【GA公共安全标准】 中毒检材中氯喹的定性及定量分析方法

ICS13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T198-1998
上海市技术监督特报研究所
登设号QT994498
中毒检材中氯喹的定性
及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis forchloroguinoline in case samples1998-12-08发布
中华人民共和国公安部发布
1999-03-01实施
GA/T198-1998
本标准的编制任务由全国刑事技术标准化技术委员会下达，公安部第二研究所负责完成。氮喹是治疗症疾的极为重要的药物，但使用不当会引起中毒，甚至死亡。本标准的制定是建立在20多年办案实践和研究的基础上的。本标准适用于中毒及中毒死亡者的户体内脏组织和体液，以及现场物证中的氮喹的定性及定量分析。
本标准的主要内容为：检材的适用范围、提取净化方法、GC定性及定量分析方法和TLC定性分析方法，以及各方法的评价、定量计算公式等。本标准由中华人民共和国公安部提出。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。本标准起草单位：公安部第二研究所。本标准主要起草人：赵敬真。
1范围
中华人民共和国公共安全行业标准中毒检材中氯的定性
及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis forchloroquinoline in case samples本标准规定了中毒检材中氯喹的提取净化方法和定性及定量分析方法。GA/T198—1998
本标准适用于中毒者的呕吐物、胃吸出物和中毒死亡者的胃内容物、胃、肝、肾、肺、心、血等组织、体液，以及现场可疑物证等检材中氮唑的检验。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标推都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GA/T122—1995毒物分析名词术语3定义
本标准采用GA/T122中的定义。
第一篇气相色谱法（GC法）
4原理
本方法采用在生物检材中加人内标物，经提取，净化、浓缩后，用具有氢火焰离子化检测器（FID)或氮磷检测器(NPD)的气相色谱仪检测其中药物，以保留时间(RT值）和相对保留时间（RRT值）作定性分析；以峰面积为依据，用内标法或外标法进行定量分析。5试剂（所有试剂均为分析纯）
5.1无水乙醇。
5.2甲醇。
5.3乙醚。
5.4氯仿。
5.5无水硫酸钠。
5.6氢氧化钠。
5.7浓硫酸。bzxz.net
中华人民共和国公安部1998-12-08批准查标准上建标网wwwiz321.net
1999-03-01实施
5.8浓盐酸。
5.9氛喹的标准溶液
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5.9.1氯喹纯品：称取一定量的磷酸氮喹粉剂（99%以上纯度），溶于水，加10%NaOH调至pH12；然后用乙醚提取，分出乙醚液，脱水，吹氮气挥发乙醛，置于干燥器中存放至恒重，得氟噬纯品。5.9.2氛喹储备液：精确称取100.0mg氟喹（盐基）用无水乙醇溶解移入10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，混勾得10.0mg/mL氯喹储备液，冰箱中保存，使用期2a。5.9.3氯唑标准液：取氟唑储备液一定量，稀释10倍，得1.00mg/mL的氯喹标准溶液，冰箱保存，使用期1a。
5.10内标物溶液：1.00mg/mLSKFs25A的无水乙醇标准溶液，冰箱保存，使用期1a。6仪器及器材
6.1气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器(FID)或氮磷检测器(NPD)的气相色谱仪。6.2色谱数据微处理机。
