【国家标准(GB)】 鱼类检疫方法 第6部分：杀鲑气单胞菌

ICS 65. 020. 30
中华人民共和国国家标准
GB/T15805.6—2008
部分代替GB/T15805.1：-1995
鱼类检疫方法
第6部分：杀鲑气单胞菌
Quarantine methods of fish
Part 6:Aeromonas salmonicida2008-07-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-11-01实施
GB/T15805负类检疫方法》分为下列部分：第1部分：传染性胰脏坏死病(IPNV);第2部分：传染性造血器官坏死病毒（IHNV）；第3部分：病毒性出血性败血症病荐(VHSV)；第 4部分:斑点叉尾病囊(CCV);
一第5部分,鲍春病毒血症病毒(SVCV)第6部分：杀鲢气单胞菌；
-第?部分：脑粘体虫；
本部分为GB/T15805的第6部分。GB/T15805.6—2008
本部分代替GB/T15805.1—1995≤谈水鱼类检疫方法第--部分》中的第8章，本部分与GB/T15805.11995的第8章相比主要变化如下：删去临床检查；
用国际通用的API鉴定系统来判断茶鲜气单胞菌；代替原来简单用儿个生化鉴定结果来判定的方法；
增加附录“杀鲑气单胞菌各亚种的生化特性表”，结构格式按GB/T1.1·2000的规定，作为部分编写。本部分的附录 A为规范性附录。本部分由中华人民共和国农业部提出。本部分由全国水产标准化技术委员会归口。本部分起草单位：农业部全国水产技术摊广总站、中华人贝共和国深圳出人境检验检疫局。本部分主要超草人：孙喜模、江音林、陈爱平、陈辉、朱泽闻。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T15805.1—1995。
1范围
鱼类检疫方法
第6部分：杀鲑气单胞菌
GB/T 15805.6—2008
GB/T 15805 的本部分规定了用细糖分离和生化鉴是的病法检测疗疮病病原一杀鲑气单脑菌的
方法，
本部分适用于杀鲑气单随菌的分离改整定，疗疮病的殊衍病学调誉、诊断、监测，以及口岸出入境、国内跨区域移动的鱼类检疫。
2规范性引用文件
下列义件中的繁款通重GB/
其随后所有的修改解不危括勘误各方研究是否可优些文件的
GB/T 6682
GB/T180
试剂和材料
水:GB/T
杀鲑气单
分析实
山人#
API20NE
苹益氏染色
TSA培养基
氧化试纸
-1992,二
考菌：由
：4℃保有
说明书撞
明书指示
闻书指示
嚣材和设备
恒温培养箱。
离心机和离心管。
格和试验方
期书指示的方
显微镜（具油镜、暗视野）
大载玻片、盖被点Www.bzxZ.net
普通冰箱和低温冰箱。
剪刀了、接种环、培养皿等，
杀气单胞菌的分离
5.1取样
分的暴款。见是注日期的引用文件，，然，鼓励程据本部分达成协议的#，其最新娠本道用于本部分。
3696198）
毒）种保護携构提供。
按GB/T18088一2000规定执行。如果鱼体有红肿满病，用解剖刀切开患部《或溃疡部），将干净的载玻片贴紧病灶并挤压，加1滴～2滴生理盐水后盖上盖玻片，400倍~600倍镜检菌体形态和运动状态，并做节兰氏染色。
若鱼体表无任何症状，则需从肾中分离细菌。5.2选择性培养基分离
将样品接种到TSA培养基，25C培养7zh，TSA上会生长口色的菌蒋（注意：有的亚种会产生水1
GB/T 15805.6--2008
溶性褥色素如杀韩亚种，而其他亚种没有色素产生）。如果在TSA平板中加入100mg/L的考马斯亮兰，则生长的菌落为深蓝色。
5.3细菌鉴定
5.3.1革兰氏染色和形态观察
苹兰氏染色后，菌体呈红色表示革兰氏阴性，菌体呈紫色表示兰氏阳性。该菌应为革兰氏阴帕菌短杆状。
5.3.2运动性观察
取干净的载玻片，滴1滴～2滴生理盐水。用接种环从斜面上挑培养12h～24h的菌游涂抹在水滴中，盖上益玻片。400倍～600倍镜检菌休形态和运动状态。细菌能快速运动或产生位移的，为有运动性；细菌在原地来回颠动的（即布朗运动)，为没有运动性。该函应不运动。5,3.3氧化酶试验
用接种白金耳环挑取少量苗苔涂于氧化酶试纸上，5内观察结果。菌苔呈红色或紫色表示氧化酶试验阳性，不变色表示氧化酶试验阴排。该菌应为氨化酶阳性。5.3.4生化鉴定
如果单兰氏染色阴性，氧化酶阳性，不运动，卿进一步用API20NE试剂条测定。方法：将培养24h的纯化的细菌按要求蒂释后接种到试剂条的每个孔内，然后置于25℃培养48h72h，取出来检查反应是阳性还是阴性，担结果输入随API试剂条所附的数据库，阻性值输入“十”母，性值输入“二”号。如果是杀睡气单胞菌，还能指出是什么亚种如杀鲑亚种，或肾是无色亚种还是史氏亚种，并指出是不是“极好的鉴定结果，没有不符合项”，还是“不确定的结果”或者几率很低。后二者可能是送检的细菌不纯，无法判定所致，需要重新纯化细菌再做。如果是其他细菌，该试剂条也能明确判定是什么细菌。
金鱼亚种由于是非典型种，不能用API20NE检出。需要和附录A的生化特性对期，6综合判定
凡检山杀气单胞菌者，不论是从鱼体红肿、肇起，局部软化、组织坏死等处分离到，还是位外观正谢但可从肾中分离到即可判定为阴性：2
TTKAONTKAca
产生时噪
甲基红试验(MR)
V-P反应
柠橼酸盐
碰化氢(HsS产生)
水解尿素
苯丙氨酸聪氢酶
精氨酸双水解酶
鸟氨酸脱羧酵
运动性
明胶水
鼠化钾（KCN）生长
丙二酸利用
D-葡萄糖产酸
D-葡药糖产气
阿东醇
阿拉猎糖
阿拉循爵
纤维二糖
卫茅醇
赤藓醇
闻-肌醇
麦芽糖
D-自露醇
甘露糖
棉籽糖
L-鼠李糖
D-樂醇
海游糖
D-木糖
黏被酸
-叶灵水解
酒石殿
脂酶（玉米油）
硝酸盐还原
氧化酶
棕色可溶性色素
附录A
（规范性附录）
杀鲑气单胞菌各亚种的生化特性表杀鲑气单胞菌各亚种的生化特性表表 A, 1
无色亚种
日本鲢亚种
柔鲑亚种
史氏亚种
GB/T 15805.6-2008
金鱼丽种(非典型种)
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