【GA公共安全标准】 中毒检材中甲胺磷的定性及定量分析方法

ICS_13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T195-1998
上海市技术监督情报研究所
登设号QT994495
中毒检材中甲胺磷的
定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis formethanidophos in case samples1998-12-08发布
中华人民共和国公安部发布
1999-03-01实施
GA/T195-1998
本标推的编制任务由全国刑事技术标准化技术委员会下达，公安部第二研究所负责完成。本标准建立在《有机磷农药中毒检验研究》课题成果以及全国部分省、市刑事化验人员长期办案的基础上制定而成。本标准适用于中毒及中毒死亡者呕吐物、吃剩的食物、胃吸出液以及胃、肝、肺、血和胃、肠内容物以及现场上可疑的物品、液体等的定性及定量分析。本标准的主要内容：提取净化方法、定性及定量分析方法（GC法、TLC法）和各方法的评价。本标准经过多年办案实践证明，方法操作简便、定性及定量准确可靠。本标准由中华人民共和国公安部提出。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。本标准起草单位：公安部第二研究所。本标准主要起草人：赵敬真、徐婉。1范围
中华人民共和国公共安全行业标准中毒检材中甲胺磷的
定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis formethanidophos in case samples本标准规定了中毒检材中甲胺磷的定性及定量分析方法。GA/T195—1998
本标准适用于中毒者的呕吐物、吃剩的食物、胃吸出液以及中毒死亡者的胃内容物、胃组织、十二指肠内容物、血液、肺、肝以及注射部位肌肉等检材中甲胺磷的定性及定量分析。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GA/T101一1995中毒检材中有机磷农药的定性定量分析方法GA/T122-1995毒物分析名词术语3定义
本标准采用GA/T122中的定义。
第-一篇气相色谱法（GC法）
4原理
本方法采用添加标准品进行对照分析的气相色谱法定性、定量分析检材中的农药。即检材与添加到空白检材中的阳性对照和阴性对照，同时经过提取净化及浓缩至一定体积后，用火焰光度检测器或氮磷检测器的气相色谱法进行检测，与标准品比对，以保留时间作为定性依据；与平行操作的阳性对照比较，以峰面积值（或峰高值）为依据，用外标法计算各检材中的农药含量。5试剂（所用试剂均为分析纯）
5.1溶剂
氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙醚、石油醚、甲醇、乙醇等。5.2吸附剂
5.2.1活性炭：层析用颗粒状，直径0.43mm或20~40目。活性炭的处理：市售层析用活性炭（20～40目）加浓盐酸浸没表层，玻璃棒轻轻捣拌，然后于80～90℃温度下加热1h，冷却后倾去多余的酸液；活性炭用蒸馏水洗到中性后，用甲醇浸洗二次，挥去甲中华人民共和国公安部1998-12-08批准查标准上建标网wwiz321.net
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醇，然后再置100℃烘箱中烘烤3～4h，取出置干燥器中保存备用。5.2.2中性层析氧化铝：市售100～200目的中性层析氧化铝于130℃下活化3h，冷却后按6%比例加水，搅拌均匀后放回瓶内，24h后保存备用。5.3试剂
5.3.1酸类：冰乙酸或36%醋酸、浓盐酸。5.3.2脱水剂：无水硫酸钠。
5.3.3其他试剂：氢氧化钠等。
5.4农药标准溶液
5.4.1甲胺磷标准储备液：精确称取甲胺磷纯品一定量装于小烧杯中，用少量多次的90%~95%乙醇溶解到容量瓶中；然后再加同样的溶剂稀释到刻度，配制成10.00mg/mL的标准储备液，置于冰箱中一10℃下保存（使用期1a）。
5.4.21.00mg/mL甲胺磷标准液：取上述标准储备液1mL，用无水乙醇稀释至10mL，得1.00mg/mL甲胺磷的标准液置4℃下冰箱保存（供TLC法及添加提取用），使用期60d。5.4.3供GC用的甲胺磷使用液：取1.00mg/mL标准液一定量，稀释10~20倍，供GC分析用，临用时新配。稀释的浓度根据仪器状态及所用检测器的灵敏度而定。6仪器与器材
