【国家标准(GB)】 食品卫生微生物学检验 副溶血性弧菌检验

ICS07.100.30
中华人民共和国国家标准
GB/T4789.7—2003
代替GB/T4789.7—1994
食品卫生微生物学检验
副溶血性弧菌检验
Microbiological examination of food hygiene-Examination of Vibrio parahaemol yticus2003-08-11发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2004-01-01实施
GB/T4789.7-2003
本标准对GB/T4789.7-1994《食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验》进行修订。本标准与GB/T4789.7--1994相比主要修改如下：按照GB/T1.1-2000对标准文本格式和文字进行修改。修改并规范原标准中的“设备和材料”。将本标准的适用范围修改为“本标准适用于动物性水产干制品、腌醉制生食动物性水产品、即食藻类食品、鱼糜制品等水产食品和水产调味品以及食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验”。本标准自实施之日起，GB/T4789.7—1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人：周桂莲、付萍、杨宝兰。本标准于1984年首次发布，1994年第一次修订，本次为第二次修订。48
1范围
食品卫生微生物学检验
副溶血性弧菌检验
本标准规定了副溶血性弧菌检验方法。GB/T4789.7—2003
本标准适用于动物性水产干制品、腌醉制生食动物性水产品、即食藻类食品、鱼糜制品等水产食品和水产调味品以及食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标谁达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.28—2003食品卫生微生物学检验染色法，培养基和试剂3设备和材料
3.1冰箱：0℃~4℃。
3.2恒温培养箱：36℃土1℃。
3.3显微镜：10×~100×。
3.4均质器或灭菌乳钵。
3.5架盘药物天平：0g~500g，精确至0.5g。3.6灭菌试管：16mm×160mm、15mm×100mm及相应的试管架。灭菌刻度吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具0.1mL刻度）。3.7
灭菌锥形瓶：500mL、200mL。
灭菌玻璃珠：直径约5mm。
灭菌培养皿：90mm。
1 mL注射器。
接种灯和接种环。
灭菌手术剪、镊子等。
3.14小白鼠：12g~15g。
4培养基和试剂
4.1氯化钠结晶紫增菌液：按GB/T4789.28-2003中4.39规定。4.2氯化钠蔗糖琼脂：按GB/T4789.28—2003中4.40规定。4.3嗜盐菌选择性琼脂：按GB/T4789.28--2003中4.41规定。4.43.5%氟化钠三糖铁琼脂：按GB/T4789.28—2003中4.42规定。4.5氯化钠血琼脂：按GB/T4789.28—2003中4.43规定。4.6嗜盐性试验培养基：按GB/T4789.28—2003中4.44规定。4.73.5%氟化钠生化试验培养基：按GB/T4789.282003中4.45规定。4.8革兰氏染色液：按GB/T4789.28--2003中2.2规定。49
GB/T4789.7--2003
4.9印基红试剂：按GB/T4789.282003中3.4规定。4.10靛基质试剂：按GB/T4789.28—2003中3.13规定。4.11V-P试剂：按GB/T4789.282003中3.4规定。5检验程序
副溶血性弧菌检验程序见图1。
样品25g（mL)+
225mL3.5%灭菌盐水，解碎
氧化钠结晶紫
增菌液100mL
涂片革兰氏染色镜检形态
6操作步骤
Bh~16h
生化试验
动物试验
氯化钠蔗精琼脂平板
和选择性琼脂平板
37C,18h~24h
3.5%氢化钠三粉铁料面
37℃18h~24h
略盐性试验
37℃，24h
6.1分离培养以无菌操作取检样25g（mL），加225mL3.5%灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化钠琼脂平板和嗜盐菌选择性琼脂平板各一个，同时取10mL，加人100mL增菌液中，置37℃8h～16h培养后，涂上述平板进行分离，于37℃18h～24h培养后取出观察。6.2挑取上述可疑菌落，转种3.5%氯化钠三糖铁斜面，37℃、24h观察结果。6.3涂片镜检：将三糖铁培养基反应可疑者（底层变黄葡萄糖产酸不产气，斜面不变乳糖蔗糖不分解，有动力，不产生硫化氢）进行涂片革兰氏染色镜检形态。6.4嗜盐性试验：将上述可疑培养物分别接种于不同浓度的盐陈水中，37℃24h培养后观察生长情况，在无盐和10%以上盐的陈水中不生长，在7%盐的陈水中生长良好者进行下列有关试验。6.5生化试验：分别接种各类生化培养基，置37℃，除V-P、靛基质、甲基红试验培养48h后加试剂观察外，其他均可在24h观察。具体内容见表1和表2。50
葡萄精产酸
葡萄糖产气
甘露醇bzxZ.net
硫化氢
甲基红
表1副溶血性弧菌的生化学性状
注：十阳性；一阴性十/一多数阳性，少数阴性。V-P
靛基质
赖氨酸
鸟氨酸
精氨酸
表2副溶血性弧菌主要性状与其他弧菌的鉴别称
副溶血性弧菌
V.parahaemolyticus
溶藻性弧菌
V.alginolyticus
O，雀乱弧菌
V.cholerae O,
非〇衢乱弧菌
V. cholerae non O.
拟态弧菌
V.mimicus
河弧菌
V.fluialis
创伤弧菌
V.uluificus
梅氏弧菌
V.metschnikouii
霍利斯弧菌
V.hollisae
V.damsela
葡萄糖产气
赖氨酸
截基质
鸟氮酸
阿拉伯胶精
GB/T4789.7-2003
B半乳糖#
无盐麟水
盐陈水/(%)
赠酸盐
注：+90%以上阳性；一90%以上阴性：d11%～89%阳性；（+）迟缓阳性：（d)11%~89%迟缓阳性。7动物试验
将上述各类反应的副溶血性弧菌接种3.5%氯化钠陈水，经37℃16h～18h培养后，小鼠腹腔注射0.3mL，观察2d～3d,将死亡小鼠进行解剖并做分离培养。51
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