【国家标准(GB)】 食品中环已基氨基磺酸钠的测定

ICS67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T5009.97—2003
代替GB/T13112—1991
食品中环已基氨基磺酸钠的测定Determination of sodium cyclamate in foods2003-08-11发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2004-01-01实施
GB/T5009.97—2003
本标准代替GB/T13112-1991《食品中环已基氨基磺酸钠的测定方法》。本标准与GB/T13112--1991相比主要修改如下：修改了标准中文名称，标准中文名称改为《食品中环已基氨基磺酸钠的测定》；按GB/T20001.4—2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》对原标准的结构进行了修改。
本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由广州市卫生防疫站、广东省卫生防疫站、卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准第一、二法主要起草人：张暖民、江月碧、吕澳生、粱立文、刘燕霞。本标准第三法主要起草人：杨祖英、崔宏、蒋罗章、焦淑婷、易再明。原标准于1991年首次发布，本次为第一次修订。688
1范围
食品中环已基氨基磺酸钠的测定GB/T 5009.97--2003
本标准规定了食品中环已基氨基磺酸钠的三种测定方法一一气相色谱法、比色法、薄层层析法。本标准气相色谱法及比色法适用于饮料、凉果等食品中环已基氨基磺酸钠的测定；薄层层析法适用于饮料、果汁、果酱、糕点中环已基氨基磺酸钠的含量测定。本标准检出限为4μg。
气相色谱法
第一法
2原理
在硫酸介质中环已基氨基磺酸钠与亚硝酸反应，生成环已醇亚硝酸酯，利用气相色谱法进行定性和定量。
3试剂
3.1正已烷。
3.2氯化钠。
3.3层析硅胶（或海砂）。
3.450g/L亚硝酸钠溶液。
3.5100g/L硫酸溶液。
3.6环已基氨基磺酸钠标准溶液（含环已基氨基磺酸钠，98%）：精确称取1.0000g环已基氨基磺酸钠，加人水溶解并定容至100mL，此溶液每毫升含环已基氨基磺酸钠10mg。4仪器
4.1气相色谱仪：附氢火焰离子化检测器。4.2旋涡混合器。
4.3离心机。
4.410μL微量注射器。
4.5色谱条件
4.5.1色谱柱：长2m，内径3mm，U形不锈钢柱。4.5.2固定相：ChromosorbWAWDMCS80目～100目，涂以10%SE-30。4.5.3测定条件
柱温：80℃；汽化温度：150℃；检测温度：150℃。流速：氮气40mL/min;氢气30mL/min;空气300mL/min。5试样处埋
5.1液体试样：摇匀后直接称取。含二氧化碳的试样先加热除去，含酒精的试样加40g/L氢氧化钠溶液调至碱性，于沸水浴中加热除去，制成试样。5.2固体试样：凉果、蜜饯类试样将其剪碎制成试样。689
GB/T5009.97-2003
6分析步骤
6.1试样制备
6.1.1液体试样：称取20.0g试样于100mL带塞比色管，置冰浴中。6.1.2固体试样：称取2.0g已剪碎的试样于研钵中，加少许层析硅胶（或海砂）研磨至呈于粉状，经漏斗倒人100mL容量瓶中，加水冲洗研钵，并将洗液一并转移至容量瓶中。加水至刻度，不时摇动，1h后过滤，即得试样，准确吸取20mL于100mL带塞比色管，置冰浴中。6.2测定
