【GA公共安全标准】 中毒检材中敌敌畏、敌百虫的定性及定量分析方法

ICS_13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T187-1998
上海市技术蓝督情报研究所
登祀号QT994487
中毒检材中敌敌畏、敌百虫的
定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis forDDVP and trichorfon in case samples1998-12-08发布
中华人民共和国公安部发布
1999-03-01实施
GA/T187-1998
本标推的制定任务由全国刑事技术标准化技术委员会下达，由公安部第二研究所负责完成。公安部第二研究所毒化室自承担本任务之后，在原课题“有机磷农药中毒的检验”课题成果的基础上，协同北京市刑科所经过百余起案件的检验实践，起草了本标准。本标准适用于中毒或死亡者呕吐物，胃内容物，肠内容物，肝、血、肺中敌敌畏、敌百虫及其代谢物的分离、鉴定。本标准提供的分析方法实验证明，定性准确、定量重复性好，回收率指标及定量精度均符合要求。本标准的附录A是标准的附录。
本标准由中华人民共和国公安部提出。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。本标雁起草单位：公安部第二研究所、北京市刑科所。本标准主要起草人：赵敬真、徐婉、刘良声。1范围
中华人民共和国公共安全行业标准中毒检材中敌敌畏、敌百虫的
定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis forDDVP and trichorfon in case samples本标准规定了中毒检材中敌百虫和敌敌畏的定性及定量分析方法。GA/T187-1998
本标准适用于中毒检材中中毒者的呕吐物、吃剩的食物、胃吸出液以及中毒死亡者的胃内容物、胃组织、十二指肠内容物、血液、肺、肝以及注射部位肌肉和现场收集物证中的敌敌畏和敌百虫的定性及定量分析。
2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GA/T122-1995毒物分析名词术语GA/T101一1995中毒检材中有机磷农药的定性定量分析方法3定义
本标准采用GA/T122的定义。
第一篇
气相色谱法（GC法）
4原理
本方法采用气相色谱法的定性、定量分析方法，即检材与添加的已知对照和空白对照同时经过提取净化及浓缩至一定体积后，用火焰光度（FPD）或氮磷（NPD）气相色谱检测器进行检测，与标准农药比对，以RT值或RRT值作定性分析；与平行操作的阳性对照比较，以峰面积值为依据，用外标法定量计算各检材中农药含量。
5试剂（所用试剂均为分析纯）
5.1丙酮。
5.2二氟甲烷。
5.3氯仿。
5.4苯。
5.5乙酸乙酯。
5.6无水硫酸钠。
中华人民共和国公安部1998-12-08批准查标准上建标网wiz321.net
1999-03-01实施
5.7乙醚。
GA/T187-1998
5.8中性层析氧化铝（三级活度）：市售100～200目的中性层析氧化铝于130℃下活化3h，冷却后，加6%蒸馏水搅拌均匀后放回瓶内备用。5.9层析用活性炭（0.43μm粒度或20～40目）。5.10农药标准液
5.10.1敌敌畏、敌百虫单一标准储备液：精确称取适量的敌百虫、敌敌畏标准品，用丙酮或无水乙醇配成10.0mg/mL的溶液，作为储备液于一10℃冰箱中保存，使用期限1a。5.10.2敌百虫、敌敌畏单一标准液：将上述标准储备液用丙酮稀释10倍，配制成1.0mg/mL标准液供TLC法和提取添加用，使用期限0.5a。5.10.3单一标准工作液：将1.0mg/mL的标准液用丙酮稀释20倍，配成0.050mg/mL.浓度标准工作液供GC分析用（此浓度为50ng/μL，如果仪器检测灵敏度高，还可以在此浓度再稀释），使用期限3个月。
5.10.4敌百虫、敌敌畏混合标准工作溶液：取1.0mg/mL的单一标雅液各0.50mL装于20mL容量瓶中，然后加丙酮稀释到刻度即得0.050mg/mL浓度的敌百虫、敌敌畏混合标准工作液（临用时新配）。6仪器
6.1气相色谱仪，带有火焰光度检测器（或氮磷检测器）。6.2气相色谱数据处理机。
6.3电动振荡器。
6.4浓缩装置：K·D浓缩器等。
6.5微量注射器：10μL.50μL、100μL6.6玻璃净化柱等实验室常用玻璃器材。提取净化操作方法
