【GA公共安全标准】 中毒检材中苯唑卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因的GC/NPD定性及定量分析方法

ICS_13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T 190—1998
上海市技求监督嘴报研究所
登设号QT994490
中毒检材中苯唑卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因的GC/NPD定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis forbenzocaine,lidocaine,procaineamethocainebupivacaine in case samples by GC/NPD1998-12-08发布
中华人民共和国公安部发布
1999-03-01实施
GA/T190—1998
苯唑卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因在医疗上一般作为手术时的麻醉止痛药物，它们止痛作用迅速，有的在3～5min内即生效。常有用药不当引起中毒或怀疑中毒的事件发生，在中毒案件及事故中需要对中毒者的血液、肝组织、现场物证进行定性及定量分析。经1993年至1994年公安部立项研究，通过大量研究实验和实际案例、事故的应用，形成了较成熟的对苯唑卡因、利多卡因、普自卡因、丁卡因、布比卡因的分析方法。在此基础上制定出《中毒检材中苯唑卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因的GC/NPD定性及定量分析方法》标准。本标准的主要内容为用GC/NPD方法分析五种局部麻醉药的原理、试剂、仪器、操作方法及结果评价。本标准适用于中毒后胃及内容物、血、肝、注射部位肌肉及现场物证等检材中五种局麻药的分析。本分析方法回收率可达70%以上，血中检出限为10～20ng/mL。本标准的附录A和附录B都是标罹的附录。本标准由中华人民共和国公安部提出。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会归口。本标准起草单位：公安部第二研究所。本标准主要起草人：封世珍、李双庆、李玉兰、孙静、王芳琳。1范围
中华人民共和国公共安全行业标准中毒检材中苯唑卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因的GC/NPD定性及定量分析方法
Methods of qualitative and quantitative analysis forbenzocaine,lidocaineprocaine,amethocaine,bupivacaine in case samples by GC/NPDGA/T190—1998
本标准规定了局部麻醉药物引起的中毒案件或事故中对有关检材进行分析检验时的操作步骤、计算方法及结果评价。
本标准适用于苯唑卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因五种药物引起中毒后的现场物证、生物样品中的药物定性及定量分析。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GA/122—1995毒物分析名词术语3定义
本标准采用GA/T122的定义。
4分析方法
本方法适用的检材有：怀疑引起中毒的现场物证；中毒者的血液、尿液、肝组织；口服者还需提供胃内容物、胃组织。
4.1原理
生物体液及脏器、现场物证中的苯唑卡因，利多卡因，普鲁卡因、丁卡因、布比卡因等局部麻醉药用SKF525A内标物，并用平行提取的添加标准品、空白脏器为对照进行质量控制。经用液一液萃取或液一固萃取净化后，选用配有氮磷检测器的气相色谱仪分析，可对中毒者体内治疗量、中毒量以上的药物进行定性及定量分析。
4.2试剂（所用试剂均为分析纯）4.2.1乙醚、二氯甲烷、异丙醇、氯仿。4.2.2.Na2CO固体试剂。
4.2.3饱和Na,CO.溶液。
4.2.41%HCI水液。
中华人民共和国公安部1998-12-08批准查标准上建标网wwiz321.net
1999-03-01实施
GA/T190—1998
4.2.5pH9缓冲液：1MNaHCO，用1MNazCO，调节pH值为9。4.2.6GDX-403（或GDX103.C1a等）固相小柱（用前先用5mL甲醇淋洗，然后用5mL水淋洗进行活化）。