6.2.1标准曲线的制备：准确吸取1.00mL环已基氨基磺酸钠标准溶液于100mL带塞比色管中，加水20mL。置冰浴中，加入5mL50g/L亚硝酸钠溶液，5ml.100g/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30min，并经常摇动，然后准确加人10mL正已烷，5g氯化钠，摇勾后置旋涡混合器上振动1min（或振摇80次），待静止分层后吸出已烷层于10mL带塞离心管中进行离心分离，每毫升已烷提取液相当1mg环已基氨基磺酸钠，将标准提取液进样1uL～5μL于气相色谱仪中，根据响应值绘制标准曲线。6.2.2试样管按6.2.1自“加入5mL50g/L亚硝酸钠溶液···.”起依法操作，然后将试料同样进样1 uL～5μL，测得响应值，从标准曲线图中查出相应含量。7结果计算
见式(1)。
X=m×10×1000
m X VX 1 000
式中：
X一一试样中环已基氨基磺酸钠的含量，单位为克每千克（g/kg）；m—试样质量，单位为克（g）；V——进样体积，单位为微升（μL)；10—正已烷加人量，单位为毫升（mL）；m1-—测定用试样中环已基氨基磺酸钠的质量，单位为微克(μg)。计算结果保留两位有效数字。
8精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。第二法　比色法
9原理
.（1)
在硫酸介质中环已基氨基磺酸钠与亚硝酸钠反应，生成环已醇亚硝酸酯，与磺胺重氮化后再与盐酸蔡乙二胺偶合生成红色染料，在550nm波长测其吸光度，与标准比较定量。10试剂
10.1三氯甲烷。
10.2甲醇。
10.3透析剂：称取0.5g二氯化汞和12.5g氯化钠于烧杯中，以0.01mo1/L盐酸溶液定容至100 mLe
10.410g/L亚硝酸钠溶液。
10.5100g/L硫酸溶液。
10.6100g/L尿素溶液（临用时新配或冰箱保存）。10.7100g/L盐酸溶液。
GB/T5009.97—2003
10.810g/L磺胺溶液：称取1g磺胺溶于10%盐酸溶液中，最后定容至100mL。10.91/L盐酸萘乙二胺溶液。
10.10环己基氨基磺酸钠标准溶液：精确称取0.1000g环己基氮基磺酸钠，加水溶解，最后定容至100mL，此溶液每毫升含环已基氨基磺酸钠1mg，临用时将环已基氨基磺酸钠标准溶液稀释10倍。此液每毫升含环已基氨基磺酸钠0.1mg。11仪器
11.1分光光度计。bzxZ.net
11.2旋涡混合器。
11.3离心机。
11.4透析纸。
试样处理
同第5章。
13分析步骤
13.1提取
13.1.1液体试样：称取10.0g试样于透析纸中，加10mL透析剂，将透析纸口扎紧。放人盛有100mL水的200mL广口瓶内，加盖，透析20h～24h得透析液。13.1.2固体试样：准确吸取10.0mL经“6.1.2”处理后的试样提取液于透析纸中，以下操作按\13.1.1”项下进行。
13.2测定
13.2.1取2支50mL带塞比色管，分别加人10mL透析液和10mL标准液，于0～3℃冰浴中，加人1mL10g/L亚硝酸钠溶液，1mL100g/L硫酸溶液，摇匀后放人冰水中不时摇动，放置1h,取出后加15mL三氣甲烷，置旋涡混合器上振动1min。静置后吸去上层液。再加15mL水，振动1min，静止后吸去上层液，加10mL100g/L尿素溶液，2mL100g/L盐酸溶液，再振动5min，静置后吸去上层液，加15mL水，振动1min，静置后吸去上层液，分别准确吸出5mL三氯甲烷于2支25mL比色管中。另取一支25mL比色管加人5mL三氯甲烷作参比管。于各管中加人15mL甲醇，1mL10g/L磺胺，置冰水中15min，取出，恢复常温后加人1mL1g/L盐酸乙二胺溶液，加甲醇至刻度，在15℃～30℃下放置20min～30min，用1cm比色杯于波长550nm处测定吸光度，测得吸光度A及A，。13.2.2另取2支50mL带塞比色管，分别加10mL水和10mL透析液，除不加10g/L亚硝酸钠外，其他按\13.2.1”项下进行，测得吸光度As及A0。14结巢计算
见式（2）。
式中：
X×A-A×100+10、
m×A.-A..
