【国家标准】 裙带菜

ICS 65. 150
中华人民共和国国家标准
GB/T25166—2010
裙带菜
Wakame
2010-09-26发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2011-05-01实施
中华人民共和
国家标准
GB/T 25166—2010
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2010年11月第-版
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书号: 155066 - 1-40628
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本标准由中华人民共和国农业部提出前言
本标由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归口。本标雅起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所。本标准主要起草人工久、孙修涛、胡自民、汪文俊、工翔字、李修良。http：//foodmate.net/GB/T25166—2010
裙带菜
GB/T 25166—2010
本标准规定了裙带菜Ftndariapinmntifida（HIarvey）Suringar主要形态构造特征，生活周期与殖、遗传学特征以及检测方法。本标准适用于裙带菜的种质检测和鉴定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。NY/T5283--2004无公害食品裙带菜养殖技术规范3名称与分类
3.1种名
裙带莱FUndaria pinnatifida（Harv.)Suringar]。3.2分类
褐藻门（Phaeophyla）、褐了纲（Phaeosporeae）、海带H（Laminariales）、翅藻科（Alariaccac）、裙带菜属(Undarta)
4主要形态构造特征
4.1外部形态特征
4. 1. 1 孢子体形态
藻体明显分为固着器、柄和叶片三部分。裙带莱独子体外部形态见图11-
固着器：
3：-叶片；
跑-叶：
中助，
图裙带抱子体的外部形态
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GB/T 25166—2010
4.1.2固着器
出多次双分枝的圆杜形假根组成，其木端有吸盘。4.1.3柄
扁平，其腹背隆起面稍圆，柄的边缘有获窄的龙骨。藻体接近成熟时，在柄的两測形成耳状孢子叶，跑子叶定义见NY/T5283—2004中的3.3。4. 1. 4 叶片
褐色具光洋。幼时长盾形，边缘光滑尤缺刻，为单吡。成藻为羽状裂片，叶片的中部是由柄部延件而来的巾肋，中肋扇乎隆起直达叶片的顶端。藻一般长1.0m～2.5m，宽50cm～100cm。4.2孢抱子体内部构造特征
4.2. 1表皮
由一层个体小、排列紧密和整齐的细胞纽成，呈栅栏状。细胞含粒状色素体。4. 2.2皮层
外皮层细胞呈柱状，大小不等，排列不整齐。内皮层细胞大小相近，排列较整齐。4.2.3髓部
细胞呈丝状或树枝状，排列疏松。5生活周期与繁殖
5.1生活史
明显的孢了体（2n，人型）与配了体(n，微型)不等世代交替型。5.2.生命周期
裙惜菜的生命周期为一年。
5.3繁殖
5.3.1性成熟年龄
8个月～12个月。
5.3.2无性殖
孢子休柄部产生孢子叶,孢子叶上产生孢子囊群，孢子囊内形成游孢了。游孢了单细咆，梨形，长9m~1lμm，宽5±m~6μm，有两条侧生不等长鞭毛，长的14.0μm～16.5um，伸向前端，短的5.3μm~7.0μm，伸狗后端。
5.3.3有性繁殖
卵配方武。雄配了体产生精子囊，每个精子瘫产生个梨形精子，精了（n)长4μm～5um，雌配子体产生卵囊，每个卵囊产生一个卵（n），卵成熟后排出体外粘着在卵囊口处与精子结合生成合子(2n)。
6遗传学特征
6, 1染色体数
孢子体细胞染色体数2m=60。
6. 2DNA 序列特征
6.2.11Ts-1序列：总长度242bp，ccgateagaa aggggacacc ctcctgacactarcgicgig cgegicggttttgtaaaccc cgagaaagaa71
aatcgllacg cgatgttggg cgaggggcgc etcgregagg gtlaaitccc tcgaatcaaa gcgcaccccu141
ciiticauce ccattaaact ctgaatetga aricaaaagg ggggcatgcg cgcgcccgcg cgcgeggric211ccccaacrtt taecgttgta aaacttteag cg6.2.2ITS-2序列：总长度273bp。2
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GB/T25166—2010