4.2.7药物标准溶液
4.2.7.1单一药物标准溶液
分别取苯唑卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因各药物纯品用乙醇配制成1mg/mL的标准溶液，置一10℃冰箱保存，此液可使用1a。4.2.7.2混合药物标准使用液
取上述4.2.7.1中各药物的标准液1.0mL装于同一个10mL棕色容量瓶中，加乙醇至刻度，得0.10mg/mL的混合标准液；再用乙醇稀释10倍，得0.010mg/mL的混合使用液，使用期7a。4.2.7.3内标物溶液
称取SKF25A药物纯品，用无水乙醇配制成1.0mg/mL的标准贮存液，置一10℃冰箱保存，此液可使用1a。取此液稀释成0.10mg/mL和0.010mg/mL的使用液，冰箱保存，使用期10a。4.2.7.4带内标物的混合药物使用液取前述4.2.7.2项的混合药物0.10mg/mL的标准液及4.2.7.3项的内标物0.10mg/mL的溶液各1.0mL装于10mL棕色容量瓶中，加无水乙醇至刻度，得每毫升乙醇含各药物及内标物0.010mg的使用液，冰箱保存，使用期7a。4.3仪器
4.3.1配有氮磷检测器的气相色谱仪。4.3.2积分仪或微处理机。
4.3.310μL微量注射器。
4.3.4振荡器。
4.3.5水浴锅或加热器。
4.3.6离心机。
4.4操作方法
4.4.1定性分析
4.4.1.1提取与净化
4.4.1.1.1液液萃取法
取检材血2.0mL或绞碎肝组织2.0g装于15mL具塞试管中，加含内标物的使用液200μL（0.01mg/mL），混勾，加5~6滴饱和NazCO.溶液调节pH值为11~12：用7mL乙醚振荡提取至少5min，离心，分出乙液装于另一个具塞试管中，加1mL蒸馅水振0.5min洗涤一次，离心，用吸管吸出上层乙醛液装于小烧杯中。检材再用7mL乙醚振提5min，离心后分出的乙醛液合并到小烧杯中，在40C下加空气流吹干。烧杯中药物用1%HCl共8mL分3次溶解，经滤纸分次过滤到15mL具塞试管中，用Na.CO固体调节pH值为11～12用2mL氢仿振提5min，离心，吸出上层水液弃去，小心吸取底层溶剂于另一个尖底离心管中（勿带水份），在60～70℃下用空气流吹干。加100μL甲醇强振溶解，供分析。
4.4.1.1.2液一固萃取法
取检材血1.0mL（或尿5~10mL）装于10mL试管中，加入内标物使用工作液100μL（0.01mg/mL），加5mLpH9缓冲液稀释；稀释液转人已活化的固相柱中，流速为2mL/min左右：待检液全部流出以后，加5mL蒸馏水淋洗小柱，待水液全部流出以后，弃去流出水液。用柱下抽气或柱上加压法使柱中残留水份彻底流出，再用46mL的二氛甲烷/异丙醇（3：1）洗脱，收集洗脱液于尖底试管中，如洗脱溶剂项部有残留水份，应离心后用吸管吸出并弃出。在60～70℃下用空气流吹干，50～100μL甲醇溶解，供分析用。
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4.4.1.1.3直接提取法
GA/T190-1998
取现场物证，如注射器、空瓶、针头等直接用甲醇浸泡提取，浓缩后供分析用。检材若为水溶液，直接用氮仿提取，分出氯仿液，浓缩至干；甲醇溶解后供分析用。4.4.1.2分析条件
4.4.1.2.1色谱柱
OV-17弹性石英毛细色谱柱，25m×0.22mm(id)；3%OV-17玻璃填充柱，2mX0.2cm(id）。4.4.1.2.2温度参考条件
毛细管色谱柱进样口温：250℃、检测器温（NPD）：280C；4C/min
柱温230℃（1min）-
280℃。
填充色谱柱进样口温：280C.检测器温（NPD）：280C：4c/min
柱温230℃（1min）-
280℃。
4.4.1.2.3气流参考条件
毛细管柱载气（Nz)0.75mL/min，分流比40：1：填充柱载气（N2)40mL/min；
空气和燃气（H2)选用仪器最佳条件。4.4.1.3检测
4.4.1.3.1进样
将各样品提取液、混合药物标准液、单一药物标准液、内标物标准使用液1.0μL注人上述分析条件的色谱柱中，每个样品进样2次。4.4.1.3.2记录
分别记录各样品的保留时间（RT)值，并记录内标物标准使用液和检材样品中内标物的峰面积平均值。
4.4.1.3.3计算
a）计算各标准品，内标物，检材样品中各成分的RT平均值，并以内标物RT值为1计算其他成分的相对保留时间RRT值。
