【国家标准(GB)】 饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定 液相色谱质谱联用法

Ics 65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T 221472008
饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定
液相色谱质谱联用法
Determination of salbutamol, ractopamine and clenbuterol in feeds-Liquid chromatography-mass spectrometry2008-06-27发布
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中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会　
2008-10-01实施
本标准由中华人民共和国农业部提出。前
本标由全国料工业标推化技术委员会归［「，言
GB/T 22147—2008
本标准负贞起节单位：中国农业人学、农业部饲料效价与安全监督检验测试中心（北京）本标准在要起草人:张丽英，常碧影、贺平丽、董涛,杨文军、士宗义。日伴网
1范围
饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定，液相色谱质谱联用法GB/T 221472008
本标雅规定了同步测定饲料中β-激动剂沙丁胺醇,莱克多巴胺和盐酸克仑特岁的液相色谱质谱联用法(LC-MS)法。
本标滩适用丁配合饲料、浓绍饲料和添加剂预混合饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定，本标准中沙了胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的检测限均为0.01ug/k，定量限与为0.05 mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注万期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容或修订版均不适用不标谁，然而，鼓励根据术标雅送成诉议的各方研究否可使用这些文件的最新版本。凡是不H期的引用文件，其最新版本适用于本标雅，GB/T5682分析实验帘用水规格和试验方法（GB/T66821992ncgISO3696.1987)GB/T14599.1饲料采样
3原理
试样经麟酸甲爵漆液提敢，用固相幸取净花片，经友相柱梯健洗脱分离，采用赋谱检测器点三利物质的质最色谐峰识留时间和特征离子楚性、确证，并用外标法定量。4试剂和溶液
除持殊注明外，本标捷所用试剂均为分析纯。水符合GB/6682级用水规定4.1乙：色谱纯，
4.2醇。
4.3磷酸甲醇提取液：向3.92息浓磷酸巾加人200tl.水，再用甲醇定容到100ml.4.4冰Z酸济液(2%):1G mL冰乙酸用水稀释垒500 L。4.5硫化钠溶液(1g/L):称取0.250硫化钠(NazS·9H,0)用水奔解,并定容至250 ml、4.6SPE小柱淋洗液与洗脱澈
4.6.1淋洗液：移取D =L浓盐较于」000 ml.水巾,摇勺,4.6.2凯脱液：移取 1C mL 25为的氢水于100 Iml.穿量瓶中，用甲厚定穿，4.7流动相
A被:甲酸铵 3. 65 g溶于 50 mL去离 水中,用中酸调pH至 3. 80、I3漱：乙腈，色谱纯，
4.8沙莎」腰醇，莱克多巴胺和盐鞍克仑特罗标雅溶漱4.8.1标准备液：称取沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗（标准品含量均>98)各5℃mg分别于50mL棕色容量瓶中，用中醇济解，并定容至刻度。于冰箱中1℃保存，保存期一个月。4.8.2标准工作中间液：移取沙了胺醇、菜克多巴胺和盐峻克仑特罗标雅此备液（4.8.1)各1 mLF100 ml.容量瓶中,用冰乙酸溶液(4. 4)定容，1
GB/T 22147--2008
4.8.3标准「作波：移取沙下胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗标准工作中问液(4.8.2)各0.5,1,510 ml.于100) ml.容量瓶中,用冰z.酸溶（4.4)定容。5仪器和设备
5.1分析天平：撼量0.000g。
5.2聚内烯离心答：50mL
5. 3低温水:可保持水温至5℃和75℃。5.4涡施混合器。
5.5酸度计:准雄至 0. 001。