7.1方法一
7.1.1试样制备
a）呕吐物、胃内容物1～2g，绞碎的肝、胃组织5g，血5mL分别装于100mL烧杯或蒸发皿中，加无水硫酸钠研磨成沙状（约30～40g），分别装于100mL的分液漏斗中。b）尿10~20mL装于100mL分液漏斗中。c）取相应的空白组织（一般胃组织或血）5g，共2份，其中1份加敌敌畏标准样品50～100μg作为已知对照，另1份作为空白对照。7.1.2提取
各试样用二氯甲烷-乙酸乙酯（3：1）50mL，30mL提取2次，每次振摇10～15min，分出提取液过柱。
7.1.3净化及浓缩
7.1.3.1装柱：取长约30cm，内径1.5cm玻璃柱（也可用50mL分液调斗代替），于柱底层塞上少许棉花，依次加人无水硫酸钠2g、中性层析氧化铝5～10g、顶端再压上5～10g无水硫酸钠。用二氯甲烷润湿柱子。
7.1.3.2过柱净化：将各试样的二氯甲烷-乙酸乙酯提取液分别倒人各柱中，流速120滴/min，待溶液流完之后，加20mL相同的提取溶剂洗脱柱子。7.1.3.3浓缩：将净化后的提取液于60℃温度下K。D浓缩至1mL供检验。7.1.4说明及注意事项
a）尿液提取后直接浓缩，不必过柱净化。2
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GA/T187—1998
b）检血如果为新鲜血，提取液只用滤纸过滤即可，不必过柱净化。c）检材若腐败或油脂较多时，可先将提取液浓缩至2～5mL，倒入柱项；再用50mL二氟甲烷或氯仿洗脱，或者适当加大氧化铝用量，K·D浓缩时加3～5mL乙酸乙酯。d）用氛仿作为提取剂效果也好。7.2方法二
7.2.1取新鲜检血2mL、肝组织2g、尿液5mL、胃组织2g、胃内容物1~2g，分别装于10~15mL的具塞刻度玻璃试管中，精确加人无水乙醚5mL，充分振摇提取10min，离心5min，分出乙醛上清液，直接进行GC分析。
7.2.2取空白血2mL共2份，其中1份加敌敌畏标准10g作为阳性对照，另1份作为阴性对照，分别装于10~15mL的具塞刻度试管中，精确加无水乙醚5mL，充分振摇提取10min，离心5min，分出乙醚上清液，直接进行GC分析。7.2.3注意事项及说明免费标准下载网bzxz
a）本方法适用于敌百虫、敌敌畏原体之外，还适用于其主要代谢物、磷酸三甲酯的检验。b）提取的检液如果太脏，可以通过中性层析氧化铝的微形柱净化后进行分析，这时乙醚的用量要适当加大。
c）检材中若药物的含量太低，可以在50℃下K·D浓缩至0.5～1mL后再进行分析。7.3方法回收率
5g胃或血中添加50～100μg敌敌畏标准。两种方法的回收率75%～85%。8定性分析
8.1气相色谱条件参考数据
8.1.1色谱柱
5%PEG-20MChromosorbW80100目填充柱；5%PEG-20M+10%DEGSChromosorbW80~100目1：1混装填充柱；10%PEG-20MChromosorbW80~100目填充柱；10%DC-200GasChromQ80~100目填充柱：5%QF-17+10%DC-200(1：1)GasChromQ80~100目混装填充柱；SE-30.OV-17、OV-101弹性石英毛细柱。8.1.2其他条件参考值
柱温：140~180℃；
进样温：190~240℃；
检测器温：FPD220~240C，NPD230~260℃。8.2进样
将各种检材提取液和添加已知标准品阳性对照提取液以及阴性对照提取液1～2μL注人设定好的色谱条件下分析，每个样品进样2～3次，并注入各单一标准品溶液进行对比。8.3记录
分别记录各样品的保留时间（RT值）填人GC外标法定性分析结果表中，计算RT值平均值与标准品比较定性；同时填人空白添加标准及已知标准的峰面积（或峰高）平均值，计算其回收率。8.4分析结果
见附录A（标准的附录）。
8.5外标回收率计算公式
等量已知百虫或故敌畏标准晶峰雷积(峰高)值×100空白添加敌百虫或敌敌畏峰面积（峰高）平均值外标回收率（%）=
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9定盘分析
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9.1要求定量时，每种检材必需取2份，以2份定量数据的平均值为检材含量值。检材的提取净化方法见第7章。
9.2色谱分析条件见8.1。
9.3进样见8.2。
