【行业标准】 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 胶体金法

ICS65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T2550—2014
饲料中黄曲霉毒素B的测定
胶体金法
Determination of aflatoxin B, in feed--Colloid gold method2014-03-24发布
2014-06-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB/T1.1—2009给山的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口，NY/T2550--2014
本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。本标推主要起草人：李培武、姜俊、张奇、」小霞、张文.张兆威、王督、唐晓倩。E
1范围
饲料中黄曲霉毒素B，的测定胶体金法本标准规定了胶体金法测定饲料中黄曲每毒素B，的方法本标准适用于饲料和饲料原料中黄曲霉毒素，测定。本标准黄曲霉毒素B，检出限为1.0μg/kg。2规范性引用文件
NY/1 2550—2014
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注期的用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注月期的引用义件，其最新版木(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
试样中黄曲毒素B在层析过程中与胶体金标记的特导性抗体结合·抑制了抗体和俏酸纤维素膜检测线上黄曲需毒素B，-3SA偶联物的免疫反应，使检测线颜色变浅，通过检测颜色变化进行测定。4试剂
除非另有规定·仅使用分析纯试剂。4.1水，按照GR/T6682中的要求，-级。4.2蔗糖(C2H22O）。
4.3牛而清白蛋白（TSA)）纯度大于98%4.4吐温-20(C%H:O2;)。
4.5 甲醇(CH.OH)。
4.670%甲醇溶液：胶70.0ml.巾醇（4.5）.加水（4.1)30.0mL，混句。4.7样品稀释液：取1.0g熙糖（4.2)、0.5g牛血清白蛋白（4.3）和2.5g吡温-20(4.4)解于100.0ml水(4.1)巾
4.81000ng/ml,黄册霉每素B标准溶液。4.9100ng/ml.黄曲等毒素13,标准储备液：准确吸取黄曲霉年素B:标准溶液（4.8)1.0ml.丁10ml.容量瓶中，醇定容。4℃可保存3个月。警告：
拍丁英曲毒素毒性很强-试验人员应注意自我保护。操作时，应避免吸人、接触黄曲寄毒素标准溶液，标准溶液配置应在通风橱内进行，下作时应戴眼镜，穿工作服，戴医用乳胶手套。凡接触黄曲霉毒索的容器，需没入10不次氯校钠溶液12h以上。同时，为了降低接触黄曲零毒素的机会，本标准鼓励育接购实并伙用黄曲霉毒索的有证标准储备液。5仪器设备
5.1光谱成像检测仪或胶体金免疫层析检测仪：图像分辨率优于2048×1532dpi。5.2分析犬平：感量0.1g，
5.3分样筛：20月。
5.4均质机，转速大于等于20000r/minNY/T2550—2014
5.5漩涡混合器。
5.6恒温装置：(37.0=2.0)℃：
5.7微量移液器:1 μL_-~10 μl,10μl-~100μL,100μl.1 000 μl-。5.8黄曲霉毒素I3I胶体金免疫层析装置（图1)：固定黄曲霉毒素B:-BSA偶联物，检测灵敏度不低丁0.3μu/kg·用于样品中黄曲霉毒素及黄曲霉毒素B,-BSA偶联物与胶体金标记抗体反应的载体说诞明：
(a)证正规图
纸板；
吸水；
检视悼：
金标势：
b测视图
一样品垫；
顾控线；
图 1黄曲霉毒素B,胶体金免疫层析装置5.8.1黄曲等毒素B-BSA偶联率为1：5)~(1：20)(BSAAFB)。5.8.2样品垫：玻璃纤维.聚酷纤维或纸质薄片5.8.3硝酸纤维素模：411毛细时间不小于135s.5.8.4金标垫：附着有5ul.胶体金标记的黄得毒素B.抗体。5.8.5吸水纸。
5.8.6底板，
5.8.7 连接胶带。
5.9中速定性滤纸。
净化柱:3 mL硅胶 SPE杜。
6分析步骤
6.1试样制备
样品粉碎至食部通过分样筛（5.3），充分混合。2
6.2前处理和空白基质溶液制备
6.2.1前处理
NY/T 2550--2014
准确称取25.0g试样置于烧杯中，准确加人100mI1醇溶液（4.6），用均质机（5.4)在20000I/inin条件下提取2min，静置1.mit1.中速定性滤纸（5.9）过滤，收集滤液，取2.Cml滤液过净化柱（5.10).收集净化液。稀释液（4.7)稀释净化液至黄曲需毒素B1胶体金免疫层析装置（5.8)检测范围内，游涡混合器（5.5）混匀·备用6.2.2空白基质溶液制备：取阴性样品.按6.2.1制备空白基质溶液，备用，6.3100μ1.稀释后的净化液（6.2.7)加入于黄曲荐毒素B胶体金免疫层析装置（5.8)内.恒温装置(5.6)中反应【0min,
6.4上机(5.1)检测。
6.5标准曲线
分准确吸取黄霉毒素B标准储备液（4.9)0.(000ml、0.001mL.0.005ml.、0.010ml、0.020L、C.050ml、0.100mL.0.150mL于10ml.容量瓶中.用空白基质溶液（6.1.2）定容，分别相当丁0.00 ng/mL.0.01 ng/mI..0.05 ng/ml..0.10ng/ml..0.20 mg/ml..0.50 ng/mL,1.00ug/ml.,1.50 ng/ml-浓度标准工作溶液。由低到高浓度进行（6.3、6.4)检测，根据检测线T信号值与质控线（信号俏的比值(I/C)和标准工作溶液浓度的对数值(logc)建立黄曲露毒素B标准曲线。7结果计算
7.1胶体金免疫层析装置有效确认黄曲霉薛素胶体金免疫层析装置质控线山现红色条带，视为胶体金免疫层析装置有效，可旧目测法或光谱成像检测仪或胶体金免疫层析检测仪（5.1)测定结果；如渠胶体金免疫层析装置质控线不山现红色条带、弥敢或严重不均勾，视为胶体金免疫层析装置失效，需重新检测。7.2目测法
黄曲霉毒素B胶体金免疫析装置中检测线出现红色条带，表示样品中黄曲霉毒素13，含量小于其限量值，判定为阴性；黄曲霉毒索胶体金免疫层析装置中检测线未山现红色条带，表示样品中黄曲霖毒素B含量大于其限量值，判定为阳性。7.3仪器法结果计算与表示bzxZ.net
试样中黄曲霉毒索B，含量以质量分数X计，数值以微克每于克(ug/kg)表示，按式(1)计算。X=区VXn
式中：
p——从标准曲线上查得的测定液中黄曲霉毒素B含量的数值，单位为纳克每毫升（ng/ml.)；V样品测定液体积的数值，单位为毫升（mL）；n一试样稀释倍数的数值；
n一试样质量的数值，单位为克(g)。计算结果保留到小数点所一位。8精密度
8.1重复性
采用仪器法测定，在重复性条件下，黄曲赛毒素B，含量不大丁1.0.u/kg时，两次独立测定结果的相对相差不得超过20%；黄曲需毒素B含量人于10.0/kg时，两次独立测定结架的相对和差不得超过15%，
NY/T 2550-2014
再现性
采用仪器法测定.在再现性条件下.黄曲得毒素伤含量不大了10.0ug/kg时，两次独立测定结果的相对相差不得超过30%；黄曲霉毒素3，含量大于10.0ug/kg时.两次独立测定结果的相对相差不得超过 20%。
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