6.3电动振荡器。
6.4K.D浓缩器或其他浓缩装置
6.5微量注射器（10μL、50μL、100μL）。6.6，100~150mL具塞三角烧瓶。6.7分液漏斗（50mL、100mL150mL）。6.8小型多用振荡器。
6.9其他常用玻璃器材。
7提取净化方法
7.1方法一：本方法适用含量微、取材量较大的检材的提取净化。取绞碎肝、肾、胃及血液等组织和体液5～10g（mL），加无水乙醇5mL沉淀蛋白，用20%氢氧化钠水溶液调节pH值12以上，用乙醚50mL提取2次，每次振荡15min，分出乙醚液，合并于100mL分液漏斗中；加1%氢氧化钠水液5mL洗涤12次，水10~15mL洗一次，每次振摇1min，弃去水相层，乙醚液用无水硫酸钠脱水并转移至另一只干净的分液漏斗中；用0.1mol/L盐酸或0.1mol/L硫酸5mL反提3次，每次振摇510min，分出酸液合并，弃去乙醚液，酸液用20%氢氧化钠调节pH值为12；此碱液转入50mL干净分液漏斗中，用氯仿15mL提取2次，每次振摇5~10min，分出氛仿液，脱水，K.D浓缩或其他装置挥发氯仿至干，残留物中加甲醇或无水乙醇0.1~0.2mL定容，涡旋1min，备检。
7.2方法二：本方法适合于新鲜检材的微量提取净化。取绞碎的肝、肾、胃、血液等组织或体液2g（mL)装于15mL的具塞玻璃试管中，各检样添加内标物SKF525A10~20μg，摇勾，加0.5~1mL无水乙醇沉淀蛋白，20%氢氧化钠水液0.5mL，使检材的pH值在11以上：以乙醚8mL提取2次，每次振摇10min，离心5min，分出乙醚液加1mL水洗1次（主要是洗第1次乙醚提取液，第2次乙醚提取液不洗，直接与第1次乙醛提取液合并），离心，乙醛提取液于50mL烧杯或蒸发皿中，50℃水浴挥干乙醚，残渣用8mL1%盐酸水液分3次溶解并过滤于10mL具塞试管中，用50%氢氧化钠调节其pH值11以上，加2mL氯仿提取5min，离心5min，吸取上层水液弃去，下层氟仿转移到一只干净、干爆的尖底试管中，70℃温度下空气流吹干，残留物中加50～100μL无水乙醇或甲醇定容供分析用。7.3直接提取法：取现场可疑物证，如注射器、药片、空瓶等，直接用甲醇浸提，浓缩后供分析。7.4方法回收率
方法：5g组织添加100g氛喹，回收率为81%士3.7%。2
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方法二：2g组织添加20μg氯唑，回收率为75%士5.4%。8气相色谱定性分析
8.1气相色谱条件（参考值）
8.1.1色谱柱
1）3%SE-30ChromosorbWHP80~100目2mX2.6mm(id)玻璃填充柱；2）3%~5%OV-17ChromosorbWHP80~100目2mX2.6mm(id)玻璃填充柱：3）SE-30.OV-1.OV-101SE-54等弹性石英毛细管柱（0.25~0.5mm(id）X25mX0.32μm）。8.1.2其他条件
柱温：250~270℃；
汽化室温：280~300℃，
检测器温：280300C(FID或NPD)；载气：高纯氮气50~70mL/min（填充柱）；1~5mL/min（毛细柱）。空气和氢气比例根据自己使用的仪器调最佳值。8.2进样
吸取各试样（检材、空白添加提取液及标推样品溶液）1～2μL，依次注人设定好的气相色谱仪中，每个试样进样2～3次。
8.3记录
分别记录各试样的保留时间（RT值），求出各试样的相对保留时间（RRT值），与标准样品比对定性。记录空白添加标准品、内标物及纯标准样品的峰面积（或峰高）的平均值，计算空白添加药物或内标物的回收率，评价操作方法的价值。8.4色谱图（参考值）
色谱图见图1、图2。
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仪器：ASP501N型GC,C-R3A微处理机+B.CGC-8AC-R3A微处理机柱：A5%SE-301.5m×3mm填充柱