×１000×１000
X一试样中环已基氨基磺酸钠的含量，单位为克每千克（g/kg）；m—-试样质量，单位为克(g)；
GB/T 5009.97—2003
V-—透析液用量，单位为毫升(mL)；c——标准管浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);A.—标准液吸光度；
Ao——水的吸光度;
A—试样透析液吸光度；
A。—不加亚硝酸钠的试样透析液吸光度。计算结果保留两位有效数字。
15精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。第三法薄层层析法
16原理
试样经酸化后，用乙醚提取，将试样提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开，经显色后，根据薄层板上环已基氨基磺酸钠的比移值及显色斑深浅，与标准比较进行定性、概略定量。17试剂
异丙醇。
正丁醇。
石油醚：沸程30℃~~60℃。
17.4乙醚（不含过氧化物）。
氢氧化胺。
无水乙醇。
氯化钠。
硫酸钠。
6mol/L盐酸：取50mL盐酸加到少量水中，再用水稀释至100mL。17.10
聚酰胺粉（尼龙-6）：200目。
环己基氨基磺酸标准溶液：精密称取0.0200g环已基氨基磺酸，用少量无水乙醇溶解后移入10mL容量瓶中,并稀释到刻度，此溶液每毫升相当于2mg环已基氨基磺酸，二周后重新配制（环已基氨基磺酸的熔点：169℃～170℃）。17.12展开剂
17.12.1正丁醇-浓氨水-无水乙醇(20+1+1。17.12.2异丙醇-浓氨水-无水乙醇（20十1十1）。17.13显色剂：称取0.040g溴甲酚紫溶于100mL50%乙醇溶液，用1.2mL0.4%氢氧化钠溶液调至pH8。
18仪器
吹风机。
层析缸。
玻璃板：5cmX20cm。
微量注射器：10μL。
玻璃喷雾器。
19分析步骤
19.1试样规取
GB/T5009.97—2003
19.1.1饮料、果酱：称取2.5g（ml）已经混合均匀的试样（汽水需加热去除二氧化碳），置于25mL带塞量筒中，加氯化钠至饱和（约1g），加0.5mL6mol/L盐酸酸化，用15、10mL乙醚提取两次，每次振摇1min，静止分层，用滴管将上层乙醚提取液通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中，用少量乙醚洗无水硫酸钠，加乙醚至刻度，混匀。吸取10.0mL乙醚提取液分两次置于10mL带塞离心管中，在约40℃水浴上挥发至于，加人0.1ml无水乙醇溶解残渣，备用。19.1.2糕点：称取2.5g糕点试样，研碎，置于25mL带塞量简中，用石油醚提取3次，每次20mL，每次振摇3min，弃去石油醚，让试样挥干后（在通风橱中不断搅拌试样，以除去石油醚），加人0.5mL6mol/L盐酸酸化，再加约1g氯化钠，以下按19.1.1自“用15、10ml乙醚提取两次.”起依法操作。19.2 测定
19.2.1聚酰胺粉板的制备：称取4g聚酰胺粉，加1.0g可溶性淀粉，加约14mL水研磨均勾合适为止，立即倒人涂布器内制成面积为5cm×20cm，厚度为0.3mm的薄层板6块，室温干燥后，于80℃干燥1h，取出，置于干燥器中保存、备用。19.2.2点样：薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器于板中间点4ul.试样液，两侧各点2μL、3uL环已基氮基磺酸标准液。
19.2.3展开与显色：将点样后的薄层板放人预先盛有展开剂（17.12.1或17.12.2）的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10cm以上时，取出在空气中挥于，喷显色剂其斑点呈黄色，背景为蓝色。试样中环已基氨基磺酸的量与标准斑点深浅比较定量（用17.12.2展开剂时，环已基氨基磺酸的比移值约为0.47,山梨酸0.73,苯甲酸0.61，糖精0.31）。20结果计算
见式(3)。
式中：
X=mlX1 000×1. 12 = 2. 8m×V101000
m × V2
X试样中环已基氨基磺酸钠的含量，单位为克每千克（或克每升)Lg/kg(或g/L)；m -试样点相当于环己基氨基磺酸的质量，单位为毫克(mg)；m-试样质量，单位为克(g);
Vi——加入无水乙醇的体积，单位为毫升（mL)；V.测定时点样的体积，单位为毫升(mL)10-测定时吸取乙醚提取液的体积，单位为毫升（mL）；-试样乙醚提取液总体积，单位为毫升（mL）；25-
1.12——1.00g环己基氮基磺酸相当环已基氨基磺酸钠的质量，单位为克（g）。计算结果保留两位有效数字。
21精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的28%。本标准可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精等成分。（3）
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