【水产标准】 对虾偷死野田村病毒(CMNV)检测方法

中华人民共和国水产行业标准

SC/T 7238—2020

对虾偷死野田村病毒(CMNV)检测方法

Detection methods for covert mortality nodavirus (CMNV)

前 言

本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由农业农村部渔业渔政管理局提出。

本标准由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC 156)归口。

本标准起草单位:中国水产科学研究院黄海水产研究所。

本标准主要起草人:张庆利、黄健、万晓嫒、李小平、刘爽、梁艳、杨冰、邱亮、李晨。

对虾偷死野田村病毒(CMNV)检测方法

1 范围

本标准给出了对虾偷死野田村病毒（CMNV）逆转录套式 PCR 检测、逆转录环介导等温扩增检测、TaqMan 荧光定量 RT-PCR 检测所需的试剂和材料、器材和设备，规定了操作步骤和结果判定的要求。

本标准适用于 CMNV 的检测和监测。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

SC/T 7103 水生动物产地检疫采样技术规范

3 缩略语

下列缩略语适用于本文件：

Bst DNA 聚合酶：Bst 2.0 热启动 DNA 聚合酶（Bst 2.0 WarmStart DNA Polymerase）

CMNV：偷死野田村病毒（covert mortality nodavirus）

dNTP：脱氧核苷三磷酸（deoxyribonucleoside triphosphate）

M-MLV 酶：M-MLV 逆转录酶（reverse transcriptase M-MLV RNase^-）

nested RT-PCR：逆转录套式 PCR（nested reverse transcription PCR）

qRT-PCR：实时荧光定量 PCR（quantitative real time reverse transcription PCR）

RT-LAMP：逆转录环介导等温扩增（reverse transcription loop mediated isothermal amplification）

4 试剂和材料

4.1 RNase free water：商品化试剂，4℃保存，或其他等效的无 RNA 酶水。

4.2 TRIzol Plus 试剂（或同类）：商品化试剂，4℃保存，或其他等效的 RNA 提取试剂。

4.3 RNA 酶抑制剂（RNase Inhibitor, 40 U/μL）：商品化试剂，-20℃保存，或其他等效试剂。

4.4 三氯甲烷：分析纯。

4.5 异丙醇：分析纯。

4.6 75%乙醇：见附录 A 中的 A.1。

4.7 阳性对照：感染了 CMNV 的对虾组织或细胞培养物或含有目的片段的核酸，-80℃保存。

4.8 阴性对照：不含 CMNV 的对虾组织或细胞培养物，-80℃保存。

4.9 空白对照：可用 RNase free water 作为空白对照。

4.10 dNTP（各 2.5 mmol/L）：含 dATP、dTTP、dGTP、dCTP 各 2.5 mmol/L 的混合物，-20℃保存。

4.11 dNTP（各 10 mmol/L）：含 dATP、dTTP、dGTP、dCTP 各 10 mmol/L 的混合物，-20℃保存。

4.12 dNTP（各 20 mmol/L）：含 dATP、dTTP、dCTP、dGTP 各 20 mmol/L，见 A.2，-20℃保存。

4.13 M MLV 逆转录酶（200 U/μL）：商品化试剂，-20℃保存，或其他等效逆转录酶。

4.14 5×M-MLV 逆转录酶缓冲液：商品化试剂，-20℃保存，或其他等效缓冲液。

4.15 Taq DNA 聚合酶（5 U/μL）：商品化试剂，-20℃保存，或其他等效 DNA 聚合酶。

4.16 10×PCR 缓冲液：商品化试剂，随 Taq DNA 聚合酶提供，不含 Mg²⁺，-20℃保存，或其他等效缓冲液。