b）计算检材样品中添加内标物的回收率，公式如下：内标物的回收率（%）
4.4.2定量分析
4.4.2.1提取净化
检材样品中内标物峰面积平均值X100
等量内标物标准品峰面积平均值如选用液一液萃取法需取2g检材2份，如选液一固萃取法器取1g检材2份，并取相应的空白样添加经定性分析后的待测药物一定量（1～5μg），在检材和添加样品中加人内标物标准使用液15μg（视含量定）。以下操作按4.4.1.1.1或4.4.1.1.2步骤进行。4.4.2.2分析条件
按4.4.1.2中GC定性条件进行定量分析。4.4.2.3测定
4.4.2.3.1进样
取各检材和添加样品提取液1.0μL注人色谱柱中，各进样2次。4.4.2.3.2记录
记录检材和添加样品中药物和内标物峰面积值。4.4.2.3.3计算
a）计算峰面积平均值，填人上述记录中。查标准上建标网wwwiz321.net
b）按下列公式计算校正因子
校正因子于二
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待测药物进样量（ug）×内标峰面积。（用空白添加的结果计算）
内标进样量（ug）×待测药物峰面积c）按下列公式计算药物含量，填人定量分析结果表中。校正因子×待测药物峰面积×内标添加量（μg）药物含量XCug/g（mL））=
内标峰面积×检材量Lg(mL)
d）按下列公式计算相对相差
区-l×100
相对相差（%）=一
式中：X1、X两份检材平行定量测定的数值又——两份检材含量平均值。
4.5结果评价
4.5.1定性分析结果评价
4.5.1.1回收率指标
当添加在检材中的内标物回收率大于50%，且空白溶剂、空白检材无干扰时，无论阳性结果或阴性结果均可靠：如回收率低于50%，阴性结果不可靠，需重做。4.5.1.2定性分析必备条件
阳性结果必须在两根不同极性的色谱柱上与已知纯品药物取得一致的RT或RRT时，方为可靠：也可选择HPLC.GC/MS、TLC等其他方法验证分析。4.5.2定量分析结果评价
2份检材平行操作所测得的药物含量的相对相差小于等于20%，说明定量结果可靠，其含量按两份检材平均值计算；如相对相差大于20%，其定量结果不准确，应重新实验。GA/T190—1998
附录A
（标准的附录）
五种局部麻醉药物及内标物色谱图及分析数据五种局部麻醉药物及内标物气相色谱分析图A1
如图A1所示。
一苯唑卡因3.28min），2一利多卡因（5.16minm），3-普台卡因（6.79min）：4一内标物SKFs25A（8.52min）5一丁卡因（8.91min）6-布比卡因（9.69min）GC条件：OV-17弹性石英毛细柱，25m×0.22mm4c/min
柱温：230℃(1min）
+280℃，进样口温：250℃：检测器温：280℃：Nz:0.75mL/min.H2.3.5mL/min.Air：100mL/min；分流比.40：1图A1
A2五种局部麻醉药及内标物平均回收率及检出限如表A1所示。
回收率，
液一液萃取法
液一固萃取法
检出限，ng/mL血
添加药物盘
2mL血加
1mL血加
莱唑卡因
中毒数据参考值如表B1所示。
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利多卡因
普鲁卡因
附录B
（标准的附录）
中毒数据参考值
内标物
表B1血中有关药物正常、中毒、致死浓度数据药物
利多卡因
普鲁卡因
布比卡因
治疗量
0.022~0.345
中毒盘
丁卡因
布比卡因
mg/100mL
致死量
注：数据摘于Charles L.Winek.Ph.DDrug and Chemical Blood-Level Date》，1989年，美国匹兹堡大学。6
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中毒检材中苯唑卡因、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因的GC/NPD定性及定量分析方法
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印张3/4字数13千字
开本880X12301/16
1999年7月第一版1999年7月第一次印刷印数1-600
书号：155066·2-12601
定价8.00元
标目379—51
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