【国家标准(GB)】 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素K1的测定

GB/T5413.10-1997
在婴幼儿配方食品和乳粉中维生素K1的含量较低，且在碱性条件下易分解。本标准给出的反相高压液相色谱法，是在参考了大量国内外文献的基础上，经过反复实验而确定的，解决了上述问题，方法快速、准确。
本系列标准从实施之日起，代替GB5413-85。本标准由中国轻工总会提出。bzxz.net
本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位：国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位：卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢（中国）投资服务有限公司。本标准主要起草人：杨金宝、王芸、王心祥。259
中华人民共和国国家标准
婴幼儿配方食品和乳粉
维生素K的测定
Milk powder and formula foods for infant and young children-Determination of vitamin K, content范围
本标准规定了用液相色谱法测定维生素K,的方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中维生素K，的测定。2方法提要
GB/T 5413. 10--- 1997
代替GB5413-85
样品经酶水解后，用石油醚萃取，蒸发溶剂，浓缩后的样品进行高压液相色谱测定，以乙腈-甲醇-水为流动相，UV检测器，于270nm波长下，定量维生素K1。3试剂
所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1 高峰氏淀粉酶(Taka-Diastase)。3.2磷酸缓冲溶液,pH=7.8。
溶解 2. 78g 磷酸二氢钠和 25. 6g磷酸氮二钠在 1L 水中。3.3脂酶：每毫克蛋白不得少于2300单位。:3.4氢氧化钠溶液：c(NaOH)为10mol/L。溶解400g氢氧化钠颗粒在1L水中。3.5氯化钠溶液：饱和。
3.6乙醇：体积分数为95%。
3.7 石油醚。
3.8无水硫酸钠。
3.9正已烷：色谱纯。
乙腈：色谱纯。
甲酵：色谱纯。
3.12水：色谱纯。
3.13标准溶液
3.13.1标准贮备液：浓度为2.5mg/mL。准确地称取25mg维生素K，于10mL容量瓶中，用正已烷定容。3.13.2标准工作溶液，浓度为0.25mg/mL。吸取1mL标准贮备液于10mL容量瓶中，用正已烷定容。国家技术监督局1997-05-28批准260
1998-09-01实施
4仪器
常用实验室仪器及：
4.1分液漏斗：500mL。
4.2旋转蒸发器。
4.3恒温水浴振荡器。
4.4高压液相色谱仪：带紫外检测器。GB/T 5413.10-1997
4.5色谱柱：25cm×4.6mm，Cg或具同等性能的色谱柱。5操作步骤
5.1样品处理
5.1.1含淀粉的样品
准确称取10g样品，放入500mL平底烧瓶中，加入1gTaka淀粉酶（3.1），再加入50mL45～50℃的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45℃烘箱内30min。5.1.2不含淀粉的样品
推确称取10g样品于500mL三角瓶中，加入75mL水，均质。5.2测定液的制备
5.2.1于上述处理过的样品溶液中加入50mL磷酸缓冲溶液（3.2)和1.5～2.0g脂酶（3.3），于37℃水浴上连续振荡 1h。
5.2.2取出，加入5mL氢氧化钠溶液（3.4）。5.2.3定量地转移上述溶液于一个500mL分液漏斗中，加入25mL饱和氟化钠溶液（3.5）和50mL乙醇（3.6），充分混合。
5.2.4加入100mL石油醚（3.7），加塞振摇2min。小心地去掉塞子，加入另外50mL乙醇（3.6），静置分层，上层为有机相,中层为脂肪酸层，下层为水相。5.2.5放出水相和脂肪酸层于另一个500mL分液漏斗中。再次用100mL石油髓（3.7)萃取，静置分层,弃去水相，合并醚相。
5.2.6用蒸馏水洗涤石油醚相,直到醚相为中性。5.2.7将石油醛通过无水硫酸钠（3.8）进入到一个500mL平底烧瓶中，在旋转蒸发器上50℃下蒸发石油醚至近干。
5.2.8用石油醚（3.7)转移残留物到一个10mL试管中，用氮气吹于。准确加入1mL.正己烷，充分振荡溶解残留物，得到待测溶液。
1样品中的脂肪小于 4时,用此量脂酶；如大于 4g，可多加一些脂酶,以使脂肪水解完全。2最后制备的样品必须效在冰箱中冷却，以析出脂舫。3在分层后，必须小心地放出水相及脂肪酸层，否则会增加样品的干扰物质。5.3色谱分析条件
流动相：乙腾：甲醇：水70：22：8。流速：2.OmL/min。
柱温：40℃。
检测器波长：270nm。
记录纸速度：0.5cm/min。
进样体积：25μL。
分析结果的衰述
GB/T 5413.10—1997
样品中维生素K，含量(mg/100g）=（Hs/H）×cBms xVs
式中：Hs样品中维生素K,峰高，HB—标准工作液中维生素 K, 峰高；Cg-—标准工作液维生素 K,的质量浓度,mg /mL,Vs——样品体积，mL；
ms—样品的质量，g。
允许差
两次测得结果的最大偏差不得超过含量的10%262
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