【行业标准】 小麦黄花叶病测报技术规范

ICS65.020.01
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 2040—2011
小麦黄花叶病测报技术规范
Rules for investigation and forecast technology of Whcat Yellow Mosaic2011-09-01发布
2011-12-01实施
中华人民共和国农业部发布
本标准接照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部种业管理司提出并归口。本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心。本标准主要起草人：曾娟、姜英、周彤、吴燕、高军。YIKANKAca
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1范围
小麦黄花叶病测报技术规范
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本标准规定了小麦黄花叶病相关术语和定义、病情系统调查利普查方法，土壤和小麦植株怜毒率测定、发生程度预测及测报资料收集、汇报和江.总等方面的技术和方法。本标准适用于冬麦区小麦黄花叶病调查和预测预报。2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。病原物pathogen of wheat spindlestreak diseasc小麦黄花叶病《曾称小麦梭条斑花叶病）病凉物为小麦黄花叶病毒（Wheatyellowmosaicvirui，以卜简称WYMV)，属冯铃薯Y病毒科大麦黄花叶病毒属，2.2
传毒介体及传播方式vectorandtransmissiunofWYMVWYMV的传毒介休为禾谷多黏菌（Patymyan grtminisIerl.），是：种习居于土壤中的低等菌物.也是专性寄生于小麦根部的弱寄尘菌。WYMV的传播方式为承容多黏菌脑内传播，即病带存在于休眠孢子内，休眠孢子萌发后产生游动抱下，病牵随游动孢子侵入植物根部细跑而进入植株体内。良然条件下，WYMV主要通过带菌（病）病工、病根残休随病出流水等方式扩散传播。实验家小也可经病铢汁液摩擦接种传播，不能经种了、昆出传播。
病情严重度weverity levcl of disease挤植株各部分及整体发病的程度：小麦黄花叫病的病情严重度，以叶片花叶、黄化和坏死程度、条纹斑占叶面积比率、心叶受害程虚、植株整体矮化程度等要素划分，共分4级：0级：无症状：
1级：轻度花叶（即般不产生明显的条纹斑），叶片不黄化或仪少数叶片黄化，植株矮化不明显：2级：花叶明显（即条纹斑明显但占叶面积的50%以下），部分叶面黄化，少数叶片枯死，分案黄化萎缩.病株轻度矮化，
3级严重花叶（即条纹斑占叶面积的50添以上），心时扭曲或呈缩顶状，叶片普遍黄化，部分叶片及分躯或整株粘死，植株明品矮化。2.4
病情指数diseascindex
反映某一用块内病害发牛的普追性和严重程度的综合指标，用以表示病害发生的平均水平、按式(1)进行计算：
式中：
-病情指数；
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各严度级值；
各严重度级值对应病株数；
调查总株数。
平均病情指数averageofdiseascindex指某一地区病情普查中,各种发病水平的用块在总调查用映中所占比例的综合权重值。按式(2)进行计算：
式中：
平均病情指数；
病情普查中病用序号(n=1,2.3.*,N);病情查中详纫调查的病出数：
I,—各病目应病情指数;；
F-病情普查病率
3发生程度分级指标
小麦黄花叫病发牛程度以平均病情指数为主要指标，以地区内的病出率为参考指标确定。发工程度划分为5级即轻发尘（1级）偏轻发生（2级）等发生（3级）编重发牛（4级）、大发牛（5级）.各级指标见表1。
表 1小麦黄花叶病发生程度分级指标发生程度指标
平齿病指数
病州率(F),
4病情调查
4.1系统调查
4.1.1调查时间
0. 00 --I,.,1
10-1.-~20
小麦播种后 30孔率越冬前，以及小麦返市期至灿穗期,每15天调否1次：4.1.2调查地点
选择常年发尘严重地势低注、种植感病品种、插种期煸球的3块日作为系统调查对象巴。4.1.3调查方法
每块田单对角线5点取样，两头的点跑地边2m以上，其余3点等距取详，每点查50株，调查病株率、病情严重度，并计算病情指数。将调查结果记人小麦黄花叶病定点病情系统调查表（谢录A衣A. 1)。
4.2病情普查
4.2.1调查时间
秋节期在系统训查日见病5d-7d底普查--次，春季返肯期在系统调查田见病5l~-7d后及发病高择期各普查一次，
4.2.2调查方法
