【国家标准(GB)】 食品中反式脂肪酸的测定 气相色谱法

ICS67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T22110—2008
食品中反式脂肪酸的测定
气相色谱法
Determination of trans fatty acids in foods--Gaschromatographicmethod
2008-06-25发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-01-01实施
本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：杭州市质量技术监督检测院、雀巢亚洲质量保证中心。本标准主要起草人：芮昶、肖海龙、崔雪泓、李康、赵凯。GB/T22110—2008
1范围
食品中反式脂肪酸的测定
气相色谱法
本标准规定了用气相色谱法测定食品中反式脂肪酸的条件和详细分析步骤。GB/T22110—2008
本标准适用于植物油和含植物油食品中反式脂肪酸含量的测定，不适用于动物油脂和含动物油脂食品中反式脂肪酸的测定
本标准样品中反式脂肪酸最低检测限为0.05%(以脂肪计)。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T5009.6—2003食品中脂肪的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-—1992，neqISO3696：1987）3方法提要
用有机溶剂提取食品中的植物油脂。提取物（植物油脂）在碱性条件下与甲醇进行酯交换反应，生成脂肪酸甲酯。采用气相色谱法分离顺式脂肪酸甲酯和反式脂肪酸甲酯。依据内标法定量反式脂肪酸。
食用植物油试样不经有机溶剂提取，直接进行酯交换。4试剂和溶液
4.1除非另有说明，所有试剂均使用分析纯试剂；分析用水应符合GB/T6682规定的二级水规格。4.2盐酸(pzo1.19)：优级纯。
4.3无水乙醇。
4.4乙醚。
4.5石油醚（60℃90℃）。
4.6异辛烷：色谱纯。
4.7一水合硫酸氢钠。
4.8无水硫酸钠：约650℃灼烧4h，降温后贮于干燥器内。4.9氢氧化钾-甲醇溶液(2mol/L)：称取13.1g氢氧化钾，溶于约80mL甲醇中。冷却至室温，用甲醇定容至100mL，加人约5g无水硫酸钠（4.8），充分搅拌后过滤，保留滤液。4.10十三烷酸甲酯标准品：纯度不低于99%。4.11内标溶液：称取适量十三烷酸甲酯，用异辛烷（4.6)配制成浓度为1mg/mL的溶液。4.12脂肪酸甲酯标准品：已知含量的十八烷酸甲酯、反-9-十八碳烯酸甲酯、顺-9-十八碳烯酸甲酯反-9,12-十八碳二烯酸甲酯、顺-9，12-十八碳二烯酸甲酯、反-9，12，15-十八碳三烯酸甲酯、顺-9，12，15十八碳三烯酸甲酯、二十烷酸甲酯、顺-11-二十碳烯酸甲酯。注：外购的脂肪酸甲酯标准品有的是单一物质，有的是两种或多种混合物质；但其含量应是已知的。1
GB/T22110-2008
4.13脂肪酸甲酯混合标准溶液I：称取适量脂肪酸甲酯标准品（精确到0.1mg)（4.12），用异辛烷配制成每种脂肪酸甲酯含量约为0.02mg/mL~0.1mg/mL的溶液。4.14脂肪酸甲酯混合标准溶液Ⅱ：称取适量十三烷酸甲酯（4.10）、反-9-十八碳烯酸甲酯、反-9，12-十八碳二烯酸甲酯、顺-9，12,15-十八碳三烯酸中酯各10mg（精确到0.1mg）于100mL的容量瓶中，用异辛烷（4.6)定容至刻度，混合均匀。5仪器和设备
5.1分析天平：精度0.1mg。
5.2气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器。5.3色谱柱：石英交联毛细管柱；固定液-高鼠丙基取代的聚硅氧烷；柱长100m，内径0.25mm，涂膜厚度0.2μm；或性能相当的色谱柱。5.4粉碎机。
5.5组织势碎机。
6试样的制备
6.1含植物油食品的块状或颗粒状样品取有代表性的样品至少200g，用粉碎机粉碎，或用研钵研细，置于密闭的玻璃容器内。6.2含植物油食品的粉末状、糊状或液体（包括植物油脂）样品取有代表性的样品至少200g，充分混勾，置于密闭的玻璃容器内。6.3固液体样品
取有代表性的样品至少200g，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容器内。7分析步骤
7.1含植物油食品试样脂肪的定意称取含植物油的食品试样2.00g（固体）或10.00g（液体）（6.16.3），按GB/T5009.6一2003的第二法测定脂肪含量。
7.2含植物油食品试样脂肪的提取称取含植物油食品试样2.00g（固体）或10.00g（液体）（6.1~6.3)，置于100mL试管内，加8mL水。混合均匀后再加10mL盐酸（4.2）。将大试管和内容物置于60℃水浴中加热约40min～50min。每隔5min～10min用玻璃棒揽拌一次，至试样消化完全。加入10mL乙醇（4.3），混合均匀，冷却至室温。加人25mL乙醚（4.4），振摇1min，再加入25mL石油醚（4.5），振摇1min，静置分层。将有机溶液层转移到圆底烧瓶中，于60℃下将有机溶剂（乙醚和石油醚）蒸发完毕，保留脂肪。注：如果试样中脂肪含量较低，应按比例加大试样量和试剂量。7.3脂肪酸甲酯的制备
称取约60mg（精确到0.1mg)植物油或经7.2步骤提取的脂肪，置于10mL具塞试管中，依次加入0.5mL内标溶液（4.11)、4mL异辛烷（4.6）、0.2mL氢氧化钾-甲醇溶液（4.9），塞紧试管塞，剧烈振摇1min～2min，至试管内混合溶液澄清。加入1g一水合硫酸氢钠（4.7），剧烈振摇0.5min，静置，取上清液待测。
8测定
8.1色谱条件
5℃/min-165 ℃,1 min