9.4记录：记录检材及空白添加标准的峰面积值，填人GC定量分析结果表中，计算各检材及添加标准的峰面积平均值。
9.5含量计算公式及相对相差计算公式：检材药物峰面积峰高）值×AX检材体积XV添药物含量X（μg/g）=
添加药物峰面积（峰高）值X添加样品体积XV检X检材重量（g）式中：A—添加敌敌畏或敌百虫总量，g：V添添加检材进样体积，μL
V检——检材进样体积，μL。
相对相差(%) =≤l × 100
式中：X.X.两份检材平行定量操作测定值；—平均值。
10分析结果评价
10.1定性分析结果评价
10.1.1回收率指标
当添加于空白检材中的标准品回收率在50%以上时，不管检材出现阳性或阴性结果均属可信：如果回收率低于50%时，检材出现阴性结果，不能作否定结论，应重新操作。10.1.2定性必备条件
如仅用GC法进行体内DDVP和敌百虫定性分析，必须使用两种不同极性的色谱柱；或者色谐条件一致情况下，使用两种检测器定性。添加标准品、空白试样及检材试样同时进行比对，检材中农药保留值与已知农药保留值一致时，空白无干扰，才能做出结论。必要时用TLC法，GC/MS法验证。10.1.3代谢物或其降解、水解产物的鉴定a）DDVP和敌百虫均易代谢、降解或水解，敌百虫脱去一个分子的氟化氢生成敌敌畏。敌敌畏再水解或代谢而生成磷酸三甲酯、一氯敌敌畏、二氯乙酸等，而磷酸三甲酯在血液降解比较缓慢，故在办案中检出敌敌畏同时，也常检出磷酸三甲酯等，办案中应引为注意。如果办案中没有代谢物的标准品比对时，应依靠色-质谱确证。
b）敌敌畏中毒经抢救无效死亡或中毒死亡未能及时化验的情况下，在血液中往往不能检出其原形物，这时只能检验敌敌畏的代谢产物磷酸三甲酯、二氯乙酸，故应引为注意。10.2定量分析结果评价
2份检材在相同条件下所测出农药的含量相对相差不超过20%，说明检材的定量数据准确；如超过相对相差允许值，则定量数据不准确，应重新操作。1.1原理
GA/T1871998
第二篇薄层色谱法（TLC法）
本方法采用检材中的敌百虫、敌敌畏农药与空白检材添加标准敌百虫、敌敌畏标准品和空白检材同时经过提取、净化及浓缩之后，用薄层色谱法进行分离及显色，与标品比较以获得相同比移值（R：值）作为定性分析的依据。
本方法主要适用的检材是胃、胃内容物以及吃剩的食物，现场可疑物品等。12试剂
12.1硅胶G或硅胶GF254
12.2羧甲基纤维素钠（分析纯）。12.31%间苯二酚乙醇液。
12.45%氢氧化钠乙醇液。
12.5其他试剂同第5章。
13器材
13.1电动吸引器。
13.2微量注射器：10μL、100μL。13.3喷雾瓶。
13.4.其他器材同6.3~6.6。
14提取净化操作方法
同第7章。
注意：做薄层色谱定性分析，采取试样应适当地增加，一般采取5～10g试样。空白检材中一般添加50～100μg的敌百虫或敌敌畏。15定性操作
15.1薄层板
15.1.1自制硅胶GF254薄层板，薄层厚度0.25~0.3mm15.1.2自制硅胶CMC薄层板，薄层厚度0.250.3mm。15.1.3市售高效硅胶GF254薄层板。15.2展开剂
15.2.1氯仿：丙酮（9*1)。
庚烷：丙酮（1·1)。
石油醚：乙酸乙酯（1：1)。
环已烷：氯仿（1：1)。
15.2.5苯：环已烷（4：1)。
15.2.6环已烷·丙酮（4：1)。
15.3显色剂
15.3.1间苯二酚-氢氧化钠显色剂：配制方法见12.3~12.4。敌敌畏和敌百虫的显色灵敏度2～3μg。15.3.2碘化钾试剂：敌百虫显色灵敏度5μg配方一
甲液：0.85g次硝酸铋溶于100mL冰乙酸中，再加水稀释至40mL。5
乙液：40%碘化钾液。
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临用前，取甲乙液各5mL加冰乙酸20mL、水60mL摇勾即可。配方二取市售碘化铋钾试剂2g加冰乙酸20mL，溶解后加50mL蒸馏水稀释后摇匀即可。15.4点样
在薄层板的下端1cm处，用微量注射器或玻璃毛细管点提取试液的乙酸乙酯或丙酮液10～20μL，同时分别点敌百虫、敌敌畏2～5μg，各点间距1cm左右。15.5展开
将点好的薄层板放入饱和好的展开缸中，至10cm左右，取出，挥去溶剂，展开剂见15.2。15.6显色
15.6.1间苯二酚-氢氧化钠显色剂的显色操作将展开好的薄层板首先喷1%的间苯二酚乙醇液至潮湿后放置5～10min，再喷5%氢氧化钠乙醇液至潮湿，电炉上稍烘3～5min。如有DDVP或敌百虫则显洋红色斑点。15.6.2碘化铋钾试剂显色
