【卫生标准】 尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色谱测定方法

中华人民共和国卫生行业标准

WS/T 40—1996

尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色谱测定方法

Urine—Determination of 2-thiothiazolidine-4-carboxylic acid—High performance liquid chromatographic method

中华人民共和国卫生部    发  布

中华人民共和国卫生行业标准

尿中 2-硫代噻唑烷-4-羧酸的
高效液相色谱测定方法

WS/T 40—1996

Urine — Determination of 2-thiothiazolidine-
4-carboxylic acid — High performance liquid
chromatographic method

1 主题内容与适用范围

本标准规定了尿中 2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色谱测定方法。

本法最低检测浓度为 8 μg/L。

本标准适用于接触二硫化碳工人尿中 TTCA 的测定。

2 原理

尿样经盐酸酸化后，TTCA 被乙醚萃取，经高效液相色谱反相 C₁₈柱分离、紫外检测器 273 nm 检测。保留时间定性，峰高定量。

3 仪器

3.1 高效液相色谱仪，紫外检测器。

3.2 电热恒温水浴。

3.3 液体快速混匀器。

3.4 微量注射器，20 μL。

3.5 移液管，1 mL、5 mL。

3.6 容量瓶，100 mL。

3.7 具塞试管，10 mL。

3.8 聚乙烯塑料瓶，100 mL。

3.9 尿比重计。

4 试剂

本法所用试剂除另有说明外，均为分析纯试剂。

4.1 实验用水，去离子水经全玻璃蒸馏器重蒸后，加盖保存。

4.2 盐酸，ρ_{20} = 1.19 g/mL。

4.3 冰乙酸，ρ_{20} = 1.05 g/mL。

4.4 甲醇，优级纯或经重蒸馏的分析纯试剂。

4.5 乙醚，使用新的试剂，否则临用前须经中性氧化铝除去过氧化物。

4.6 盐酸溶液，2 mol/L。

4.7 TTCA (2-硫代噻唑烷-4-羧酸)：制备方法见附录 A。

中华人民共和国卫生部 1996-10-14 批准 1997-05-01 实施

4.8 TTCA标准溶液：准确称取40.0 mg TTCA(4.7)，于100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液1 mL = 400 μg TTCA。再将其用水稀释10倍，浓度为1 mL = 40 μg TTCA。置4℃冰箱可保存两周。

4.9 质控样：用加标的模拟尿、接触者混合尿或加标的正常人混合尿作质控样。

5 采样、运输和保存

用聚乙烯塑料瓶采集约50 mL斑末尿，尽快测定比重后，于常温下运输；但夏季运输需要冷藏，于-8℃下可保存一周。

6 分析步骤

6.1 仪器操作条件

6.1.1 色谱柱：反相C₁₈键合硅胶柱。

6.1.2 流动相：甲醇+水+冰乙酸=14.5+84.5+1；
流速：1.5 mL/min。

6.1.3 紫外检测波长：273 nm。

6.2 空白试验

用正常人混合尿样按6.3条处理、6.5条测定。

6.3 样品处理

取1 mL经离心后的尿样置于具塞试管中，加入0.1 mL盐酸溶液(4.6)及5 mL乙醚，于液体快速混匀器上振摇2 min。于3 000 r/min离心10 min后，将乙醚溶液全量转移至另一试管中，置40℃水浴上吹氮至干，加入200 μL甲醇溶解残渣。

6.4 标准曲线的绘制

取5支具塞试管，按下表配制标准管。

取上述标准管中溶液各20 μL，进HPLC测定。以TTCA含量(μg)为横坐标，色谱峰高为纵坐标，绘制标准曲线。

6.5 样品测定

取经6.3条处理的样品液20 μL，进HPLC进行测定，同时测定空白样(6.2)。其色谱图见下图。在测定前后及每测定10个样品后，测定一次质控样。