【国家标准(GB)】 预混料中氯化胆碱的测定

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T 174812008
代替GB/T17481—1998
预混料中氯化胆碱的测定
Determination of choline choride in premix2008-04-09发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-07-01实施
GB/T 17481—2008
本标准是GB/T17481一1998《预混料中氟化胆碱的测定分光光度法》的修订版。本标推代替GB/T 17481—1998。本标推与 GB/T17481—1998相比主要差异如下一补充了离子色谱法为第一测定法（仲裁法）、原标准的雷氏盐分光光度法作为第二测定法；一离子色谱法主要参考Metrohm文献制定，方法的范围、称样量、试样提取条件进行了改进；，-蓄氏盐分光光度法增加了“方法的检山限”。本标准的附录A为资料性附录：
本标准由全国伺料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：中国饲料工业协会、国家饲料质量监督检验中心（武汉），上海市饲料行业协会。本标主要起草人：刘小敏、辛盛腾、粟胜兰、风懋熙、杨先奎。本标准所代替标推的历次版本发布情况为：-GB/T17481—1998
1范国
预混料中氧化胆碱的测定
GB/T 17481—2008
本标推规定了预滤料中藏化胆熊的离子色谱检验方法和需氏盐分光光度检验方法。本标准适用于预混料中鼠化胆碱的测定，离子色谱检验方法为仲裁法。离子色谱法定量限为0.05g/kg：雷氏盐分光光度法定量限为2.5g/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标推的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容或修订版均不适用本标难，然面，鼓励根报据本标雅送成协设的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的用文件，其最新版本适用于本探雅。GB/T6682分析实验室用永规格和试验方法（GB/T6682—1992,丑eqISO3696：1987)GB/T14699.1饲料采样(GB/T 14699.1 -2005.ISO 6497:2002,IDT)GB/T20195动物伺料试样的制备(GB/T20195—2006,ISO6498:1998,IDT)3方法1：高子色谱检验方法（仲裁法）3.1原理
用纯水提取样品中氯化胆碱，采用阴离子交换色谱-电导检测器检测，外标法定量。3. 2试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。3.2.1水.GB/T 6682,—级。
3.2.2丙酮：色谱纯。
3.2. 3 啶二羧酸(C,H,NO,)。
3.2.4流动相:0.6000g柠檬酸十0.1250嘧啶二羧酸加水300mL,加热溶解，冷却后加人150mL丙酮定容至 1 000 mL 容基瓶中。3.2.5氯化胆碱标准溶液
3.2.5.1氯化胆标准贮各溶液
精确称取氟化胆碱标准品（含量≥99.5%)0.1005g，置于100mL容量瓶中，用水溶解，稀释至刻度,摇勾,其浓度为 1 000 μg/mL保存在4亡冰箱中,有效期为一个月。3.2.5.2氯化胆碱标准工作溶液
分别准确移取一定量氯化胆碱贮备液(3.2.5.1),用水稀释成浓度为 25.0 μg/mL的标准工作液，以上溶液应当日配制和使用。
3.3仪器与设备
3.3.1恒温水裕锅。
3.3.2振器，往复式。
3.3.3色谱仪：具弱酸型阳离子交换柱配电导检测器。3.3.4实验室带用玻璃器血。
3.4试样的制备
按GB/T14699.1采样，接GB/T 20195制备试样，磨碎，通过0.42 mm孔筛，滤勺，装人密闭容器中，避光低温保存备用。
GB/T17481-2008
3.5分析步骤
3.5.1试液制备
3.5.1.1准确称取2g试样（含氯化胆碱0.01g~0.2g），精确至0.0001g，于100mL容量瓶中，加约60mL水，摇匀，在70℃水浴锅中加热20min，在往复振荡器上振荡10min，冷却至室温，用水稀释至刻度，摇匀，干过滤，滤液备用。3.5.1.2吸取5.0mL滤液（3.5.1.1）置于100mL容量瓶中，摇匀，用水稀释至刻度。过0.45μm滤膜，上机测定。
3.5.2测定
3.5.2.1色谱分析条件
1典型离子色谱图见附录
推荐的色谱操作条件见表
推荐的色谱操作条件
150mm×内径4mm，粒径4mm，阳离天交换柱Va+形式）色谱柱
流动相
流动相流速/(mL/min）