色谱柱温度：60℃，5min-
气化室温度：240℃。
2 ℃/min-225 ℃,17 min。
检测器温度：250℃。
氢气流速：30mL/min。
空气流速：300mL/min。
载气：氧气，纯度大于99.995%，流速1.3mL/min。分流比：1：30。
8.2相对质量校正因子的确定
GB/T22110—2008
吸取1L脂肪酸甲酯混合标准溶液Ⅱ（4.14)注人气相色谱仪，在上述色谱条件下（8.1)确定十三烷酸甲酯、反-9-十八碳烯酸甲酯、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯、顺-9，12，15-十八碳三烯酸甲酯各自色谱峰的位置和色谱峰面积。色谱图见图1。响应值/V(×10000)
注：C18：29t,12t
依此类推。
反-9，顺-12-十八碳二烯酸；
图1脂肪酸甲酯混合标准溶液Ⅱ色谱图2'8
反-9-十八碳烯酸甲酯、反-9，12-十八碳二烯酸甲酯、顺-912，15-十八碳三烯酸甲酯与十三烷酸甲酯相对应的质量校正因子(f.)按式(1)计算。famjAst
式中：
（1）
脂肪酸甲酯混合标准溶液Ⅱ中反-9-十八碳烯酸甲酯、反-9，12-十八碳二烯酸甲酯或顺-9，12，15-十八碳三烯酸甲酯的质量，单位为毫克（mg）；十三烷酸甲酯的色谱峰面积；
一脂肪酸甲酯混合标准溶液Ⅱ中十三烷酸甲酯的质量，单位为毫克（mg）；A;—反-9-十八碳烯酸甲酯、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯或顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯的色谱蜂面积。
注1：相对质量校正因子至少一个月测定一次，或每次重新安装色谱柱后也应测定。注2：反式十八碳一烯酸甲酯、反式十八碳二烯酸甲酯、反式十八碳三烯酸甲酯的相对质量校正因子值分别对应于反-9-十八碳烯酸甲酯、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯、顺-9，12,15-十八碳三烯酸甲酯的校正因子值。8.3反式脂肪酸甲酯色谱峰的判断吸取1uL脂肪酸甲酯混合标准溶液I（4.13）注人气相色谱仪。在上述色谱条件下（8.1），反式十八碳一烯酸甲酯、反式十八碳二烯酸甲酯、反式十八碳三烯酸甲酯色谱峰的位置应符合图2～图4所示。
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确应值/uV(x1000)
hC18:2
注：C18:1trans——反式十八碳烯酸甲酯色谐蜂的保留时间区域；依此类推。
hc18:3
脂肪酸甲酯混合标准溶液I色谱图图2
响应值/uv(×10000)
5215628
图3混合油脂脂肪酸甲酯色谱图
C18:3trans
标准物质
确应值/uV(X10000)）
←c18:2
菜籽油脂肪酸甲酯色谱图
C18:3trans
GB/T22110-2008
标准物质
采用不同型号的色谱柱进行分离时，二十碳烷酸甲酯和二十碳一烯酸甲酯显示的色谱峰可能不在同一位置，辨别和计算反式脂肪酸时应排除这两种成分。如果二十碳烷酸甲酯、二十碳一烯酸甲酯含量较高且色谱峰与反式十八碳三烯酸甲酯色谱峰难以辨别时，可按以下色谱条件进行分离。色谱柱：石英交联毛细管柱；固定液厚度0.25μm;或性能相当的色谱柱。-70%氰丙基聚苯撑硅氧烷；柱长50m，内径0.22mm，涂膜3℃/min
升温程序：150℃
+240℃,10min。
气化室温度：240℃。
检测器温度：250℃。
氢气流速：30mL/min。
空气流速：300mL/min。
载气：氨气，纯度不低于99.99%。柱压：206.8kPa。
分流比：1：30。
反式十八碳三烯酸甲酯与二十碳烷酸甲酯、二十碳一烯酸甲酯色谱峰的位置应符合图5所示。响应值/μV(×10000)
C18:3trans
菜籽油脂肪酸甲酯色谱图www.bzxz.net
59715668
标准物质
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8.4试样中反式脂肪酸的定量
吸取1μL经7.3制备的待测试液注人气相色谱仪。在上述色谱条件（7.1)下测定试液中各组分的保留时间和色谱峰面积。
8.5结果计算
8.5.1某种反式脂肪酸占总脂肪的质量分数(X:)按式(2)计算：X：xAxxMa×100
mXA,XMei
式中：
一加人样品中的内标物质（十三烷酸甲酯）的质量，单位为毫克(mg)；加入样品中的内标物质（十三烷酸甲酯）的色谱峰面积；成分脂肪酸甲酯的色谱峰面积：称取脂肪的质量，单位为毫克(mg)；成分i脂肪酸的相对分子质量；
成分i脂肪酸甲酯的相对分子质量；一相对质量校正因子。
脂肪中反式脂肪酸的质量分数（X），按式（3)计算：8.5.2
8.5.3食品中反式脂肪酸的质量分数（X），按式（4)计算：X= X.XX
式中：
X.-按7.1测定的脂肪质量分数，%。8.5.4允许差
同一样品两次平行测定结果之差不得超过算术平均值的10%。6
-（2)
（4）
GB/T22110-2008
中华人民共和国
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食品中反式脂肪酸的测定
气相色谱法
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中国标准出版社出版发行
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开本880×12301/16印张0.75字数13千字2008年9月第一版2008年9月第一次印刷书号：155066·1-33164
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