5.6离心机
5.7混合型离子交换 SPF小柱，
5.8固和萃取(SPE)减净化系统。5.9液相色谱/质谱联用仪。
6试样制备
按照（G13/T146」规方法采样，采取样品最至少500，以叫分法缩减至200g·粉碎过40月筛，充分混匀，装瓶，备用。
7测定
7.1试样前处理
7. 1. 1 试样提取
准确称收适量试样（配合饲料，g,浓缩饲料2 g,添加剂预混合饲料1,准确至 0.000 1g）丁50 mI.离心管,用磷酸甲醇提收澈(4.3)10 mL.振提收 30 min.然后了离心机上以 3 000 r/min 离心10 min，[.清液倒人100 ml.穿晟瓶，残渣再用上述提取被（4.3)4C mL、2C mL.重复提取2次.每次振摇5 min~lo min：离心机上以 Coo i/min离心l0 min斤:合拍上清于lco ml容景瓶中，最后用 提最液（1.3)定.泥.过滤，
7.1.2净化
7.1.2.1配合饲料和浓缩饲料：吸取一定体积试样提收波滤液（配饲料1mL，浓缩何料0.5mI.）5 mL试管中,置 55 ℃ 水浴中以氮气吹至近干。同时将酬相萃取柱(5. 7)固定于SFE 减应净化系统,8）：依次用1mL甲醇和1mL水活化、平衡，向试管中加人冰乙酸济液（44)1mL.涵旋振荡·然后全部加到小柱上，拖制过杆速度不超过的1mL/min.分别用1mL淋洗液（4.5.1）和1m1.甲醇淋洗-次.最后用1 mL凯脱羧(4.6.2)洗脱,洗脱速度不超过1 ml./min，洗脱液于55 ℃:水溶中,用氮气吹十,雅确加人 1.U0 II.冰乙酸溶液(4.1)充分溶解混,并转移到上机样品瓶中,盖好，备用。7.1.2,2添加剂预混介饲料：取提取液0.2mL，加硫化钠溶澈（1.5)0.1nL.祸旋振荡、然后加人冰乙酸(4.1)4 πL,涡璇荡，一离心机上以 3 000 1/min离心l0 min,再取 1 mL 上清液安照7. 1. 2. 1 步骤过固相举取社(5.7)净化。
7.2测定
7.2.1色谱条件
色谱科：C社内径2.1mm.柱长15on.填充物粒度μm.耗温:室温。
流动相：流动相A：用酸铵缓冲溶液(4.7)，流动柜B:7.腈（1.1)，梯度洗脱程序见表1，
时问/min
表 1梯度洗脱程序
流动相A/%
每次进样间隔用流动相 A十B=982,平衡 10 min,流速:C.20 ml/ min,
进样体积：20L。
7.2.2质谱条件
来用喷募止离广(ESI十)馍式做选择离了捡测，选择离「为：沙丁胺醇:m/240,m/z222,m/[66;来克多巴胺：m/z 302,m/z284,m/z164盐酸克仑特罗：11/z277，m/z259，11/203。源温度:120 ℃。
取样链孔电压：25V
萃收雄孔电压：5V。
脱浮剂氮气温度：300℃。
脱溶剂氮气流速：300L/h
7.2.3定性定量方法
7.2. 3. 1 定性
GB/T 22147—2008
流动相B/%
通过品总离了流色谱图1沙丁胺醇(m/z210,m/z222,m/z166).莱克多巴胺(m/z302.m/z284.m/z161)和盐酸克仑特罗(m/z277,I1/z259+m/z2C3)的保留对间和色谱峰对应的特征离子，与标排品和应的保留时间和各色语峰对应的特征离子进行对照定性，样品与标准品保留时间的和对偏差不大下（.5%，每种药物的3个特征离于基峰分数与标雅品允许差分别为：当基峰白分数50为讨,允许差一20%；当猎峰百分数20%~~50%时，允许差+25%：当峰百分数10%～20%时，允许差±30%；当基峰百分数10%时，允许差十30%7. 2. 3. 2 定量
采用M一1的谁分了离了的色谱峰丽积做单点校正定量8结果的计算与表述下载标准就来标准下载网
试样中药物含量(X)以质量分数计，数值以毫克每丁克(mg/kg)表示,按式(1)计算：X=
武中：
-待测试罪测得的特征离广色谱峰面积；Ar
一标雅溶液药物的特征离了色谱峰面积；A.
-试样质量，单位为克（g）；
稀释倍数；
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标准溶液中药物的浓,变，单位为微克每暑升（ug/ml.)。测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字。9允许差
同实验空所操作人员完成的两个平行测定的相对偏差不人于15%，GB/T22147-2008
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书号：155066：1-33910
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