带有火焰光度检测器或氮磷检测器的气相色谱仪(GC/FPD或GC/NPD)。6.1
色谱数据微处理机。
6.3多用振荡器。
6.4浓缩装置：K.D浓缩器或其他浓缩装置。6.5微量注射器：10μL.50μL、100μL。6.6
实验室常用玻璃器材。
7提取净化方法
7.1方法1
中性氧化铝净化法，本方法适用于胃、肝等组织及其内容物等新鲜检材的提取净化。7.1.1提取
取绞碎的胃、肝组织及胃内容物等检材5～10g，于蒸发皿中加无水硫酸钠研成沙状：转移至100~200mL具塞三角烧瓶中，加无水乙醇或甲醇一二氯甲烷混合溶剂（1：2）淹没（约40mL），浸泡0.5h后振摇提取15min；分出提取液，残渣再重复操作2次，合并提取液浓缩至2～5mL，待净化。7.1.2装柱
取内径1～2cm的直形玻璃净化柱，从下往上依次装入：少许脱脂棉花轻塞下口、1～2g无水硫酸钠、5～10g中性层析氧化铝、5~10g无水硫酸钠，然后用提取溶剂预淋柱子备用。7.1.3净化及浓缩
将检材的浓缩液中加人等体积的二氯甲烷，混后，倒入柱上；待检液流完后，再用50mL的无水乙醇一二氟甲烷液（1：2）淋洗，收集洗脱液，浓缩至0.5mL供检。7.2方法2
活性炭富集法，本方法适用于水、饮料等液体检材中微量甲胺磷的提取。7.2.1直接富集法提取甲胺磷
取30～50mL水、饮料等检材装于烧杯中，加0.5g活性炭，玻璃棒捣拌2～3min，或者装于具塞三角烧瓶中振摇2～3min。然后滤纸过滤，弃去滤液，取下滤纸和活性炭一并于玻璃研钵中；加无水硫酸钠，充分研磨脱水，转移至具塞三角烧瓶中，用二氯甲烷15mL提取2次，每次振摇15min，合并两次提2
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取液，加2mL无水乙醇于提取液中，浓缩至0.5mL供检。7.2.2柱吸附富集法提取甲胺磷
7.2.2.1净化柱的制备：取内径1cm的直管玻璃柱，用少许脱脂棉轻轻塞住下口；然后装人5g左右的活性炭，再用少许脱脂棉覆盖活性炭备用。7.2.2.2将含微量甲胺磷的水、饮料等检液100mL，分多次倒人柱中，检液通过柱子的流速1～2mL/min，勾速过柱；检液全部通过柱子之后，用洗耳球挤去柱中剩余水份。7.2.2.3洗脱：往柱子中逐次倒人70～80mL的二甲烷洗脱，溶剂倒入柱子后，先浸泡5～10min后再洗脱，二氯甲烷的流速为2～3mL/min；收集洗脱液用少许无水硫酸钠脱水，加人2mL的无水乙醇于洗脱液中，浓缩至0.5mL供检。7.3方法3
液一液浸提法，本方法适用于各种检材的提取净化。7.3.1胃、肝等组织及胃、肠内容物的提取净化取绞碎的检材5～10g，装于具塞三角烧瓶中，加20mL丙酮浸提2～3次，每次振提30min；提取液过滤于蒸发血中，60℃温度下，挥去溶剂至近干，然后加石油醚适量搅拌洗涤2次，每次10～20mL（主要看油脂含量多少而定），吸去上层石油醚弃去。残渣中再加氯仿20mL，同时加无水硫酸钠脱水搅拌至氮仿层清亮，移入具塞三角瓶中，振摇20min，分出氛仿液；残渣再加20mL氛仿振提1次，合并两次氮仿提出液，加人2mL无水乙醇或乙酸乙酯，70℃下浓缩至0.5mL备检。7.3.2油脂检材的提取
取动植物油样检材5~10g，加10~20mL水，水浴上温热使油脂完全溶化，转移到50~100mL分液漏斗中：加石油醛反复振提至水层清亮，弃去石油醚层，水液再转移到200mL蒸发血中，水浴上挥发水分至近干：放冷后，加无水硫酸钠研磨成沙状，转移至100mL具塞三角烧瓶中，用30mL氟仿分次洗涤蒸发血，氛仿液倒人三角烧瓶中振摇提取20min，分出仿液：残渣中再加氛仿30mL提取1次，合并氟仿提取液，加12mL无水乙醇或乙酸乙酯，70℃下浓缩至0.5mL供检。7.4方法的提取回收率如表1所示。表1
提取方法
方法1
方法2
方法3
8气相色谱定性分析
8.1定性试验样品的制备
回收率免费标准bzxz.net
75%~88%
65%~80%
70%~82%
8.1.1取检材（肝：胃及内容物等）各5～10g，液体样品30~50mL各一份，另取相应的空白检材等量二份，其中一份添加10～100μg甲胺磷标准，作为阳性对照；另一份作为阴性对照。8.1.2上述各试样选择第7章中适当的提取净化方法进行处理，最后得各试样提取浓缩的溶液0.5～1mL供分析。
8.2气相色谱条件（参考数据）
8.2.1色谱法
