【其他行业标准】 藻类脂肪酸的测定 气相色谱法

ICS07.060；13.060.01
中华人民共和国海洋行业标准
HY/T228—2018
藻类脂肪酸的测定
气相色谱法
Determination of fatty acids in algae-gas chromatography2018-02-13发布
国家海洋局
2018-05-01实施
中华人民共和国海洋
行业标准
气相色谱法
藻类脂肪酸的测定
HY/T228—2018
中国标准出版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029北京市西城区三里河北街16号（100045）网址www.spc.net.cn
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开本880×1230
2019年1月第一版
印张0.75
字数16千字
2019年1月第一次印刷
书号：155066·2-33980
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本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家海洋局提出。
HY/T228—2018
本标准由全国海洋标准化技术委员会（SAC/TC283）归口。本标准起草单位：国家海洋局第一海洋研究所、中国科学院海洋研究所、中国海洋大学本标准主要起草人：杨佰娟、李倩、郑明刚、郑立、韩笑天、刘涛、朱明壮、陈发荣。I
1范围
藻类脂肪酸的测定
本标准规定了藻类中脂肪酸的气相色谱测定方法、气相色谱法
本标准适用于藻类中脂肪酸的测定。其他藻类中脂肪酸的测定可参考使用。2规范性引用文件
HY/T228—2018
本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件仅注局期的版本适用于本文下列文件对于本
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文GB/T6682
3方法原理
分析实验室用水规格和试验方法氧氧化钠甲醇溶液
藻类样品中的脂肪酸，经
色谱法测定
4试剂和材料
酸甲醇液甲酯化经正已烷提取后，用气相除非另有说明，本方法所前武剂均方分析纯，水为GB/T6682规定的级水
4.1试剂
氢氧化针（KOH）
盐酸（HCI）
氯化钠（NaCI）
正已烷（C.H1)：色谱纯。
甲醇（CHaOH)：色谱纯
无水硫酸钠（Na2SO,）：400C购烧4h，冷却后密闭保存，有效期1个月。试剂配制
饱和氢氧化钾甲醇溶液：称取40g氢氧化钾溶解在100mL甲醇中，搅拌溶解，澄清备用，室温4.2.1
下可放置2个月。
4.2.2盐酸甲醇溶液（1mol/L）：量取10mL盐酸溶解在110mL甲醇中，混匀，室温下可放置2个月。4.2.3饱和氯化钠溶液：称取360g氯化钠溶解在1L蒸馏水中，搅拌溶解，澄清备用，室温下可放置2个月。
4.3标准品
4.3.1十一碳酸甘油三酯，纯度大于99%。4.3.2十一碳酸甲酯标准品，纯度大于99%。1
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4.3.3混合脂肪酸甲酯标准品。
4.3.4单个脂肪酸甲酯标准品（可根据需求购买），纯度大于99%。4.4溶液的配制
4.4.1十一碳酸甘油三酯内标溶液（0.15mg/mL）：准确称取15mg十一碳酸甘油三酯（4.3.1）至100mL容量瓶中，用甲醇定容，冰箱4℃避光冷藏保存，有效期1个月。4.4.2单个脂肪酸甲酯标准溶液（1mg/mL）：准确称取100mg脂肪酸甲酯标准物质（4.3.4）于100mL容量瓶中，用正已烷定容，贮存于一20℃冰箱，有效期3个月。4.4.3混合脂肪酸甲酯标准溶液（10μg/mL）：取出适量脂肪酸甲酯混合标准溶液（4.3.3）移至10mL容量瓶中，用正已烷定容，配制成脂肪酸甲酯标准物质浓度为10μg/mL溶液。贮存于一20℃冰箱，有效期3个月。
仪器和设备
5.1气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。5.2
电热恒温水浴锅：控温范围25℃~100℃，控温精度土1℃。电子天平：感量0.1mg。
粉碎机。
具塞离心管。
容量瓶。
研钵。
分析步骤
藻粉的制备
藻类经冷冻干燥24h。干燥后大型藻经过粉碎机（4.4）粉碎过80目筛，微藻直接进行6.2。6.2皂化
用天平称取藻粉约20mg，放入研钵（5.7）中，准确加人0.2mL十一碳酸甘油三酯内标溶液（4.4.1），加入液氮反复研磨2次~3次，每次5min，用6.0mL饱和氢氧化钾甲醇溶液（4.2.1）分2次~3次将研磨后的藻粉转移至具塞离心管（5.5）中，混匀。将离心管放人60℃C水浴锅内加热处理60min，每隔10min取出振荡5s～10s，处理结束后取出离心管冷却至室温。6.3甲基化
皂化后的试样加人4mL1mol/L盐酸甲醇溶液（4.2.2），混匀，将离心管放人60℃水浴锅内加热处理20min，每隔10min取出振荡5s～10s，处理结束后取出离心管冷却至室温。6.4萃取
甲基化后的试样准确加入1mL正已烷，加人3mL饱和氯化钠溶液（4.2.3），将管盖拧紧，涡旋振荡2min，静置3min~5min待溶液分层后，取大约0.5mL上层正已烷，用无水硫酸钠脱水后进行气相色谱分析。
7样品的测定
仪器测试条件
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取单个脂肪酸甲酯标准溶液和脂肪酸甲酯混合标准溶液分别注入气相色谱仪，对色谱峰进行定性。脂肪酸甲酯混合标准溶液气相色谱图，参见附录A。色谱分析条件为：
色谱柱：毛细管色谱柱涂层为键合/交联聚乙醇，涂层厚度为0.25μum，内径为0.25mm，长度为30m。
载气：高纯氮气（99.999%），1.5mL/min；氢气：高纯（99.999%），30mL/min；空气：高纯（99.999%），300mL/min；尾吹：高纯氮气（99.999%），35mL/min；检测器温度：300℃；
进样口温度：250℃；
进样量：1μL；
进样方式：无分流进样；
升温程序：初温50℃，保持5min，25℃/min升到180℃，1℃/min升到190℃，保持10min，1℃/min升到205℃保持10min，20℃/min升到240℃，保持5min。7.2样品测定
上述色谱条件下将混合脂肪酸甲酯标准溶液和样品提取液分别注入气相色谱仪，以色谱峰峰面积定量。
8结果计算
单个脂肪酸甲酯含量
根据被测物和内标物的质量及在色谱图上相应的峰面积比，由校正因子按式（1)计算单个脂肪酸甲酯的含量：
式中：
W,XF.XA,X1.0067
藻类中脂肪酸甲酯i组分的含量，单位为毫克/克（mg/g）；W
藻类的质量，单位为毫克（mg）；样品中加人内标物的质量，单位为微克（ug）；内标物的峰面积；
藻类中脂肪酸甲酯讠组分的峰面积；相对校正因子。
十一碳酸甘油三酯转化成十一碳酸甲酯的转换系数。其中，F按式（2)进行计算：
W、XA?
