【地方标准】 鸡蛋中氯霉素残留检测方法-酶联免疫吸附测定(ELISA)法

四川省地方标准 DB51/T469-2005 鸡蛋中氯霉素残留检测方法 酶联免疫吸附测定（ELISA）法 Determination of Chloramphenicol Residues in Egg by Enzyme-linked Immunosorbent Assay 备案号：16720-2005 2005-03-03 发布 2005-06-01 实施 四川省质量技术监督局 发布 前言 为规范无公害畜产品鸡蛋的生产和销售过程，保障人民身体健康，维护生产者、经营者和消费者的合法权益，在总结国内外相关标准基础上制定本标准。本标准采用酶联免疫吸附测定法测定鸡蛋中氯霉素残留量。 本标准按 GB/T1.1-2000 和 GB/T1.2-2002 进行编制。 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口，由四川省质量技术监督局批准发布，由四川省兽药残留监控中心负责起草。主要起草人包括程江、彭莉、岳秀英等。 1 范围 本标准规定了鸡蛋中氯霉素残留检测的制样方法及酶联免疫吸附测定方法。 本标准适用于鸡蛋中氯霉素残留的快速筛查检测，检出限为0.3 μg/kg。 2 规范性引用文件 GB/T 1.1-2000 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则 GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要和原理 鸡蛋中残留的氯霉素经乙腈-水溶液提取，乙酸乙酯萃取，正己烷除脂后，采用酶联免疫吸附测定法进行检测。其原理为抗原抗体竞争反应：酶标板微孔包被偶联抗原，样品中的氯霉素与酶标记抗原竞争结合特异性抗体，通过洗涤去除未结合部分。 加入底物后酶催化生成有色产物，在450 nm处测定吸光度值，吸光度与样品中氯霉素浓度呈反比。 4 仪器 4.1 酶标仪（450 nm滤光片） 4.2 旋转蒸发仪 4.3 匀浆器 4.4 振荡器 4.5 冷冻离心机 4.6 微量移液器（20 μL、50 μL、100 μL、1000 μL；多道50–250 μL） 4.7 天平（感量0.01 g） 4.8 氮吹仪 5 试剂和材料 除特殊说明外均为分析纯试剂，水为符合 GB/T 6682 的二级水。 5.1 乙酸乙酯 5.2 乙腈 5.3 正己烷 5.4 0.5 mol/L 氯化钠溶液：称取氯化钠2.9 g，加水至100 mL。 5.5 乙腈-水溶液（84+16） 5.6 氯霉素检测试剂盒，包括标准溶液（0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1 μg/L）、酶标板、特异性抗体、酶标记物、复溶液、洗涤液、底物溶液及终止液等。 6 测定步骤 6.1 试样制备 取匀浆后的供试样品作为供试试样。 6.2 提取与纯化 称取约5 g样品加入乙腈-水溶液（84+16），振荡提取后离心，取上清液加入氯化钠溶液与乙酸乙酯振荡萃取，分层后取有机相吹干。用复溶液溶解残留物后再经异辛烷处理，取水相用于ELISA测定。 6.3 试样测定（20℃–24℃） 使用前将试剂盒室温平衡30 min以上并混匀各试剂。将标准品与样品加入微孔板，每个样品做平行实验。加入氯霉素特异性抗体工作液后封板，于37℃条件下进行反应（后续步骤未完整识别）。