【GB国家标准】 高致病性禽流感诊断技术

GB/T 18936—2020 高致病性禽流感诊断技术 (Diagnostic techniques for highly pathogenic avian influenza) 前言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。本标准代替 GB/T 18936—2003《高致病性禽流感诊断技术》，与 2003 年版相比，主要技术变化如下：增加了禽流感病毒 RT-PCR 试验（见第 8 章）；增加了禽流感病毒实时荧光 RT-PCR 试验（见第 9 章）；删除了琼脂凝胶免疫扩散 (AGID) 试验（见 2003 年版的第 4 章）；删除了间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)（见 2003 年版的第 5 章）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国农业农村部提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会 (SAC/TC181) 归口。 本标准起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中华人民共和国北京海关、中国动物卫生与流行病学中心。 本标准主要起草人：王秀荣、田国彬、刘环、邓国华、蒋文明、施建忠、曾显营、李雁冰、谷强、孙晓东、陈化兰。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T 18936—2003。 1 范围 本标准规定了高致病性禽流感临床诊断，样品采集、保存与运输，病毒分离与鉴定，血凝和血凝抑制试验，禽流感病毒 RT-PCR 试验和禽流感病毒实时荧光 RT-PCR 试验的技术要求。本标准适用于高致病性禽流感的诊断、检疫、检测、监测和流行病学调查等。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 19489 实验室生物安全通用要求 NY/T 765 高致病性禽流感样品采集、保存及运输技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 高致病性禽流感 (highly pathogenic avian influenza, HPAI)：由正黏病毒科流感病毒属 A 型流感病毒引起的以禽类为主的急性传染病。 3.2 血凝 (hemagglutinin, HA)：流感病毒颗粒表面的血凝素蛋白，具有识别红细胞表面受体并使红细胞凝集的特性。 3.3 血凝抑制 (hemagglutinin inhibition, HI)：抗体特异性地附着在 HA 分子的抗原位点上，干扰流感病毒 HA 与红细胞受体之间的结合，抑制了流感病毒 HA 凝集红细胞的能力。 3.4 反转录聚合酶链式反应 (reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)：一种用于放大扩增特定的 RNA 片段的分子生物学技术。先用 RNA 反转录为 cDNA，然后以 cDNA 为模板进行 PCR 扩增的过程。 3.5 实时荧光 RT-PCR (real-time RT-PCR)：利用荧光信号累积实时监测整个 PCR 进程的一种扩增核酸方法。 3.6 Ct 值 (cycle threshold)：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值所经历的循环次数。 4 临床诊断 4.1 易感动物 鸡、火鸡、鸭、鹅、鹑、雉鸡、鹧鸪、驼鸟、孔雀等多种类易感，多种野鸟也感染发病。 4.2 临床症状 4.2.1 精神沉郁，嗜睡，头翅下垂，呆立；食欲不振；呼吸困难，有呼吸道症状。 4.2.2 鸡冠发红、发紫；眼结膜发红；排黄、白、绿色稀便，并有未完全消化的饲料；脚鳞或有出血。 4.2.3 产蛋下降，软壳蛋、畸形蛋增多；有歪脖子等神经症状。鸭、鹅等水禽可见神经和腹泻症状；有时可见角膜发红、充血。