（1）
..（2）
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式中：
标准品脂肪酸i组分的质量，单位为微克（ug）；标准品中内标物的质量，单位为微克（μg)；标准品中内标物的峰面积；
标准品中脂肪酸组分的峰面积。8.2
归一化法
藻类样品中某个脂肪酸甲酯组分的百分比按式（3)计算，通过测定相应峰面积对所有成分峰面积总和的百分数来计算给定组分i的含量。用归一化法计算出脂肪酸甲酯组分的百分含量，以占脂肪酸甲酯总量的百分比表示，按式（3）计算：Y
式中：
精密度
藻类中脂肪酸甲酯i组分的百分含量；藻类中脂肪酸甲酯i组分的峰面积。EA,
（3）
不大于两次测定结果算数平均值的10%，以大重复性条件下，获得的两次独立测定结果绝对差值
于这两个测定值的算数平均值的10%的情说不超过
再现性条件下，获得的两状猫
立测定结果绝
免对差值
于这两个测定值的算数平均值的5%的情况下不超过
10方法检出限和定量限
见附录
为前提
测定结果算数平均值的15%，以大上于两次bzxz.net
为前提
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脂肪酸甲酯标准溶液典型参考图谱（资料性附录）
附录A
脂肪酸甲酯标准溶液典型参考图谱参见图A.1。010
6x10°
5×10°
4X10°
0:11O-
拔3x0
2×10°
1×10°-
注：表B.1给出了脂肪酸甲酯名称和简写。20
脂肪酸甲酯标准溶液典型参考图谱图A.1
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（规范性附录）
脂肪酸甲酯的检出限和定量限
脂肪酸甲酯的检出限和定量限见表B.1。表B.1
脂肪酸甲酯名称
己酸甲酯
辛酸甲酯
葵酸甲酯
十一碳酸甲酯
十二碳酸甲酯
十三碳酸甲酯
十四碳酸甲酯
顺-9-十四碳一烯酸甲酯
十五碳酸甲酯
顺-10-十五碳一烯酸甲酯
十六碳酸甲酯
顺-9-十六碳一烯酸甲酯
十七碳酸甲酯
顺-10-十七碳一烯酸甲酯
十八碳酸甲酯
顺(反)-9-十八碳一烯酸甲酯
反，反-9，12-十八碳二烯酸甲酯顺，顺-9，12-十八碳二烯酸甲酯脂肪酸甲酯的检出限和定量限
脂肪酸简称
C18:2n6t
C18:2n6c
顺，顺，顺-6，9，12-十八碳三烯酸甲酯顺，顺，顺-9,12，15-十八碳三烯酸甲酯二十碳酸甲酯
顺-11-二十碳一烯酸甲酯
顺，顺-11,14-二十碳二烯酸甲酯顺，顺，顺-8，11,14-二十碳三烯酸甲酯二十一碳酸甲酯
顺-5,8,11,14-二十碳四烯酸甲酯顺11,14,17-二十碳三烯酸甲酯
顺-5,8，11,14,17-二十碳五烯酸甲酯二十二碳酸甲酯
C18:3n6
C18：3n3
C20：3n6
C20：4n6
C20:3n3
C205n3
检出限/（μg/mL）
定量限/（μg/mL）
脂肪酸甲酯名称
顺-13-二十二碳一烯酸甲酯
顺13,16-二十二碳二烯酸甲酯
二十三碳酸甲酯
二十四碳酸甲酯
顺-4，7,10,13，16,19-二十二碳六烯酸甲酯顺-15-二十四碳一烯酸甲酯
表B.1（续）
脂肪酸简称
C22:1n9
C22:6n3
检出限/（μg/mL）
HY/T228—2018
定量限/（μg/mL）
HY/T228—2018
参考文献
[1]https://www.thesprucepets.com/defining-micro-and-macro-algae-2924083版权专有
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