【国家标准(GB)】 婴幼儿配方食品和乳粉 胆碱的测定

GB/T5413.20—1997
本标准参照瑞士雀巢公司的方法前
本系列标准从实施之日起，代替GB5413一85。本标准由中国轻工总会提出。
本标准出全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位：雀巢（中国）投资服务有限公司、国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位：卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司。
本标准主要起草人：张福才。
中华人民共和国国家标准
婴幼儿配方食品和乳粉
胆碱的测定
Milk powder and formula foods for infant and young childrcn-Determination of choline
本标准规定了胆碱的测定。
本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中胆碱的测定，本方法最低检测限度约为2mg/100g。2方法原理
试样经酸解，过滤，氧化后，比色测定3试剂
GB/T5413.20—1997
代替GB5413--85
所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.10.05mol/I.T缓冲液（pII8.0)：含质量分数0.05%的苯酚。在注入约5001mL蒸馅水的100GmL容量瓶中溶入6.057g三羟甲基氨基甲烷和0.5g苯酚，再用蒸馏水稀释至刻度。如需要可用6mol/L的盐酸调pH至8.03.2用丁酶反应的发色剂
在一个50mL容量瓶内溶入7.81mg胆碱氧化酶（12.8U/mg），1.31mg过氧化酶（190U/mg）和7.5mg1-氨基安替比林，用Tris缓冲溶液(3.1)稀释至刻度。3.3标准溶液：含胆碱气氧化物250μg/mL。在100ml.容量瓶中溶入23mg肌碱酒石酸氢盐，用蒸馏水稀释至刻度。用刻度吸管吸取该溶液10mL于100mL容量瓶中并用蒸馏水稀释至刻度。3.4氢氧化钠溶液：质量分数为60%3.5盐酸：c（HCl)为3mol/L.。
3.6盐酸：c(HCI)为Imol/L。
4仪器
带用实验室仪器及：
4.1回流抽提器。
4.2层析柱，长25cm，内径1cm。4.3分光光度计。
国家技术监督局1997-0528批准
1998-09-01实施
5操作步骤
GB/T5413.20-—1997
5.1准备试样
用混合或研磨的方法将样品均勾化，以0.01g的精确度准确称量样品，使其胆碱含量约为1-~10mg（以氢氧化物计算）。
5.1.1固体样品
称取5g混合均匀的样品于250mL的平底磨口烧瓶中，加入30mL盐酸（3.6），搅拌。5.7.2液体样品
称取20g混合均匀的样品于250m山平底磨口烧瓶中，加入10mmL盐酸（3.5），搅拌。5.2水解
将装有样品的容器与回流冷凝器连接，在70水浴中加热5h，同时磁力搅拌。冷却。用氢氧化钠溶液（3.4）调pH3.4-~3.6。若必要的话再次冷却，并转入50mL容量瓶中，用蒸馅水稀释至刻。5.3过滤
过滤水解液（5.2）。滤液应是澄清的：如果不游清，通过0.45um的滤膜再次过滤如果因样品的性质得不到澄消滤液，或者过滤困难，建议调pH值至44.5，而不是3.4~3.6（见5.2)
5.4酶反应
每个试准备3支试管（A，B,C)，按表1加入试剂。表1
试管A
待分析滤液
蒸馅水
发色剂
试剂空白
试管B
液空白
用密封保护膜盖住试管，振荡。把试管置于37C水浴中保温反应10min。5.5比色测定
调整分光光度计波长至505nm.用蒸馏水作空白。试管C
5.6标准曲线
用刻度吸管移2，4，6，8mL标准溶液（3.3）于4支10mL的容量瓶内，用蒸馏水稀释至刻度。ml
准备6支试管，一个试管用作试剂空白（A），另五支试管由1至5综号，分别用于标准溶液和标准溶液的四个稀释度。按表2加入试剂。试剂
稀释度1（50μg/mL）
稀释度2（100gg/ml）此内容来自标准下载网
稀释度3（150g/mL）
稀释度4（200mg/ml）
标准熔液（250ug/mL）
蒸馏水
发色剂
GB/T 5413.201997
用密封保护膜盖住试管，振荡，置试管于37C水浴中保温反应10min，然后按5.5以后的步骤操作。6分析结果的表述
6.1净透光率的计算
通常非新鲜配制的试剂会产生轻微的颜色，且由于水解作用滤液也不是无色的，为了除去这些干扰因素，应从全透光率中减去各自的空白透光率(管A和管B)。A-Ao-Au-Ar
式中A—净透光率：
Aut—全透光率（管C)：
A——试剂透光率管A）：
A—抽提液透光率（管B）。
A和A不应大于全透光率的20%，对于标准曲线，A=0。6.2结果的计算
(1）)
在标准曲线上查出净吸光值的位置.并记下相应的浓度，以每100g样品中胆碱氢氧化物的毫克数表示的胆碱含量，按式（2)计算：样品中胆碱的含量（mg/100g）==×V×100mX1000
式中：c——白标准曲线上查得的胆碱浓度·ug/mL；V—水解液被稀释的体积(通常为50mL)，mL：m
7允许差
-样品的质量，g。
（2）
用同一方法对同一样品，在同样操作条件下（同一操作者，司样的仪器，同一实验室，较短的时间间隔），测得的两次独立结果差值不应超过两次结果平均值的8%，87
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。