将展开好的薄层板直接喷碘化铋钾试剂，敌敌畏显橙红色斑点：敌百虫不显色。15.7分析结果
见附录A。
16薄层色谱法分析结果评价
16.1回收率添加估算
本方法采取空白检材中添加100μg敌敌畏经提取净化后浓缩到500μL，点样30～50μL，如果空白添加样品出现明显的红色斑点而且空白无干扰，证明添加回收率达到要求；如果不出现斑点，说明回收不好，此时检材中未检出敌百虫、敌敌畏，不能作否定结论。16.2定性分析必备条件
a）做薄层色谱法定性分析，必须使用两种以上的不同的展开剂与标准品及空白检材进行对照分析，如果检材中出现药物的斑点R：值与已知药物斑点一致，显色斑点颜色相一致，空白无干扰，可得出肯定结论。
b）办案中如添加样品的回收率很好而检材的斑点不够清晰，可以加大检材的点样量再进行薄层分析而最后作出结论。
c）必要时，应用GC/MS法和GC法进行进一步分析。第三篇化学快速检验法
17间苯二酚-氢氧化钠法
17.1原理
检材中的敌百虫、敌敌畏在碱性条件下与间苯二酚反应生成红色化合物。本反应适用的检材为呕吐物、胃内食物和吃剩的食物等。17.2试剂及器材
17.2.1试剂
5%间苯二酚乙醇液；
5%氢氧化钠水溶液或饱和碳酸钠水溶液。17.2.2器材
500~1000W普通电炉；
定性滤纸及常用玻璃器材。
17.3操作
GA/T187-1998
取检（胃内容物、呕吐物等）0.5～1g或检材提取液1～2滴置于滤纸上，稍干，加间苯二酚乙醇液1～2滴，氢氧化钠溶液1～2滴，在电炉上微烤片刻，如有敌百虫、敌敌畏，即显红色。或者：检材的提取浓缩液0.1~0.2mL装于尖底试管中，加间苯二酚乙醇液1~2滴，水浴上稍加热，敌百虫、敌敌畏显红色。
17.4反应定性评价
17.4.1本反应适用于现场快速定性分析，如果出现阳性，应在实验室内进一步定性确证。17.4.2本反应的灵敏度10~25μg。二溴磷、水合氯醛和氯仿也出现类似红色，应注意排除干扰。17.4.3
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附录A
（标准的附录）
敌百虫，敌敌畏农药中毒诊断及分析参考数据A1敌百虫、敌敌畏农药中毒诊断与常见有机磷类农约中毒相同，见GA/T101一1995附录部分。A2DDVP、敌百虫的薄层分析法参考值如表A1所示。
展开剂
氯仿丙酮=9：1
庚烷·丙酮=1·1
石油醚·乙酸乙酯=1：1
环己烷：氯仿=1：1
苯：环己烷=4：1
环己烷·丙酮=4·1
A3DDVP、敌百虫气相色谱定性参考数据敌百虫
a）在PEG-20M柱上DDVP及其代谢物的分离图如图A1所示。EL
日立163气相色FPD-P
敌敌畏
(1)一磷酸三甲酯
(2)一一氢敌敌畏
(3)一去甲基DDVP
(4)-DDVP
(5）一未知峰
(6)一未知峰
5%PEG-20MChromosorbWAW（526nm）80~100目2mX4mm(id.）玻璃填充柱柱温：150C；汽化室温：180℃；检测器温：200C，高纯Nz：50mL/min图A1DDVP中毒者血液乙醚提取的气相色谱图8
GA/T187-1998
b）在QF-1及DC-200填充柱上DDVP和敌百虫的分离图如图A2所示。2
Z型GC/FPD
A：5%QF-1+10%DC-200(1:1)GasChromQ80~100目2m×2.6mm玻璃填充柱
2m×2.6mm玻璃填充柱
B:10%DC-200GasChromQ80~100目柱温A.180℃,B:170℃
汽化室温：220℃C：检测器温，FPD230℃高纯NzA：28psi;B.35psisHz20psi;AIR.26psiRT值，minA：1—敌百虫0.7;
2-DDVP1.1
B:1一敌百虫
2-DDVP0.9
图A2DDVP及敌百虫的气相色谱图中华人民共和国公共安全
行业标准
中毒检材中敌敌畏、敌百虫的
定性及定量分析方法
GA/T187—1998
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
话：68522112
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售版权专有不得翻印
开本880×12301/16
印张1字数18千字
1999年7月第一版
1999年7月第一次印刷
印数1-600
书号：155066·2-12598
定价10.00元
标目379—49
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