【国家标准(GB)】 饲料中洛克沙胂的测定 高效液相色谱法

1CS 65.120
华人民共和国国家标准
GB/T22146—2008
饲料中洛克沙肿的测定
高效液相色谱法
Determination of roxarsone in animal fceds-High performance liquid chromatography2008-06-27发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-10-01实施
本标滩由中华人民共和国农业部提出。前言
本标准由全国简料工业标准化技术委员会归口。GB/T22146—2008
本标准负责起草单位：中国农业人学、农业部饲料效价与安全监督检验测试中心（北京）。本标雅主要起肖人：张丽英，王金荣、杨文军、土义。１范围
饲料中洛克沙肿的测定
高效液相色谱法
不标雅规楚了用高效液相色谱法测定饲料中搭克沙鹏的含量本标适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中克沙胞的测定，本标准定量限为！：t!g/kg。
2规范性引用文性
GB/T 221462008
下列文件中的条款通过本标雅的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓刷根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用永规格和试验方法（GB/T6682—1992,1cqIS0)3696：1987)（GB/T14699.1饲料采样
3原理
用磷酸氢二钾溶液作为提取液,用复合阴离子交换托萃收柱净化后，经度相（1社分离，采用紫外检测器检测，根据落克沙卵的他谱峰保留时间进行定性，以外标法进行定分析。4试剂和溶液
除特殊注吲外，本标准所用试剂均为分析纯。水为符合GB/T6632二级用水规定4. 1甲醇:色谱纯。
4.2磷酸氨二钾溶被(20 g/L):称取 20 磷酸氢二钾(K,HPO,)用水溶解，并定穿至1000 rrl.4.3硫酸铜溶液(1C0 g/L):称取10 g硫酸铜(CiiS0*!:H:0)用水溶解,并定容至100 ml.,4.4：固相萃最小淋洗液与洗脱液4. 4. 1淋洗液:6.80 g/LZ酸钠-甲醇溶液，称取 5.30 g 乙酸钠(Na:H:(·31I,0)丁烧杯中,加人800 mL水溶解,月10%乙酸调 pH至7.加人53mL 甲婷，定容牟1000mL,4℃贮存，4.4.2淋洗液2:无永甲醇。
4.4. 3洗脱液:5%中酸甲醇溶液,吸取5 tml. 甲酸,用无水甲醇定容至 100 rL。4.5流动相
4. 5.1A液:含 0.1为巾酸的 6. 98 /L磷酸氢铆溶液,称取 6. 8 g谜酸二氢钾（KH:P,)-烧杯中,用水溶解,加人 1 mil. 甲酸溶液,并定容至 1 00C ml.,4.5.2B液：无水甲醇，
4.6洛克沙肿标推溶液
4.6.1标准备液：准确称取洛克沙抑标准品（含量299%)500mg，置于1000ml.棕色容量瓶中，用磷酸氢二钾游液（4.2)超声溶解，配制成500μg/mL标准贮备液，延于4℃:冰箱。4.6.2标准T作液:吸取标准贮备液(4.6.1)0.2,0.4,C.6.0,8,1.C mL分别卒 50 ml.棕色容量概中,并用磷酸二铆漆液（4.2)稀释至刻度，播匀。其浓度分别为2.C、4.0、6.C,8.0.10.Cg/mL的标准1.作液，
GB/T 22146—2008
5仪器、设备
5.1分析天平：燃量为0.0001名
5.2离心机:转迷能达3 c09 1/min-~4 000 r/min5.3固相萃取(SPE)装置。
5.4恒温水浴和氮吹仪。
5.5涡旋混合器，
5.6复合阴离了酉相萃取小柱。
5.7高效液相仪（配有紫外检测器）5.8超声波仪。
6试样制备
按照GB/114699.1规定法采样，采取样品量率少500 乌：以叫分法缩减至 200 g，粉碎过孔径0.15 mm月筛,充分混到装瓶备用，7分析步骤
7.1试样溶液的准备
7.1.1提取
雅谕称瑕延量试样（配合饰料5，浓缩饲料2g.淤加剂预混合饲料1，确至0.C00 1g）片50 ml离心管.加磷酸氢一钾溶液（4.2)40 rmL，盖好管盖，充分振操后，在60 超声水浴[提取30min然后上离心机以1000t/rir:离心10min。E消液倒人100mL棕色窄量瓶中,残渣再分别用上述提取剂30tr:l.20ml.重复提取2次，每次15min，肉心Fi合并上消液7:100ml.棕色容最瓶中，然后加酰酸铜济液(4.3)2 mL.并用磷酸氢二钾溶液(1.2)烯释至刻度-播匀,过滤，滤液待用，浓缩饲料和潮加剂预混合制料的滤液需分别做2倍和5倍稀释。7.1.2净化
将击相收标(5.)固7-SPE系统(5,)上,依次用1心L用醇和1,mL水活化,平衡SPF小(5.6)，吸取7.1.1得到的样品提取滤液1mL加到SFE小柱1:,控制过柱流速不超过1.0mL/rin,然后依次用乙酸钠-中醇溶液(4. 4. 「)利无水甲醇溶液(1.1. 2)各淋洗-次，最后用 1. 0 :iL 洗脱液(4. 1.3)洗脱,洗脱速度不超过1. 0 ml./mill。洗脱液于65 ℃水浴中以氮气吹T,准研加人1.0 ml.磷酸氨二钾溶液（1.2)充分济解混勾，并转移到样品瓶中.盖好.待用，7.2色谱条件
7.2.1色谱柱：H有C1g填料的杜子（粒径为3μm）.内径3.9mm，杜长150mm7.2.2流动相：A液（4.5.t)+B液（4.5.2）=95+5（体积比），以1.0mL/min流速洗脱。7.2.3进样休积：20L，
7.2.4检测器：紫外检测器（或二极管矩阵检测器）.检测波长256 am7. 3定盘方法
按高效液相色谱仪说明书调仪器操作参数。而色谱柱中注人落克沙肿标准T.作液（4.6.2)及试样溶（7.1.2).得到色谱峰而积响应值,用外标法定量。8结果计算与表递
8.1试样中洛克沙含量(u)以质量分数计,数值以毫克于克(img/kg)表示，按照式(1)计算。2
式中：
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+++*-( 1)
根据标准曲线计算的:机试样溶液中洛克沙肿含量，单位为微克每毫升（μg/mL)；m
试群质堂，单位为克（g)：
稀释倍数，
测定结果用平行测定的筛术平均值表示，保留3位有效数字。9
重复性
同一实验室同一操作人员使用同一台仪器完或的两个半行测定的相对偏差不大了10为GB/T 22146-2008
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饲料中洛克沙肿的测定
高效液相色谱法
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2008 年 9 月第一版
2008年9月第一次仰期
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