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选择能代表当地小麦主裁品种，种植方式（播期早晚、播种量，条播或撒播）裁培条件（施肥和灌溉水平）和长势（好、中、卷)的100夹田，用日测法观察出块4有无病株计算病用率。在病田中随机选择10块田进行病情详细调查：具休方法见1.1.3.根据各病用病情指数和病率，计算该次普查平均病情指数。结巢记人小麦黄花叶病病俏普查表（见录A表A.2)及小麦黄花叶病模式报表（见阴录B)。5根际土壤和小麦植株带毒率测定5.1调查时间
在秋苗期普查以及返青期第一次普查时进行，5.2采样方法
在发病凸块调查的5个取样点中，每点随机选择10株（丛）作为采样点，每点取小麦根系3c1以内，距土表0m左右的根际土壤10及对应植株小麦叶片5片作为测定标样。5.3测定方法
根据酶联免疫吸检测法原理（参见附录C).采用斑点免疫法（Dot-immunohinclirassay，DIBA，参见附录I)进行测定：
根据测定标样晕阳忆反应（蒂毒情况，按式（3)计算根际土爽或小麦叶片带毒率：V-
式中：
V-带毒率；
S带毒标样数；
Z.测定总标样数。
6预测方法
根抛小麦品种感病性、小播小麦而积比率、恨际土壤和小麦植株带毒杀、小麦越冬期及返期天气情况，采用综合分析法预报发生趋势。荐以下条件皆满足，则病害将严重发生。a）品种感病；
b）早播小麦面积比率大（占20%以上）；c）上年发病情况(达中等以上程度发牛)；秋手播利后多丽气温较低（4%℃~13℃，最适气温为10℃；d
e）冬季（小麦越冬期)寒冷(气温为5r以下)：）春连续低漏（气温保持在5℃～17℃之间拆续30d以上，最适气温为15℃：7测报资料收集、汇总和汇报
7.1资料收集
小友播种期和各期播种的小麦面积，及其他必需的培管理资料，主要品种的栈培而积、生育期和抗病性，以及当地气象台站)主要气象要案的预测值利实测值7.2资料汇总
对小麦黄花叶病发生期和发生最进行统计汇.总，记载小友种植和病害发生，防治情况，总结发生特点，进行原因分析，结果记人小友黄花叶病发生防治基本情祝记载表(见附录A表A.3)。7.3资料汇报
全国区域性测报站每年定时写小黄花叶病卓春模式报表（见附录B)报上级测报部门。3
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附录A
【规范性附录】
小麦黄花叶病调查资料表册
农作物病虫调查资料表册
小麦黄花叶病
（北纬：
测报员
负责人
东经：
海拔：
全国农业技术推广服务中心编制HYI KANT KAca-
调查地块
序号，品种播期，
调查发病
调查山茨
地点总数
小左种粗情况：
小麦积，htu
主裁品种
早播面积，hn
灌溉面积,hum
施斯而积识，h
率%序号
调查总
小麦黄花叶病病情系统调查表
点病抹数
病抹率
表A2小麦黄花叶病病情普查表
发病日块调萨
（早/中/
谢查！
满株率
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各级严重度病株数
各级严重度病蛛效
表A.3小麦黄花叶病发生防治基本情况记载表（麦收后汇总企省情况，省站及时「报）耕地面积，hm
小凌黄花川煸发生情况：
发病面积，hcu
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指数！指激
小麦面片耕范面积比率，泥
占小麦面积比率，
古小麦而积比率,%
占小皮面积比率,为
占小麦间积比率，步
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成灾(产30%以上)面积，b
防冷情况：
抗病品种种植面积、hm
最终发牛程度
发生和防治积况与原因简述
表A.3（续）
实际报失、
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占发病面积比率，%
过肥(返青期施氮肥)而积，hr
境回损失.t
附录B
(规范性附录）
小麦黄花叶病测报模式报裹(MWYMA)要求汇报时间：秋苗期普查和返青期第一次普查后汇报窖报内容
病出模式报表名称
二期（月/口）
模际L壤带尊率，K
小左叶片带毒率，为
小友早潘面积比率，兆
小发早播比历年平均值增赢，%
病四率，与
平均病情措数
平均病情指数比历年平均值减，5预计发病程度（微）
预计发病面积.hm2
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查报结果
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附录‘
(资料性附录】
酶联免疫吸附法检测原理
将酶分子与抗休或抗体分子共价结合此种结合既不改变抗体的免疫度应活性，过不影响酶的生物化学活性，此嗨标记抗体可与存在于红织细胞或吸附丁固相载体上的抗源载抗体发牛特异结合。滴加底物溶液后，底物可在海作用下催化底物水解，氧化或还原等反应，产生有颜色的物质。酶降解底物的量与呈现的颜色成正比.