cctetcccte cecctetctt tgiggggggg gggggggtt.1 cgggcggac tatgagigt1 ccggagcgtr:cgcgctccga gtgcacccaa tctcgtgaac gaagccl.ctt gcgccctgcc gcacugagtt gttgacggcg141 ctcgrttcgg cggcgactet cgactcarce acgtgcgcg gggaltcgcc tgcttcattc cggctcelgcctt.ticcccccccccgcccccacgcaagtgagggagggagggaaggagaggccatatcca cac211
6.2.3裙带菜不同品系核糖体ITS全序列(ITS-1+ITS-2)变化幅度为0~10个碱基。7检测方法www.bzxz.net
7.1形态构造特征检验
采用肉眼和鼠微镜观察相结合的方法。7.2染色体检验
7.2.1标本的制备
压片法。
7.2.2染色液
2%地衣红溶于70%的乙酸中。
7.2.3染色方法
固定材料在自来水中浸泡15min~30min后片。揭开盖片，滴人乙酸地衣红后盖片0.5h,用滤纸吸出多余的染色液，石蜡封片。7. 3裙带 ITS 序列的检测
7.3.1裙带菜配子体基因组DNA的提取取约1 g(泥重)的带菜配子体,加少量石英沙和FVP-40,在液氮中研成粉未。将粉未转至50ml.的离心管中，加入15mI.裂解缀冲液（1o mmol/LTris-ICl,10mmol/LEDTA，1.0 moi/I.NaCl,1.0%TAB，1%SDS，pH=8.0），在65℃保温1h，期间摇勾次。用等体积的酚：三氯甲烷：异戊醇（25：24！1，体积比）抽提两次，再将水相转移至一新的50mI离心管中，加人1/10体积RNA酶，37 ℃保温 1 h,再用二氯甲烷=异戊醇(24 ：1,体积比)抽提--次,用 2/3 体积的异丙醇沉淀回收 DNA。DNA最后溶于100μL的TE(10mmol/LTris-HCl,pH-8.0;1mmal/1.EDTA.pH=8.0)中。7.3.2ITS特异性扩增
总反应体积为 20 μI.,含 10 tnmol/L Tris-HCl,pH=8, 3,50 mmol/L KCl,1. 5 mmol/L MgCl2 Tag polymerase 1U,4种 dNTP各 2 mmol/L,两个引物各4 mmol/L~6 mmol/L(正向引物 P1:5°-CGCGAGTCATCAGCTCGCATT-3’，反向引[物 P2:5*-AGCTTCACTCGCCGTACTGG-3\)，模板DNA 10 g,其余用双蒸馏水补满。PCR反应参数:96℃预变性 5 min;96℃,30 s;72 ℃,60 s;55℃,30 s,37个循环;72℃,保温5 tmin。
7.3.3测序
参照 DNA测序仪进行测序(参见附录A)。8判定规则
被检样品完整并符合本标准第4章要求的为合格样品。如被检样品不完整需增加第5章、第6章内容进行检验，均符合述质量要求的为合格样品。GB/T 25166—2010
测序样品预处理
附录A
（资料性附录）
DNA 序列的测序
PCR扩增完毕，将样品置丁：20℃条件下。利用PCR产物纯化试剂盒进行纯化。具体操作如下：a）往PCR产物中加入4倍体积75%异内醇，室温沉淀3Umin，在3200 r/min下离心30 minb）去掉:清，加8倍体积75%异丙醇。室温静置10 mi；在 3 200 r/min 下离心 10 min,去 [清;c)
d）在50℃烘干3min以除去残留的异丙醇，或置于温箱中盖f:保鲜膜至无异丙醇；c）加人适量的无菌去离子水稀释，1 000 r/min振荡混勾。A.2测序
4.2.1纯化后的PCR产物在ABIPRISM3730测序仪上采用Sanger双脱氧链终止法原理从两端进行测序。
注：本标准以ABIPRISM3730测序仪为例，不排除采用具有同等T效的其他型号的测序仪。A.2.2设立双脱氧测序反应。要求：a】引物：测序引物即为扩增引物；b)
微量滴定板：为96孔形微量滴定板；c）链延伸-链终正反应混合液的配制。A.2.3测序凝胶的制备。
4.2.4推备样品和列表，上样到微量滴定板中进行测序。A.2.5电压 160 V/cm,温度 42 ℃。A.2.6根据避胶的荧光放射自显影,运用计算机读取DNA序列，A.3数据处理
利用相关的生物信息学软件读所测裙带菜ITS序列，并同GenBank中公开的近缘种序列进行比对,确定裙带菜ITS(包括IIS-1,5.8S和ITS-2)序列的起点和终点，利用软件MEGA计算裙带菜不同品系ITS序列的变异数。
版权专有侵权必究
号：1550661-40628
GB/T 25166-2010
打印期：2010年12片15H1017
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