BSE-5430m×0.25mm石英毛细柱
C3%SE-302mX2.6mm填充柱
柱温：A250℃B250~300℃程温，速率10℃/minC260℃检测器：FID280~300℃，汽化室：290~300℃Nz.A65mL/min+B1.25kg/cm,C2kg/cm2RT值.A4.98B7.4C3.49°
图1氯喹的气相色谱图
A：药物标准液
HP-5890B型GC/NPD，3365化学工作站GA/T198-1998
OV-125mX×0.25mmid）×0.32μm石英毛细柱柱温：240C保持3min，升温速率8℃/min升至280℃，保持8min检测器温：280℃，汽化室温：280℃N2:20Psi;H2.22Psi,AIR:55Psi
RT值：1—SKF525a（内标物）2.62min；2一氛喹4.49min
3-奎宁5.78min
4一优奎宁 6.27min
5士的宁8.39min
6一马钱子碱13.38min
图2氛喹等药物的GC图谱
8.5回收率计算公式
空白添加氯唑的峰面积(蜂高)傷×100外标法回收率（%）=
内标回收率（%）
等量已知氟喹的峰面积（峰高）值检材中添加SKF5z5A峰面积（峰高）值、X100
等量纯品SKF525A峰面积（峰高）值8.6检出限及线性关系
检出限50ng/FID，10ng/NPD，0～10μg/mL呈线性关系。9气相色谱定量分析
9.1试样制备
B：肝添加标准药物提取液
准确称取待定量检材2.0~5.0g，体液2.0~5.0mL各2份。称取相应的空白检材等量1份，添加氟唑标准10～50μg（根据检材初定量数据添加略高于初定值的量），各试样中添加SKFs25A内标物10~50μg。
9.2提取净化方法同第7章。
9.3色谱分析条件同8.1。
进样同8.2。
9.5记录
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记录检材及空白添加标准品及内标物峰面积（或峰高）值，计算各试样峰面积平均值，然后计算含量。
9.5.1内标法计算公式
校正因子=添加氮喹进样量(ug)α内标峰面积、X（用空白组织添加氛喹和SKFs25A的结果计算）内标进样量（ug）待测氟喹峰面积药物含量 X(μg/g(mL)=校正因子×待测氮唑峰面积X内标添加总量(μg)）内标峰面积X检材量g(mL)
9.5.2外标法计算公式
检材氮喹峰面积(峰高)XAX检材体积XV添药物含量XCμg/g（mL）))=
添加氟喹峰面积（峰高）X添加样品体积×V检×检材量(g（mL万式中：V添—添加样品进样体积，μL；V检——检材样品进样体积，μL；一添加氛唑的总量，g。
9.5.3相对相差计算公式
相对相差(%)=区-Xl、
式中：X1、X2—两份检材平行定量测定的数值；x—平均值。
10气相色谱分析结果评价
10.1定性分析结果评价
10.1.1回收率指标
5g空白组织中添加50~100μg氮喹标准品，或者检材中添加内标物的50~100μg，氯喹或内标物的回收率高于60%，空白无干扰，检材出现阴性结果可信；氟喹或内标物回收率低于60%，检材出现阴性时，不能作未检出结论，应重新操作。10.1.2定性必备条件
如何使用GC法定性，必须采用两种不同极性的色谱柱，或一根色谱柱两种不同的检测器，而且检材、空白添加、标准样品同时比对，检材中组分的保留时间与标准氯喹完全一致，空白无干扰，才能作出肯定结论。
如果采用一根色谱柱、一种检测器，必须配以其他分析方法，如TLC法一起检验，才能作出肯定结论。
10.2定量分析结果评价
两份检材在相同条件下所得出的氮唑含量相对相差不超过20%，说明定量数据可靠，否则说明操作有误，应重新定量。
第二篇薄层色谱法（TLC法）
11原理
本方法采用检材与空白添加的阳性对照检材及阴性对照检材同时经过提取、净化、浓缩到一定体积后，在薄层层析板上经合适的展开剂和显色剂分离、显色，以获得相同的R值及斑点颜色作为定性的依据。
12试剂
