【国家标准(GB)】 蜂胶中阿魏酸含量的测定方法 液相色谱-紫外检测法

ICS65.140
中华人民共和国国家标准
GB/T 231962008
蜂胶中阿魏酸含量的测定方法
液相色谱-紫外检测法
Determination of ferulic acid content in propolis--HPLC-Uy method2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-06-01实施
本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录。本标准由中华全国供销合作总社提出并归口。GB/T23196—2008
本标准起草单位：杭州澳医保灵药业有限公司、中华全国供销合作总社蜜蜂产品标准化技术委员会，中国农业料学院蜜练研究所、江苏E人境检验检疫局.南京大学，江苏老山生物科技有限公司。本标准主要起草人：虞英民、胡晓岚、朱金、徐承智、周金慧、李公海、陈坤、练鸿振。I
1范围
蜂胶中阿魏酸含量的测定方法
液相色谱-紫外检测法
本标准规定广蜂胶中阿魏酸含量的液色谱测定方法。本标准适用于蜂胶中阿魏酸含量的测定。本标准的检出限：1g/kg。
2规范性引用文件
GB/T23196—2008
下列文件中的条款通过本标推的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版巧不适用于木标准，然而，鼓断极据本标准达成协设的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T66%2分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,ISO3696:1987，MOD）3原理
蜂胶中的阿魏酸经巾醇超声提取、沉淀.离心，再用0.4Hm滤膜过滤后得澄清液，经反相色谱柱分离后，用液相色谱-紫外检测器测证.外标法定量，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯;水为GB/T 6582规定的-一级水(为蒸馅水或同等纯度水）;未指即用何种溶剂配制时，均指水液。4.1 甲醇:色谱纯。
4.20.085%磷酸溶液（体积分数）：量取0.85mL磷酸，用水定容至1000mL，经0.45m滤膜过滤。4. 3 腈:色谱纯。
4.470为甲醇（体积分数）：量取70ml.分析纯甲醇，加30ml.水混合均匀。4.5阿魏酸标推物匾：纯度99%。4.6阿魏酸标准储备溶液（200.0μg/mL)：准确取10.0mgc精确到0.1mg）阿魏酸标准物质（4.5）于50mL棕色容量瓶中，加70%甲醇(4.4)使其落解并定容至刻度，混匀，此获液可在温度低4℃冰箱中冷薇保存两个月，
4. 7 阿酸标准工作浴液:分别吸取延量的网魏酸标准储备溶液(4. 6) 1 mI.、2. 5 mL, 5. 0 mL,10. 0 mL,20. 0 mL,40. 0 mL,80. 0 mL 至 100 ml. 容量瓶中,用 70%甲醇(4. 4)定容至刻度,配成2.0μg/mL.5.0μg/mL.10.0μg/mL.20.0μg/mL.40.0μg/mL80.0μg/mL、160.0μg/mL标准工作溶液，现配现用。
5 器与设备
5.1液相色谱仪：配有紫外检测器。5.2分析天平：精确至0.1mg.
5.3过滤膜（聚偏氟乙烯微孔滤膜F型，25m）：0.45μm。5.4超声仪。
GB/T 231962008
5.5离心机。
5.6勾浆仪，
6 试样的制备与保存
6.1试样的制备
从全部蜂胶样品中出约100样品，装人洁净容器中分成两份，密封+并做标记6.2试样的保存
将试样于一10 ℃以下保存。
7测定步骤
7.1试样处理
将试样置冰柜中一10℃以下冷冻，取出冻忙存的试样20乌～30官，迅连用勾浆仪打碎，称取试样0.5（精确到0.1mg），置于50mL棕色容量瓶中加入35mL币醇（4.1），超声15in（频率为25kHz,功率为 50 W),加人10 ml水,据勾,冷却到室温后,用水定容至刻度,混勾+以 4 500 r/min 的转速离心20 min，上清液用0.45μm滤膜(5.3)过滤，滤液用于液相色谱仪紫外检测器测定。7.2色谱测定
7.2.1液相色谱条件
色谱柱: Hypersil (DS2,5 μrm,4.6 trim×200 mm流动相：以0.085%磷酸溶液(4.2)为流动相A.以甲醇(4.1)为流动相B,以乙睛(4.3)为流动b）
相 C,按表 1 进行梯度洗脱。
表1：
梯魔洗脱方法
时间/min
20 ~21
21 ~ 36
流速/（tmL/tmin）c.C85%磷酸溶液（游动相A)/%甲醇(流动相B)/3%
1. 0-1. 5
梯度洗脱方法：见表1。
进样量;20 μL.。
e）检测波长：316nm。
柱温:30 ℃。
7.2.2液相色谱测定
乙睛(液动柜心)/头
测定5个--7个系列浓度标准工作溶液(4,7)在上述色谱条件下的峰面积，以蜂面积对相应浓度绘制标准工作曲线，然后测定未知样品，用标准工作曲线对样品进行定量，使样品溶液中阿魏酸的应值在本法的线性范围内。在上述色谱条件下，阿魏酸的保留时间约为13.9min，阿魏酸标准物质色谱图和含有阿魏酸的蜂胶样品色谱图参见图 A.1、图 A.2.7.3平行试验
按上还步糜，对同一试样进行平行试验测定。7.4：空白试验
除不称取试样外,均按上述步骤,虚不干扰测定，2
8结果计算
试样中阿魏酸含量利用数据处理系统计算或按式(1)计算：X50
试样中阿魏酸的含量，单位为微克每克（g/g)：试样中阿数酸的浓度，单位为微克每旁升（g/mL)；50
试样定体积(mL)；
试样的质量，单位为克<）。
计算结果保留三位有效数字
9精密度
GB/T23196—2008
..-(1)
在对同一试样进行二次平行试验获得的二次测定结果的绝对差值不应超过算术平值的10%。本标难的研究资料参见附录B和附录C.GB/T23196-—2008
附录A免费标准下载网bzxz
(资料性附最）
标准物质色谢图和含有阿魏酸的蜂胶样品色谱围A.1阿魏酸标罹物质色谱图,见图A.1。50
9011121314151617181920
时间/m
围 A. 1标准物质色谱图
A. 2含有阿魏酸的蜂胶样品色谱图,见图 A.2 5斤
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20时间/min
样品色谱圈
1线性关系考察：见表B.1。
附录B
(资料性附录）
方法学研究资料
1含量测定线性关系试验结果（n：7）表 B. 1
浓度/(g/mL)
噬面粗
线性方程
119 334
27184G
y= 52 976+25 179
紫外扫描图：见图B.1。
-0: 100
320,00
峰慎检测
342793
R=0. 999 6
1059 571
波长/nm
图 B,1
紫外扫描图
2144 527
吸收值
GB/T 23196—2008
4388100
8 443 418
GB/T 23196—2008
CAS:1135-24-6
附录C
（牵料性附录）
阿巍酸
文名称：3-(i-hydroxy-3-methoxyphenyl)-2-propcnoicacidferulic acid
4-hydroxy-3-methoxycinnamic acid3-methoxy-4-hydroxy-cinnamic acid化学名称：3-（4-羟基-3-甲氧基苯基)2-内烯酸阿魏酸
4-羟基-3-甲氧基肉桂酸
3-甲氧基-4-羟基肉持酸
相对分子质至：191.19
分子式：CuHeO
结构式：
性状描述有顺反片构体。E型，正方楼状结晶，熔点为174℃；乙型，黄色油状液体，落丁热水，乙醇、乙酸乙，乙醚中可溶，石油醛、苯中难溶。用途：利胆酸的中问体，食品防腐剂。6
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