【国家标准(GB)】 茶叶中茶氨酸的测定 高效液相色谱法

ICS 67. 140. 10
中华人民共和国国家标准
GB/T23193—2008
茶叶中茶氨酸的测定
高效液相色谱法
Determination of theanine in tea-High performance liquid chromatography2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-06-01实施
木标准的附录A为资料性附录。
本标准由国家食品质量安全监督检验中心提出。本标推由全国茶叶标雅化技术委员会归口。GB/T23193--2008
本标准起草单位：国家食品质量安全监督检验中心、国家茶叶质量监督检验中心。本标推主要起草人：刘小力、石维妮、周卫龙、金瑛、绘建峰、刘晓教、李想。1范围
茶叶中茶氨酸的测定
高效液相色谱法
本标准规定了用高效液相色诺法测定茶叶中茶氮酸含量的方法。本标雄适用于茶叶中萘氨氮酸的测定。本标推检出限为5.0mg/kg。
2规范性引用文件
GB/T 23193—2008
下列文件中的条款通过本标谁的引用而成为本标痒的条款。凡是注日期的引用文作，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据木标准达成协议的各方研究是否川使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文，其最新版本适用于本标准。CB/T66822008分析实验室用水规格和试验方法（ISO3696：1987,MOD)GB/T8302茶取样
GB/T83032002茶磨碎试样的制备及其于物质含量测定eqISO1572：1980）3原理
茶叶样品中茶氮酸经水加热提取，净化脱色、衍生化处理后，采用高效液相色谱仪进行测定，与标推察列比较定量。
4试剂
除非另有说明，在分析中所使用试剂均为分析纯，用水均GB/T6682一2008规定的三级水。4.1茶氨酸标窄品（L-theanine)：纯斑299%。4.2
邻苯二甲醛(OPA)。
4.3乙硫醇，
硼酸。
氢氰化。
乙醋：色谱级。
带醇：色谱级。
4.8 0. 45 μm尤机滤膜。
4.9Cas商相萃取柱。
4.10乙酸铵溶液（20mmol/L）：称取1.54g乙酸铵：用水溶解定容至1000mL。4.11硼酸钠缓冲液(0.4mol/L)：称取2.48名硼酸剂l1.41g氢氧化钠：用水溶解定容至100mL。4.12衍牛试剂:称取 0. 1 gUPA用10 mL中醇溶解,加0. 1 mL 乙硫醇,用0. 4 mol/L. 酸钠缓冲液定容至 100 mL
4.13茶氨酸标准储备获：称取 0.05名茶氮酸（精确到0.0001名),用水溶解后移人50mL容量瓶中，稀释至刻度，混勾，此溶液每毫Ⅱ含1 Ⅱ茶氨酸。有效期为一年。4.14茶氮酸标准使用被:分别准确吸取茶氨酸标准储备液(1 m名/mL)0.0、0,1.0.2,0.5,1.0、1.5、2.0mL，用水定容至10mL,得到浓度分别为0.0.0.01.0.02、0.05.0.10,0.15.0.20mg/ml的茶氨酸1
GB/T 23 1932008
标准使用液。有效期为一年。
5.1高效液相色谱仪(配有紫外检测器）。5.2柱前衍牛装置，
5.3离心析。
5.4振据恒混水溶锅。
5.5分析关平，感量0.0001g。
6测定步骤
6.1样品处理
6.1.1按照GB/T 83032002进行样品制备，接照GB/T 8302进行取释。6.1.2茶叶样品经磨碎混勾后，准称取0.5x<精碗到0.0001g)，加水100mL，在80℃振据恒温水裕锅中设提45 min,冷却后将浸提液离心、过滤，上清液混匀待用。6.1.3将Ci固相苯取柱经5mL甲醇活化，用5mL水平衡后，将试液过C1s固相萃取注进行净化，再经 0. 45 μm的微孔滤膜过滤到棕色自动进样瓶中,荐衍生用。6. 1.4衍生化(选一)
6.1. 4.1样品自动柱前衔生程序（参考）抽取样品提取羧5.0μL；
冲洗进样针端口5.0s：
抽取桁生液5.0μL：免费标准下载网bzxz
冲洗进样针端口 6.0 sg
混合30次（混合时间为2min左右）：F)进样(进样最为 10 μL)。
6.1.4.2样品于动杜前衍生
准确吸取茶氨酸标雅使用被(或样品试)0.5 mL于棕色自动进样瓶中混匀，临进样前孤入0. 5 mL, OPA 衔衍生试剂,反应 2 min 后,立即取 10 μL 进样。6.2测定
6. 2.1色谱条件
色谱柱：Ctr色谱柱，5m，4.6mm×250mm;或相当者。流动相：A;20mmal/L乙酸铵溶液；B:20iarno1/L乙酸铵溶液甲醇乙腊=12，2(体积比>:VA : Ve=l: 1.
流速：1.αmL/min。
柱温：10℃。
进样量：10L。
检测波长：338mm
6.2.2标准工作曲线
6.2.2.1按 6. 1. 星.1和 6.2.1进行色谱分析,以峰面积-浓度作图,绘制标推曲线和回归方程。标推样品色谐图参见图A.1。
6.2.2.2按6.1.4.2 租 6.2. 1进行色谱分析,以峰面积-浓度作图，绘制标推曲线和回归方程。6.2.3试样测定
取已制备好的试样按色谱条件(6.2.1)进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积，试样与标谁溶2
GB/T 23193—2008
液的衔生化处理至进样的时间应保持一致。由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的茶氮發的浓度，样品获中被物的响应值均寇在仪器测定的线性范周之内7
分析结果的计算
茶叶中茶氨酸含量按式(1)进行计算：exVx1000
m×1 000
式中：
x一样品中茶篓酸的含量，单位为克链千克(g/kg)；c-一樽品度，单位为克每毫升(mg/mL);最终定容后样品的体积，单位为毫升（mL)，
样品的质量，单位为克（名)。
讨算结果保留小数点后两位有效数宇。精密度
在重复条件下获得的两次独立测定结集的绝对差值不得超过算术平均值的10%。++++(1)
GB/T 23193—2008
GB/T\23193-2008
2.0432.177
附录A
（资料性附录）
茶氨酸标准样品液相色谱图
6.531茶级液
图A.1茶氨酸标准样品液相色谱图打印日期：2009年5月14日
版权专有复权必究
书号：155066-1-36554
定价：
80025612 /
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