【国家标准(GB)】 食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验

ICS07.100.30
中华人民共和国国家标准
GB/T4789.11-2003
代替GB/T4789.11-1994
食品卫生微生物学检验
溶血性链球菌检验
Microbiological examination of food hygiene-Examination of Streptococcus hemolyticus2003-08-11发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2004-01-01实施
GB/T4789.11—2003
本标准对GB/T4789.11—1994《食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验》进行修订。本标准与GB/T4789.11—1994相比主要修改如下：按照GB/T1.1—2000对标准文本的格式和文字进行修改。-修改并规范原标准中的“设备和材料”。本标准自实施之日起，GB/T4789.11—1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位：北京市卫生防疫站、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人：刘以贤、冉陆、付萍、姚景会。本标准于1984年首次发布，1994年第一次修订，本次为第二次修订。78
1范围
食品卫生微生物学检验
溶血性链球菌检验
本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。本标准适用于各类食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验。2规范性引用文件
GB/T4789.11—2003
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.28—2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料
3.1冰箱：0℃~4℃。
3.2恒温培养箱：36℃土1℃。
3.3恒温水浴锅：36℃土1℃。
显微镜：10×~100×。
3.5均质器或灭菌乳钵。
离心机：4000r/min。
架盘药物天平：0g~500g，精确至0.5g。3.8灭菌试管：10mmX100mm.16mmX160mm。3.9灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具0.1mL刻度）。灭菌锥形瓶：100mL。
灭菌培养血：直径90mm。
灭菌棉签、镊子等。
4培养基和试剂
4.1葡萄糖肉浸液肉汤：按GB/T4789.28—2003中4.1规定。在肉浸液肉汤内加人1%葡萄糖。4.2肉浸液肉汤：按GB/T4789.28—2003中4.1规定。4.3匹克氏肉汤：按GB/T4789.28—2003中4.62规定。4.4血琼脂平板：按GB/T4789.28—2003中4.6规定。4.5人血浆。
0.25%氯化钙。
4.70.85%灭菌生理盐水。
4.8杆菌肽药敏纸片（含0.04单位）。5
检验程序
检验程序见图1。
GB/T4789.112003免费标准下载网bzxz
葡萄糖肉没液肉汤
或匹克氏肉汤
链激酶试验
6操作步骤
6.1样品处理
25g(mL)+225mL灭菌生理盐水
36℃±1℃
杆菌肽敏感试验
观察落血
36℃±1℃
血平板
血平板（分纯培养）
革兰氏染色
按无菌操作称取食品检样25g（mL），加人225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。6.2培养
将上述混悬液吸取5mL，接种于50mL葡萄糖肉没液肉汤，或直接划线接种于血平板。如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36℃土1℃培养24h，接种血平板，置36℃士1℃培养24h，挑起艺型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6.3形态与染色
本菌呈球形或卵圆形，直径0.5m～1um，链状排列，链长短不一，短者4个～8个细胞组成，长者20个～30个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。6.4培养特性
该菌营养要求较高，在普通培养基上生长不良，在加有血液、血清培养基中生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5mm～0.75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2mm～4mm界限分明、无色透明的溶血圈。6.5链激酶试验
致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶（即溶纤维蛋白酶），此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。吸取草酸钾血浆0.2ml，加0.8ml灭菌生理盐水，混匀，再加人18h24h36℃士1℃培养的链球菌培养物0.5mL及0.25%化钙0.25ml（如氮化钙已潮解，可适当加大至0.3%~0.35%），振荡摇匀，置于36℃土1℃水浴中10min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动），然后观察凝固块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。80
GB/T4789.11—2003
草酸钾人血浆配制：草酸钾0.01g放人灭菌小试管中，再加入5mL人血，混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。
6.6杆菌肽敏感试验
挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上，于36℃士1℃培养18h～24h，如有抑菌带出现即为阳性，同时用已知阳性菌株作为对照。
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