【国家标准(GB)】 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B6的测定

GB/T5413.13-1997
维生素B。的测定有化学法、微生物法、分光光度法、气相色谱法等，本标准给出的反相高压液相色谱法，是在参阅了有关国内外资料的基础上，经反复实验而确定的，具有快速、经济、准确度高的优点。本系列标准从实施之日起，代替GB5413—85。本标准由中国轻工总会提出。
本标摊由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位：国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位：卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢（中国）投资服务有限公司。本标准主要起草人：杨金宝、来明、王芸、刘波。273
中华人民共和国国家标准
婴幼儿配方食品和乳粉
维生素B6的测定
Milk powder and formula foods for infant and young children-Determination ot vitamin B, content范圈
本标准规定了用反相液相色谱法测定维生素B。的方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中维生素B的测定。2方法提要
GB/T 5413.13—1997
代替GB5413--85
样品经热水萃取等前处理后，经C1.色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量维生素B。（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)的含量。
3试剂
所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3. 1 高蜂氏淀粉酶(Taka-Diastase)。3.2盐酸溶液,c(HCI)为5. 0mol/L,0.1mol/L。3.3氢氧化钠溶液，c(NaOH)为5.0mol/L、0.1mol/L。3.4冰乙酸：优级纯。
3.5无水甲醇：色谱纯。
3.6辛烷磺酸钠：优级纯。
3.7三乙胺：体积分数≥99.9%。3.8标准溶液
3.8.1吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺标准贮备溶液，浓度均为200μg/mL。准确称取吡哆醇，吡哆醛、吡哆胺标准品各20.00mg，用水溶解并定容至100mL容量瓶中。3.8.2吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺标准工作溶液，浓度均为2.0μg/mL。取1.0mL标准贮备溶液（3.8.1)，用水定容至100mL。4仪器
常用实验室仪器及：
4.1超声波振荡器。
4.2高压液相色谱仪：带荧光检测器。4.3色谱柱：VarianMCH-10μm30cm×4mm，Cia或具有同等性能的色谱柱。4.4酸度计。
国家技术监督局1997~05-28批准274
1998-09-01实施
5操作步骤
5.1样品预处理
5.1.1含淀粉的样品
GB/T 5413.13-—1997
精确称取5.0g样品，放入150mL锥形瓶中，加入0.5gTaka淀粉酶（3.1），再加入25mL45~50℃的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶内空气，盖上瓶塞，置45℃烘箱内30min，取出冷却至室温。5.1.2不含淀粉的样品
精确称取5.0g样品，放入150mL锥形瓶中，加入25mL60℃的蒸馏水，振摇，静置5～10min，使样品充分溶解并降至室温。
5.2测定液的制备
5.2.1用盐酸溶液（3.2)慢慢调节样品溶液的pH值至1.70,放置约1min，再用氢氧化钠溶液（3.3）调节样品溶液的pH值至4.50。
5.2.2将样品溶液转移到50mL容量瓶中，用蒸馏水反复冲洗锥形瓶，洗液合并于50mL容量瓶中，并用水定容至50mL。
5.2.3把上述容量瓶放入超声波水浴（4.1)中，振荡10min。5.2.4另取50mL容量瓶，上面放入三角漏斗和滤纸，把样品溶液倒入其中，自然过滤。滤液再经0.45um微孔滤膜加压过滤，用试管收集，即为样品待测液。5.3色谱条件
检测灵敏度：0.002AU/MV。Www.bzxZ.net
检测器条件：荧光激发波长E：293nm，发射波长Em：395nm。柱温：30℃。
流速：1.00mL/min
流动相：体积分数为5.0%的甲醇、0.20g/100mL辛烷磺酸钠、体积分数为0.25%的三乙胺水溶液，用乙酸调 pH一3.00。
5.4定量分析（外标法）
注射一定量的标准工作液（3.8.2)进入色谱仪，得到组分i的峰高（或峰面积）A；注射等体积的样品待測液进入色谱仪，得到组分讠的峰高（或峰面积）B。6分析结果表述
样品中维生素B。的含量(mg/100g）= X+ X+ X胺注：样品中维生素B。含量是各组分的含量之和。样品中各组分含量（mg/100g）=×B:×V×100m × A, X 1000
式中：B样品组分i的峰高或面积；A，———标准工作液中组分i的峰高或面积；Cc.标准工作液中组分i的质量浓度，ug /mLm—-样品的质量，g;
样品溶液体积，mL。
（1）
允许差
GB/T5413.13-1997
同一样品两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10%。276
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