【卫生行业标准(WS)】 血中游离原卟啉的荧光光度测定方法

中华人民共和国卫生行业标准
血中游离原叭啉的荧光光度测定方法BloodDetermination of free erythrocyteprotoporphyrin-Fluorometric method1生题内容与适用范围
WS/T 22Www.bzxZ.net
本标准规定了血中游离原叶啦的荧光光度测定方法。最低检测浓度为5g/100 mL。本标准适用于正常人和接触铅的工人血液中游离原吓啉的测定，2原理
用乙酸乙酯-乙鞍混合液破坏红细胞，使原叶啉溶出，再用盐酸萃取此溶液中的游离原啉，在激发光403nm，发射光605nm处显示其荧光谱峰，根据荧光强度逃行定量。3仅器
3.1930型荧光光度计，10mm荧光比色杯。3.2旋涡混合器。
3.3离心机。
3.4 1/10 方天平。
3.5刻度吸量管,1,2,5,10 mL。
3.6血红蛋白吸管。
3.7试管.10 mL,其塞。
3.8微型称量瓶。
3.9容量瓶,25mL,50mL。
3.10水泵。
4试剂
本标准所用试剂除另有说明者外，均为分析纯试剂。4.1实验用水：蒸馏水,或具有同等纯度的去离子水。4.2 盐酸,P2=1.19 g/mL。
4.3 乙酸乙酯-乙酸混台液(4+1)。4.4盐酸溶波，0.5mol/1。
4. 5生理益水,氯化钠 8. 5 g/IL.。4. 6硅藻土生理盐水悬浮液,25 g /L.。4.7原叶啉标准溶液：
4.7.1储备液：用1万分之一的天平精确称取1.25mg原吓啉，加浓盐酸约2.5ml.，待原溶解后，转入25mL容量瓶中，用重蒸水淋洗称量瓶，并入容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液1mL50原叭啉（如为原叶啉钠盐或原吓啉二甲酯则分别应称取1.35mg和1.28mg）。中华人民共和国卫生部1996-10-14批准1997-05-01实施
WS/T 22—1996
4.7.2应用液：取储备液0.1mL置50mL容量瓶中，用乙酸乙酯-乙酸混合液稀释至刻度。此溶液1mL=0.1原啉。
4.8质控样：用标准血样、接触者混合血样或加标孤样作质控样。5采样、运输和保存
取末血20uL，直接注入到有0.1m生理盐水（4.5）的试管内，加塞，混勺，暂冰瓶中运送，于4℃冰箱内保存。
6分析步
6.1仪器操作条件
选用42书（581光电比色计滤光片，420nm）为激发光滤光片利55#（550工10nm）荧光滤光片。6.2标准曲线的绘制
6.2、1取6支10mL具塞试管，按下表配制标准管。FEP标准管的配制
生理盐水(4.5),mL
原叶淋标准应用液（4.7.2)，ml乙酸乙酯-乙酸混合液(4. 3),mlFEP含·g
6.2.2各管混合均何后，各加0.15mL2.5%硅藻土悬浮液（4.6）.3ml乙酸乙酯-乙酸混台液（4.3）。6.2.3各管分别置旋涡混合器上混合10~15s（或振荡30s）后.于20001/min离心15min.将上消液分别倒入另一清洁的10mL具塞试管中，各加4nL0.5mal/L盐酸（4.4），加塞，于旋涡混合器上混合20～30（或振荡3min），待分层后，用水泵（或毛细吸管）吸去上层有机溶剂，取下层盐酸溶液丁荧光光度计上以零管作参比进行荧光强度测定。6.2.4以FEP含量为横坐标，荧光强度为纵垒标绘制标准曲线。6.3样品测定
将血样从冰箱中取出+播匀，加1.0ml.乙酸乙酯-乙酸混合液（4.3),以下步骤按6.2.2和6.2.3条操作，从标准曲线上查出血样中FEP含鼠。在测定前后及每测定10个样品后，作-次质控样测定。7计算
按下式计算血中FEP的浓度：
X - ×1 000
式中：X—血中 FEP的浓度·ug/L:m
由标准曲线上在出血样中FEP含址，ug：V—分析时所取血样量,mL
8说明
8.1本标准的最低检测浓度为5μg/100mL血；测定范围0.001~0.1μgFEP/20μl.;批间精密度CV=4.3%~7.0%批内精密度CV=2.4%~5.3%(FEP范围0.01~0.1格g,n-6);准确度：l样加标平均回收率为96.6%（加标浓度：0.03.0.05,0.071g，m=6)。WS/T22—1996
2用荧光法测定血中FEP，经用正交试验进行最佳测定条件选择，得出最佳条件是：盐酸的浓度为8.2
0.5mal/L，乙酸乙酯-乙酸的比例为4十1硅藻上悬浮液用量为0.15mL，探摇时间为5min，现改用旋涡混匀器可减少为20～30s。全过程在30min内完成。8.3本法与荧光分光光度法对比，96个样本测得结果的相关系数r-0.9796，tr=47.02，p<0.001，提示相关系数有非常显著意义。但当血中FEP值低于20g/100mL时，荧光分光光度法的灵敏度高。本法应用于接触者(一般FEP>50 μg/100 mL)的监测是不受影响的。8.4对方法的可行性和检测效果作了验证，FEP值与空气中铅浓度呈现很好的剂量反应关系。8.5质控样用标准血样时可考察准确度与精密度。使用接触者血样或加标血样则可考察其精密度。附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由上海医科大学公共卫生学院负责起草。本标谁主要起草人屈家瑛。
本标准由卫生部委托技术归口单似中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负资解释。
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。