WHP80~100目2m×3mm(id）玻璃填充柱；5%QF-1Chromosorb
5%0V-17GaschromQ80~100目+10%DC-200GaschromQ80~100月(1:1)混装2m×3mm(id）玻璃填充柱：5%QF-1Gaschrom
Q80~100目+5%DC-200GasChromosorbWHP80~1003
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目（1：1）混装2m×3mm（id）玻璃填充柱：3o%Reoplex40oChromosorbW
6080目0.5m×2mm（id）玻璃填充柱OV-17、OV-101、SE-30等25m×0.25mm(id)毛细管柱或者大口径毛细管柱。8.2.2其他条件参考值
温：150~200℃；
汽化室温：200~210℃；
检测器温：220~250℃C（FPD或NPD）；高纯氮气：30~60mL/min；
空气和氢气的比例根据仪器而定。8.3进样
将各试样吸取1～2μL，注入设好的气相色谱仪中，每个样品进样2～3次。8.4记录
分别记录各试样中色谱峰的保留时间（RT值）。求出各色谱峰的保留时间平均值，与标准甲胺磷色谱峰保留时间比对进行定性。记录空白添加及纯品甲胺磷色谱峰的峰面积或峰高的平均值，计算空白添加甲胺磷的回收率，以评价操作方法的价值。8.5色谱图
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色谱条件
仪器，SP-501N型GC
C-R3A微处理机
柱：A
5%QF-1+10%DC-200
(11)2m×3mm(id）填充柱
B3%OV-17+10%DC-200
(1:1)2m×3mm(id）填充柱
柱温：A185℃
B210℃
检测器，FPD240°℃
汽化室：240℃
高压：700V
N.:80~90mL/min
H:60~70mL/min
AIR.150mL/min
RT值：
A1-DDVP0.77
2—甲胺磷1.13
B1-DDVP0.6
2—甲胺磷·1.33'
甲胺磷在填充柱上的气相色谱分离图图1
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色谐条件
仪器：HP5890A型GC
3396微处理机
柱：OV-1725m×0.25(id）mm石英毛细管柱柱温：150C保持6min，以20℃/min速率升至280℃
检测器：NPD280℃
汽化室：250℃
Nz:40psi
Ha:15psi
空气：60psi
镶珠：450V
1--DDVP4.74
2—甲胺磷7.13'
3—乐果12.39°
图2甲胺磷在毛细柱上的气相色谱分离图8.6最小检出量如表2所示。
甲胺磷
检测器最小检出量
8.7外标回收率计算公式
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空白添加甲胺磷峰面积(蜂高）平均值× 100外标回收率（%）二
等量已知甲胺磷峰面积（峰高）平均值气相色谱定盘分析
9.1定量分析样品制备
准确称取检材5.0~10.0g，液体检材30.0~50.0mL，2份：称取相应的空白检材等量2份，其中一份添加甲胺磷标准（添加量为定性分析时粗定量数据的1.5倍）作为阳性对照，另一份作阴性对照。9.2提取净化方法同第7章。
9.3色谱分析条件同8.2。
9.4进样同8.3。
9.5记录
记录检材及空白添加标准品色谱峰面积（或峰高）值，计算各试样及添加标准品的峰面积平均值，计算含量。
9.6含量计算公式及相对相差计算公式：检材甲胺磷峰面积（峰高）值×AX检材体积×V添药物含量X(μg/g）=添加甲胺磷峰面积（峰高》值文添加检材体积V检文检材重量(g）添加药物总量，rg；
式中：A-
V添——添加检材进样体积.μL；V检——检材进样体积.μL。
相对相差(%)=区l× 100
式中：X1、X—两份检材平行定量操作测定值；x——平均值。
10气相色谱分析结果评价
10.1定性分析结果评价
10.1.1回收率指标
空白检材中添加50100μg甲胺磷标准，回收率高于50%，空白无干扰，检材出现阴性，定性结果可信；回收率低于50%，检材出现阴性时不能作出未检出结论，应重新操作。10.1.2定性必备条件
如仅用GC分析法定性，必须采用两种以上不同极性的色谱柱，或者一根色柱，两种不同的检测器，而且检材、空白添加、标准样品同时进行比对，检材中组分的保留时间与已知农药一致，空白无干扰，才能作出肯定结论。
