定性离子对/(m/z)
17.4.3液相色谱/质谱测定
定量离子对/（m/z）
碰撞电压/V
用混合标准T作液（14.12)分别进样，以峰面积为纵坐标，工作液浓度（ng/mI.)为横坐标。绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中莫能菌素、盐零素的响应值均应在仪器测定6
GB/T 20364—2006
的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，莫能菌素和盐需素的参考保留时间见表6。莫能菌素、盐素标准品的选择离子流和总离厂流图参见附录A中的图A.3，相应的质谱图参见附录A中的图 A. 4、图 A,5。
表6能菌素、盐霉素药物参考保留时间名称
莫能菌素
盐霉素
结果计算
同第8章。
19：检出低限（LOD)和定量限(LOQ）19.1检测低限(LOD)
莫能菌素为1.0μg/kg;盐莓素为2.0ug/kg。19.2定量限(LOQ)
莫能菌素为5.01g/kg；盐素为10.0μg/kg。20精密度
保留时间/min
精密度数据按GB/T6379的规定制定，其重复性和再现性的值以95%的可信度计算。20. 1直复性
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限（），动物源产品中莫能菌素、盐源素含量范围及重复性方程见表7。如果差值超过重复性限(r),应舍奔实验结果并重新完成两次单个试验的测定。20.2再现性
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限（R），动物源产品中莫能菌素、盐素含量范围及再现性方程见表7。表 7含量范围及重复性和再现性方程名
莫能萄素
盐每素
含量范画（ug/kg）
10--200
注；为两饮测定值的平均值，
重复性限r
(g-—-0. 608 7+0. 863 01gx
Igr- -0. 621 4+0. 887 4lgr :再现性限R
R—3, 428 5+0. 145 6.t
R=0. 55# 7±0. 128 7x
GB/T20364—2006
莫能菌素
盘霉素
3.48 mint
-4. 44 min:
甲基盐素
5.17tnin:
附录A
（资料性附录）
标准品串联质谱图和单级质谱图4. 44
图A.13种聚酵类标准品串联质谱总离子流图3. 48
莫能画豪（692.9/479.2）
a）莫能菌素
益素（773.1/413.2）
b）盐霉素
图 A,23 种骤类标准品申联质谱选择离子流图+品h伴威httn-//uww8
莫能菌素
盐霉素
）甲基盐霉素
图A2（续）
GB/T 203642006
甲基欣要意（75/43.2)）
莫能菌素、盐霉素标准品单级质谱选择离子流和总离子流图品伙伴网t：
eodmnene
GB/T20364—2006
莫能菌素单级质谱质谱图
盐霉素单级质谱质谱图
品khttn：//foodmate.ne
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。