注：方法中所列色措存和流动相仅提供可参考的选择，同等性能色谱柱和流动相均可使用。3.5.2.2测定
向离子色谱分连续注入氧化胆喊标准工作溶液，直至样到基线平稳,峰形对称且峰面积能够重日
现的色谱蜂。
氯化胆碱标准与相邻的离
品子分离度大于1.5。免费标准bzxz.net
发，积分得到峰而积，用标准系列溶液进行单点或多点校准。依次注人标准液、试样溶液，
3. 6 结果计算
3.6.1试样中氯化U或×以质量分数计：数值以克每干克表示.按式（1)计算：
式中：
试样中氯化汇碱
位为克每千
的含量单
试样峰面积值
12中的带释倍数）
稀释倍数（3.5.）
标准工作液(3.2. 3氯化胆碱浓度，单位为微克每差升(ugmL);试样体积，单位为毫升mL)；
标准工作液峰面积值；
称取试样的质量，单位为克（g)。平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。3.6.2
...(1)
3.7重复性
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的测定值的绝对差值不得超过算术平均值的10%4方法2：需氏盐分光光度检验方法4.1原理
用甲醇-三氯甲烷混合溶剂提取试样中的氯化肌减，将溶剂蒸干后用水溶解残渣，再在低温下加人雷氏盐生成氯化胆碱雷氏盐的结晶，过滤出结品，用丙酮溶解，定容。将其丙酮溶液在波长525nm下进行分光光度测定。
4.2试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。4.2.1水：GB/T6682,二级，
4.2.2甲醇。
4.2.3丙酮。
GB/T 174812008
4.2.4甲醇-三氯甲烷混合液（10十1）：量取900mL甲醇和90mL三氯甲烷，混匀。4.2.5雷氏盐（二氨基四硫代氰酸铬铵）[NH,Cr(NH）（SCN),甲醇溶液（40g/L）：称取4g雷氏盐溶于甲醇，加甲醇稀释至100mL，混匀置冰箱内保存。4.3仪器与设备
实验室常用玻璃器
振荡器：往复式
恒温水浴锅
离心机。
4.3.5分光光度计
4.3.6具塞锥形
4.3.7高形烧机
70cm比色Ⅲ：可在525
nm下测定吸光
4.3.8抽滤瓶
00，孔径4时
4.4试样的制
见3.4。
4.5分析步骤
4.5.1试液提取
精确称取记样约
5g（含氯化胆诚约
液(4.2.4)100.0
04名一0.4g）于具塞锥形瓶中，精确移人甲醇-三氯甲混合加塞，在振装器上拆荡
民盐的生成和溶出
4.5.2氯化胆碱
精确吸取上述提取度5.00
用慢速滤纸过滤，得试样提取液。100mL高形烧杯中，在50℃水浴上蒸发至干，加水40mL使残渣溶解，再由小浴中
到氯化肌碱需氏盐的结配
即到5℃以
mL雷氏盐溶液（4.2.5），月断搅拌反应30min，行将生成的结品转人
甘纳式滤器中真空抽滤，烧杯用水洗净，洗液一并抽滤。滤毕，结晶用5mL水洗3次，再用5mL甲醇F，向过滤器中加人丙酮，使结晶溶解，集人50 mL容量瓶中，用丙酶洗净过滤器，洗液一并转人50mL容量瓶中加内酮至刻度，混匀，得试样溶液。4.5.3测定
4.5.3.1试样的测定
吸取5.0mL所得试样液（4.5.2）于10mL离心管中，离心5min，转速为3000r/min，取上层清液，以丙酮作参比，用1.0cm比色Ⅲ在525nm波长下，用分光光度计测定吸光度，在工作曲线上查得试样中氯化胆碱的含量。
4.5.3.2工作曲线的绘制
精确吸取氧化胆碱标准贮备液（3.2.5.1)5.00，10.00，15.00,20.00mL分别置于100mL高形烧杯中，加水40mL，以下按4.5.2中“再在冰浴中冷却到5℃以下”以后的操作及4.5.3.1进行，测各标准工作液的吸光度，绘制工作曲线。4.6结果计算
4.6.1试样中氯化胆碱X以质量分数计，数值以克每千克表示，按式（2)计算：3
GB/T17481—2008
式中：
-试样中氯化碱的含量，单位为克每下克(区/kg）-标准曲线上查得测定样液中氟化胆碱的质量，单位为毫克(mg)；一试样总体积,单位为毫升(mL);-称取试样的质量，单位为克(g)，试样测定时吸取试样提取液的体积，单位为毫升（mL）。4.6.2平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。重复性
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的测定值的绝对差值不得超过算术平均值的15%。us/cm
附录A
（资料性附录）
预混料中氯化胆碱离子色谱图
化胆带
6678910111215141516mm
密A1预混料中氯化胆碱色谱图
GB/T17481—2008
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