【国家标准(GB)】 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验

ICS07.100.30
中华人民共和国国家标准
GB/T4789.5-—2003
代替GB/T4789.5—1994
食品卫生微生物学检验
志贺氏菌检验
Microbiological examination of food hygiene-Examination of Shigella
2003-08-11发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2004-01-01实施
GB/T4789.5—2003
本标准对GB/T4789.5—1994《食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验》进行修订。本标准与GB/T4789.5—1994相比主要修改如下：按照GB/T1.1一2000对标准文本的格式和文字进行修改。修改并规范原标准中的“设备和材料”。本标准自实施之日起，GB/T4789.5—1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位：江西省卫生防疫站、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人：何晓青、冉陆、付萍、杨宝兰、姚景会。本标准于1984年首次发布，1994年第一次修订，本次为第二次修订。34
1范围
食品卫生微生物学检验
志贺氏菌检验
本标准规定了食品中志贺氏菌的检验方法。本标准适用于各类食品和食物中毒样品中志贺氏菌的检验。2规范性引用文件
GB/T4789.5—2003
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.28--2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料
3.1冰箱：0℃~4℃。
3.2恒温培养箱：36℃士1℃，42℃。3.3显微镜：10×~100×。
3.4均质器或灭菌乳钵。
3.5架盘药物天平：0g~500g，精确至0.5g。3.6灭菌广口瓶：500mL。
3.7灭菌锥形瓶：500mL、250mL。3.8灭菌培养血：直径90mm。
3.9硝酸纤维素滤膜：150mm×50mm，$o.45μm。临用时切成两张，每张70mm×50mm，用铅笔划格，每格6mm×6mm。每行10格，分6行。灭菌备用。4培养基和试剂
4.1GN增菌液：按GB/T4789.28—2003中4.17规定。4.2HE琼脂：按GB/T4789.28—2003中4.21规定。4.3SS琼脂：按GB/T4789.28—2003中4.22规定。4.4麦康凯琼脂，按GB/T4789.28—2003中4.24规定。4.5
伊红美蓝琼脂（EMB)：按GB/T4789.28—-2003中4.25规定。4.6三糖铁琼脂（TSI)：按GB/T4789.28—2003中4.26、4.27规定。4.7葡萄糖半固体管：按GB/T4789.28-2003中4.31规定。4.8半固体管：按GB/T4789.28—2003中4.30规定。4.9葡萄糖铵琼脂：按GB/T4789.28—2003中3.8规定。4.10尿素琼脂（pH7.2)：按GB/T4789.28—2003中3.15规定。4.11西蒙氏柠檬酸盐琼脂：按GB/T4789.28—2003中3.5规定。4.12氰化钾KCN)培养基：按GB/T4789.28--2003中3.16规定。4.13氨基酸脱羧酶试验培养基：赖氨酸、鸟氨酸及对照培养基，按GB/T4789.28-2003中3.1235
GB/T4789.5-—2003
规定。
4.14糖发酵管：棉子糖、甘露醇、甘油、七叶苷及水杨苷，按GB/T4789.28-2003中3.2规定。4.155%乳糖发酵管：按GB/T4789.28—2003中4.32规定。4.16蛋白陈水、靛基质试剂：按GB/T4789.28—2003中3.13规定。4.17志贺氏菌属诊断血清。
5检验程序
志贺氏菌检验程序见图1。
25g+GN225mL
36℃±1c.6h~8h
HE琼脂或SS
TSI底层产酸，斜面产威，H,S-
不产气，无动力
血清学分型
生化分群试验
志贺氏茵属
分群及分型结果
36C±1C,18h～24h
挑取可疑苗济
TSI,葡半固体
进一步的生化试验
葡萄糖铵试验、西裁氏柠橡酸盐、赖氨酸、尿素、氰化钾（KCN）、水杨苷和七叶苷葡葡糖铵+
或任何其他阳性结果
非志贺氏菌
麦康凯或EMB
非如左述的
各种反应结果
非志贺氏酉
6操作步骤
6.1增菌
GB/T4789.5-—2003
以无菌操作取检样25g（mL），加人装有225mLGN增菌液的广口瓶内，固体食品用均质器以8000r/min～10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6h～8h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。6.2分离和初步生化试验
6.2.1取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板一个，另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板一个，于36℃培养18h～24h，志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
6.2.2挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各一管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18h~24h，分别观察结果。6.2.3下述培养物可以弃去：
在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；a)
在18h~24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；c）不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；d)
产气的培养物；
有动力的培养物；
产生硫化氢的培养物。
6.2.4凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。6.3血清学分型和进一步的生化试验6.3.1血清学分型
挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用四种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查：如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1～15各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌312型多价血清及各型因子血清检查。表1福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原型和亚型
X变体
Y变体
型抗原
注：十凝集一不凝集：（）有或无。群抗原
1,2,4,5.9....
1,2,4,5,9....
1.7,8.9..
1.6,7.8,9....
1.(3.4)..
1.3,4,6..此内容来自标准下载网
1,5,7,9....
1,2,(4)......
1.7.8,9..
在群因子血消中的凝集
GB/T4789.5—2003
6.3.2进一步的生化试验
在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶，pH7.2尿素，氰化钾（KCN)生长，以及水杨苷和七叶苷的分解。除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。已判定为志贺氏菌属的培养物，应进一-步做5%乳糖发酵，甘露醇、棉子糖和甘油的发醇酵和靛基质试验。志贺氏菌属四个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。但福氏6型的生化特性与A群或C群相似，见表2。
A群：剩疾志贺氏菌
B群：福氏志贺氏菌
C群，鲍氏志贺氏菌
D群：宋内氏志贺氏菌
5%乳糖
志贺氏菌属四个群的生化特性
甘露醇
棉子糖
注：+阳性；一阴性，～/十多数阴性，少数阳性；(十)迟缓阳性;d有不同生化型。6.4结果报告
综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。38
靛基质
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