用于标记的酶：a）辣根过氧化物酶（HorseriudishPeraxidase.TIRI\)：h）碱性磷峻酶（Alkalinephcsphatasc)。8
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附录』
【资料性附录】
斑点免疫法（Drot-imununobinding ssay,DIBANY/T 2040—-2011
硝酸纤维素膜（NC)具有很强的静电吸附力，在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。因而，将抗原吸附于硝酸纤维素膜后，就可利用膜作为固相载体进行抗原抗体反应、消加入抗体后，即可与膜上的抗原结介：然后加人将有标记物的抗抗体，使标记通过抗抗体和相应抗体的结合间接地交联于纤维素膜上。最后加入标记物相应的底物后，标记物即可与底物作用形成不溶性产物，呈现斑点状着色，从而判定结果。
所需仪器设备、试剂材料和方法步骤如下：D.1仪器与设备
D. 1. 1 台式离心机(5 000 r/ min)D.1.2具盖塑料离心管：200μl
D.1.3培养血此内容来自标准下载网
D.1.4塑料盒（规格为t00mm×50mn)D.2试剂和材料
D.2.1包被缓冲液;0. 05 mol/I.,pH=0. 6。称最 i:59g NazCO.和 2.93 g NaHCO，加水定容草1000mL,历HC1调pJI至9.5.4℃保存。D.2.2磷酸站Twcen20缓冲液:0.01mol/L,pH=7.5.称取40gNaCl.1gKCl,1gKH.P0,和15gNHPO加水定容至50001nL.,用HCl谢节pH至7.5,再册人2.5mLTwccn20.4℃保存，D. 2. 3 酸射缓冲液:0. 02 mol/T..pH 7.5。称取 40 g NaCl.1 g KCl, I g KHPO,,15 g Na HPO..加水定穿至2500m，℃保存。
D.2.41%脱脂奶粉封闭波：1脱脂奶粉加人100mL3.2.2所述磷曦盐Twe切-20缓冲液+,4℃保存。
D.2.52%小牛血清蛋白(BSA)过闭液；小半,血清蛋白（BSA)0.2g加人100ml.3.2.2所述磷履盐Tween-20缓冲液中，4%保存。
D.2.6性磷酸酯酶固体显色底物落液，NIT/BCIP,4C保存备用，使用时加人10mI.2.2.3所述磷酸盐缓冲液中，加人10H。
D.2.7—抗。小麦黄花叶病的多抗、效价为1：10000。—J8℃棵存．D.2.8二抗。Sigmlar公司Anti-Rabbit IgG-AI,效价为1：5 00018℃保。D.3样品准备
在研钵中将十或小麦叶片研碎，加100μL包被缓剂液，离心（50001/min)3min，取上清液各用，D.4封闭
预先用铅笔将硝酸纤维素膜（Nc)划成5mm×5mm的正格，瑕5.3.1恭得的上清液3mL点于NC膜上正方格内（以不超川正方格一半为耀）同时各取3μL左右病毒初提液（或确定为已磁WYMVNY/T 2040—2011
的小麦叶汁液）和蒸馏水（或健康叶片汁液及无病土凌出液）点丁膜上预先标记好的正方格内，分别作为阳性对照和阴性对照；室温晾干膜。将十燥的膜置上塑料盒或玻璃培养血，加入1%脱脂奶粉或2%小牛血清蛋白（I3SA)封闭液，将膜全漫没，37°C:轻轻摇异，封闭30Init.13. 5孵育
用锻子压任膜，倒弃封闭液，以一抗和封闭液按（1：20000~1：40000）比例秘释配制育液。将膜完全漫人孵育液，37℃轻轻挺显，孵育（1~～1.5)。用镊正住膜倒弃孵育液，加人磷酸盐Tween-20缓冲液.将膜完全没没，轻轻摇显，洗膜（3～5）min，川镊子压件膜例齐洗液，重复洗膜三次。.6三抗孵育
用子压住膜，倒齐洗液，以辣根过氧化物酶标记的二抗和对闭液按1：2590比例释配制二抗孵育液，将膜完全浸人二抗孵育腋.37℃轻轻摇另，孵育（1.52)h再用镊子斥住膜倒弃二抗孵育液加人磷陵盐Tween20缓冲液，将膜究余浸没，轻轻摇显，洗膜（3-5)min，川镊子压住膜倒弃洗液，重复洗膜一次。
D.7显色
用镊子什膜倒弃洗液，加人碱性磷酸脂悔显色底物溶液，37℃静置显色30min。以蒸馏水冲洗膜,室温晾十。
D.8结果观察
显色后首先观察刘照的颜色反成，阳性对照应显谥紫色，阳性对照应不显色，再观察样品的颜色反应，如果退蓝紫色，则认定该样品携带病靠：如果不显色，则认定该样品不携带病声。若山现阳性对照不显色或阴性对照显蓝紫色中任一种情况，则应分析原因，并重新进行试验。10
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