【农业标准】 番茄溃疡病菌检疫检测与鉴定方法

NY/T 2286—2012

番茄溃疡病菌检疫检测与鉴定方法

Detection and identification for Clavibacter michiganensis subsp.
michiganensis(Smith) Davis et al.

中华人民共和国农业部 发 布

前 言

本标准按照GB 1.1给出的规则起草。

本标准由农业部种植业管理司提出。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC 271）归口。

本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、贵州省植保植检站、贵州省植物保护研究所。

本标准主要起草人：王福祥、张忠民、袁洁、熊红利、吴石平、杨学辉、江兆春、耿坤、郑松、毛东、刘新。

番茄溃疡病菌检疫检测与鉴定方法

1 范围

本标准规定了农业植物检疫中番茄溃疡病菌检疫检测及鉴定的技术方法。

本标准适用于番茄溃疡病菌的检疫检测及鉴定。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

GB 15569 农业植物调运检疫规程

3 术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

鸟眼斑 bird's eye spots

番茄溃疡病菌侵染番茄果实后，果实上出现圆形，中央浅褐色，边缘为白色晕圈，形似鸟眼状的病斑。

3.2

溃疡斑 Canker

番茄溃疡病菌侵染番茄植株后，茎和叶柄上出现褐色条斑、下陷、病斑开裂而露出黄色至红褐色粉状的髓腔的典型溃疡症状。

4 原理

番茄溃疡病是一种维管束系统病害，从番茄育苗到收获期均可发生。番茄溃疡病菌主要以带菌种子远距离传播。病种子、病果实或病残体为初侵染源，通过种子、伤口或植株表皮的水孔等自然孔口侵入植株，造成局部侵染或系统侵染。植株和果实被侵染后，分别出现“溃疡斑”和“鸟眼斑”的典型为害症状。该病原菌为害番茄的典型症状、菌落特征、酶联免疫双抗体夹心法（DAS-ELISA）以及聚合酶链式反应(PCR)检测结果是鉴定该病菌的依据。

5 试剂与材料

碳酸氢钠(NaHCO₃)、碳酸钠(Na₂CO₃)、叠氮化钠(NaN₃)，无水磷酸氢二钠（Na₂HPO₄）、氯化钾(KCl)、无水磷酸二氢钾（KH₂PO₄）、无水磷酸氢二钾（K₂HPO₄）、氯化钠(NaCl)、无水亚硫酸钠(Na₂SO₃)、氯化镁(MgCl₂)、七水硫酸镁(MgSO₄ · 7H₂O)、硼酸(H₃BO₃)等。

DAS-ELISA检测试剂（包被抗体、酶标抗体、包被缓冲液、PBST洗涤液、样品提取缓冲液、酶标抗体缓冲液、底物对硝基苯磷酸二钠、底物缓冲液、终止液）与mSCM选择培养基制备方法参见附录B。

除另有规定，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格。

6 仪器及用具

PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、酶标仪、恒温震荡仪、台式离心机、高压灭菌器、超净工作台、生化