10.2定量分析结果评价
两份检材在相同条件下所测出甲胺磷的含量，相对相差不超过20%，说明定量数据可靠；否则，说明操作有误，应重新操作。
11原理
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第二篇薄层色谱法（TLC法）
本方法采用检材与添加的阳性对照及阴性对照同时经过提取，净化及浓缩至一定体积后，用薄层色谱法与标准品对照，选择合适的展开剂和显色剂进行分离显现，以获得相同的R值作为定性分析的依据。
12试剂
12.1溶剂、吸附剂等同第5章。
12.2自铺硅胶GF254薄层板（0.25~0.3mm）或高效硅胶GF254薄层层析板。12.3展开剂
氯仿：丙酮=1：1,R=0.52；
正已烷丙酮=11R=0.48
苯：丙酮=1：1，R=0.45。
12.4显色剂
12.4.1溴酚蓝显色法：甲胺磷显鲜蓝色斑，显色灵敏度3μg。（1）液0.05%溴酚蓝-1%硝酸银丙酮水溶液：50mg溴酚蓝溶于少量丙酮中，用1%AgNO：的丙酮水（丙酮：水=1：3·V/V)溶液稀释至100mL。(2）液柠檬酸溶液：5g柠檬酸溶于100mL1：1丙酮水溶液中或者5%的醋酸水溶液。显色操作：将展开后吹去溶剂的薄层板喷酒漠酚蓝-AgNO：丙酮水溶液至整块板润湿呈蓝色，置50℃烘箱中10min或电炉上方烘5~10min，然后喷柠檬酸液或醋酸溶液，甲胺磷呈蓝色斑，背低浅黄色或白色。
12.4.2NBP-乙二胺试剂法：甲胺磷显翠蓝色斑，背底白色，显色灵敏度2μg。a）试剂配制
①2%NBP[4-（对硝基苄基）吡啶】乙醇液，4C冰箱中保存，使用期0.5a。②乙二胺丙酮液，1mL乙二胺加丙酮稀至10mL，摇匀，临用时新配。b）显色方法
展开后的薄层板挥尽溶剂，喷NBP试剂，凉干后于110℃烘箱中加热5min或电炉上方烘5min放凉后喷乙二胺试剂。白色背底上显翠蓝色斑。12.4.3二氟醒氟亚胺一溴法：甲胺磷在白色背底上显黄红色斑点，显色灵敏度2μg。a）试剂配制
0.5%二氛醒氯亚胺乙醇液。
5%～10%溴的四氯化碳溶液。
b）显色方法
展开后的薄层板挥尽溶剂，喷二氮醒氛亚胺试剂至潮湿，挥干乙醇液，放置于预先准备好溴蒸汽缸中5~10min，即显色。
溴蒸汽缸的制备：取大小适宜的展开缸一只，里面放一只50mL小烧杯，烧杯中放5～10mL溴的四氨化碳溶液，3~5min缸中即布满棕色溴蒸汽。13器材
13.1层析缸，喷雾瓶。
13.2电动吸引器。
13.3其他器材见6.3~6.6项。
提取净化方法
同第7章。
薄层色谱定性分析
15.1薄层板
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10cm×10cm、10cm×15cm、15cm×20cm的自制硅胶GFz54板或高效薄层板。15.2点样
各试样提取溶液分别点5~10μL，甲胺磷3~5μg。15.3展开
选择适当的展开剂，展开10cm高度后取出，挥尽溶剂。15.4显色
选择适当的显色剂显色后，以检材中出现的色斑颜色及其R，值进行比对定性。16定性分析结果评价
16.1本方法仅用作定性分析。
16.2回收率估价
5g空白检材中添加200μg甲胺磷提取浓缩至0.5mL，点样10μL，相当于4μg。如不出现斑点，说明回收率不好，不能做出结论，应重新操作。16.3定性必备条件
检材中甲胺磷的薄层定性分析必须使用两种以上展开剂并与标准甲胺磷、空白对照、空白添加比对，如果检材中出现的斑点与已知甲胺磷的斑点颜色及R值均一致，空白对照无干扰，可作出认定结论：如果薄层分析为阴性，重大案件建议用气相色谱法等仪器分析核实后确证。A1甲胺磷农药中毒诊断
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附录A
（标准的附录）
甲胺磷农药中毒数据及资料
与常见有机磷农药中毒诊断相同，见GA/T101一1995标准附录部分。A2
甲胺磷理化性质及中霉数据
甲胺磷纯品为白色针状结晶，熔点44.5℃；工业品为淡黄色粘稠油状液体。易溶于水、甲醇、乙醇等极性有机溶剂。甲胺磷属高毒杀虫剂，大鼠急性口服LDso为20~30mg/kg。乙酰甲胺磷纯品为白色结晶，熔点90～91℃C，易溶于水、甲醇、乙醇、丙酮等极性溶剂和二氯甲烷、三氛甲烷等卤代烃。本品属低毒杀虫剂，大鼠急性口服LDs为832mg/kg。10
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