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12.1苯、已烷、环已烷、乙酸乙酯、二乙胺。12.2其他试剂同第5章。
13器材
13.1层析缸。
喷雾瓶。
紫外灯254nm。
玻璃毛细管。
微量注射器。
其他器材同第6章。
提取净化方法
14.1试样的制备
a）取绞碎的检材（肝、肾、胃、血等）5～10g，分别置于100mL具塞三角烧瓶中。b）取相应的空白组织（肝、肾、胃、血等）5～10g，2份，1份加100μL的氮喹标准（1mg/mL的氛喹标准乙醇液，添加100μL)作为阳性对照检材，另1份作为阴性对照检材。14.2提取净化方法同第7章。
15慈层层析分析
15.1薄层板
高效硅胶GFz5a薄层板，或者自铺的硅胶GF254薄层板（厚度0.25～0.3mm）。15.2点样
检材、阳性对照检材、阴性对照检材及氛喹标准样分别点于薄层板上，各提取液点10～15μL，标推品点2~5g。
15.3展开剂
氯仿：甲醇=9：1，R=0.22
环已烷：二乙胺=9：1，Rr=0.14环已烷·苯：二乙胺=15·3：4，R/=0.44苯：乙酸乙酯：二乙胺=7：2：1，R=0.3515.4显色剂及显色方法
15.4.1显色剂：碘化钾试剂
配方一：甲液0.85g次硝酸铋溶于10mL冰乙酸中，再加水稀释至40mL。乙液40%碘化钾水溶液。
临用时，取甲、乙两液各5mL，加冰乙酸20mL，水60mL，摇勾即可。配方二：取市售碘化铋钾试剂2g，加冰乙酸20mL溶解后加50mL水稀释即可。15.4.2显色方法
经展开后的薄层板，挥尽展开剂，直接喷碘化铋钾试剂，在浅黄色背景下显橙红色斑点。15.5检出限
氧喹检出限2μg。
16分析结果评价
16.1本方法回收率的估价
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5g空白检材中添加100μg氯喹标准，经提取浓缩到0.5mL，点样20μL，相当于4μg，如不出现斑点，说明回收率不好，此时如检材中未检出氯，不能作未检出结论，应重新操作。或者加大检材试液的点样体积，进一步证实是否有氮喹的斑点出现。16.2定性必备条件
体内组织中氯喹的薄层定性分析必须选用两种以上不同的展开剂，并且检材、阳性对照、空白对照、标准品同时进行比对分析，如果检材中出现与氛喹R值相同的斑点，而且空白无干扰，可作出肯定结论。如果薄层分析为阴性，而且又不能排除氮喹中毒时，建议用气相色谱法或色/质谱联用技术确证。A1理化性质
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附录A
（标准附录）
氯喹中毒有关参考资料
氮喹是人工合成的重要抗药，纯品为白色或微黄色结晶性粉末，无臭，味苦，微溶于水，溶于稀酸氛仿、乙醛，熔点87~92℃，沸点212~214℃（0.2mmHg柱）。医疗上常用磷酸氛喹，为白色结晶性粉末，味苦，易溶于水，熔点193～195℃。A2中毒症状
一次服用大量后，20～30min出现头剧痛，口渴、呕吐、耳鸣，瞳孔缩小，四肢抽搐，面色白，出虚汗，口唇青紫，口吐白沫，昏迷死亡。从服药到死亡多在1～2h。中毒致死量
对人的最小致死量为20mg/kg。有儿童吃1g，成人吃3～44g发生死亡的案例报道，也有报道氛喹致死量约为一日极的4～5倍。曾报道案例，口服磷酸氛喹0.25g/片的剂型，15～32片，1.5～2h内抢无效死亡者。
中华人民共和国公共安全
行业标准
中毒检材中氯喹的定性
及定量分析方法
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开本880×12301/16印张1字数17千字1999年7月第一版1999年7月第一次印刷印数1-600
书号：155066·2-12609
9定价10.00元
标目379—59
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