【国家标准(GB)】 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定

ICS 07. 100. 30
中华人民共和国国家标准
GB/T 4789.2--2008
代替GB/T 4789.2-2003
食品卫生微生物学检验
菌落总数测定
Microbiological examination of food hygiene-Aerobic plate count
2008-11-21发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2009-03-01实施
CB/T 4789.2—2008
本标准的第法修改采用关国食品药品管现局（FDA）《细菌学分析丁册》第3章菌落总数（2001年）（BacteriulogicalAnalyticalManual,Chapter3：Aerobicplatccounl，20u1），第二法修改采用国际分析家学会（AOACINTERNAT1ONAL)AOAC990.12&食品中菌落总数Petrifilm测试片法》(1994 年)(AOAC (Offical Methud 990, 12,Acrobic plate: count in foods dry rehydratable film Petrililmacrobic count plate method,1994)。本标准的第一法与FDA/BAM方法的区别如下：—平板菌落计数的适宜范国由25CFU～250CFU改为30CFU~～300CFU；-培养温度35℃土1℃改为36℃士1℃，10倍稀释，由10mL样品匀液加人到90mL稀释液，改为1mL样品匀液加人到9mL稀液；
未采用螺旋平板计数法。
本标准的第二法与AOAC990.12的区别为：培养温度由35℃士1.改为35℃1℃。本标准代替GB/T4789.2·2003《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》。本标雅与GB/T4789.22003相比主要修改如下：培养基由营养琼脂改为平板计数琼脂：一对菌落总数的计算公式进行了修改；增加了第二法“菌落总数PetriFiltnT测试片法\。本标准的附录A为规范性附录。
本标准由中华人民共和国卫生部提山并归口。本标准由中华人民共和国卫生部负责解释。本标准负资起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安余所本标准参与起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国内蒙古山入境检验检疫局、江苏省疾病预防控制中心、上海市疾病预防控制中心。本标准主要起草人：刘秀梅、卢行安、刘中学、裁宝君、刘弘、陈敏、日静。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB4785.2—1984,GB/T4789.2—1991,GI3/T 4789.2—2003。.
1范围
食品卫生微生物学检验
菌落总数测定
本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。本标准适用于各类食品中菌落总数的测定。2术语与定义
下列术语和定义适用于本标准。2.1
aerobic plale count
菌落总数
GB/T4789.2—2008
食品检样经过处理，在-定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和谢间、pH、需氧性质等），所得」mL（或1g）检样中形成菌落的总数。本标推规定的培养条件下所得结果，只包括-群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。3设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱:36℃±1℃,30 ℃±1℃.3.2冰箱：2℃~5℃。
3.3恒温水浴箱:46 ℃士1 ℃。
3.4大平：感量0.1g。
3.5均质器。
3.6振荡器。
3.7无菌吸管：1mL(具0.01mL刻度）、10mL具0.1ml.刻度）或微量移液器及吸头。3.8元菌锥形瓶：容量250ml.500mL.3.9无菌培养皿：直径90mm.
3.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11放大镜或（和)菌落计数器或PetririlmTM1)自动灼读仪。4培养基和试剂
4. 1平板计数琼脂培养基:见第 A.1章。4.2磷酸盐缓冲液：见第A,2章。4.3无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121高压灭菌15min。4.41mol/L氢氧化钠（NaOH):称取40g氨氧化钠溶于I000mL蒸缩水中。4.51 mol/L盐酸(HCl):移瑕浓盐酸 90 mL,用蒸馅水稀释至1 000 mL。4.6Petrifilm\M菌落总数测试片和压板。1）PetrifilmT是由3M公司提供的产品的商品名。给出这信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品其有相同的效果，删可使用这些等效的产品。1
品伙伴网h
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5检验程序
菌落总数的检验程序见图1。
第法平板菌落计数法
251（或25ml.）样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释
选择2个3个适宜样品均液，
各取1㎡l.分别期入无菌培养血内每皿中加入15mL～~20mL
平板计数琼脂培养基，混匀
36℃±1℃
48h±2h
计算各平板菌落数
计算菌落总数
6操作步骤
6.1样品的稀释
菌落总数的检验程序
6.1.1周体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生现盐水的无菌均质杯内，8 000 r/min～10 000 r/min 均质1 min～2 min,或放人盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1 min～2 min.制成1：l0的样品匀液。6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25ruL样品置盛有225InL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌链形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1：10的样品勾液。6.1.3用l ml.无菌吸管或微量移液器吸取 1：10样品勾液1 ml,沿管缓慢注丁盛有 9 ml.稀释液的尤菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均勾,制成1：100 的样品液。6.1.4按6.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品勾液。每递增稀释一次，换用一次1mL尤菌吸管2
ht
或吸头。
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6.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个~3个适它稀释度的样品勾液（液体样品可包括原液），在进行10倍逆增稀释时，每个蒂释度分别吸取1tnL样品句液加人两个无菌平血内。同时分别取1L稀释液加人两个无菌平血作空白对照。6.1.6及时将15mL～20L冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平血，并转动平血使其混合均勾。6.2培养
6.2.1琼脂凝固后，将平板翻转，36℃11℃培养48h十2h。水产品30℃士1℃培养72h士3h。6.2.2如果样品中河能含有在琼脂培养盐表而弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖-薄层琼脂培养基（约4mI.），凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养6.3菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记求稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colany-Jormingunits,CFU)表示。6.3.1选取菌游数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低丁30CFL的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计。每个稀释度的菌游数应采用两个平板的平均数。
6.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中荫落分布又很均匀，即可让算半个平板后乘以2.代表·个乎板菌落数。
6.3.3当平板上山现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为··个菌落计数。7结果的表述
7.1菌落总数的计算方法
7.1.1若只有-个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克(或毫升)中菌落总数结果。7.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适计数范圃内时，按式(1)计算：N EC/(n +0. In)d
式中：
N—样品中菌落数；
习C平板含适宣范围菌落数的平板)菌落数之和；1-…第个适宜稀释度平板上的菌落数；na
第一个适宜稀释度平板上的菌落数；d
-稀释因子(第一稀释度)。
示例：
稀释度
菌落数
1：100（第—稀释度）
232,244
N= SIC/(ni +0. 1n:)d
232+244+33+35
[2 + (0. 1×2)]×10-2
上逆数据经“四舍五入\后，表示为25 000或2.5×101。全品伙伴网ht
= 24 727
......( 1)
1：1000（第一稀释度）
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7.1.3若所有释度的平板F菌落数均太300，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不刊计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。7.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30，则应按释释度最低的平均菌落数乘以悉释倍数计算。7.1.5若所有稀释度(包括液体样品原液）板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。7.1.6若所有稀释度的半板菌落数均不在30～300之间，其中一部分小于30或大于300时，则以最接近30或300的-均菌游数乘以稀释倍数计算。7.2菌落总数的报告
7.2.1菌落数在100以内时，按“四舍五人”原则修约，采用两位有效数字报告。7.2.2大于或等下100时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，聆前两位数宁，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五人”原则修约后，采用两位有效数字。7.2.3荐所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落延。7.2.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。7.2.5称重取样以CFU/为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。第二法菌落总数PetrifilmIM测试片法8检验程序
除将平板计数琼脂培养基改成PetrifilmTM菌落总数测试片外，其他与第5章相同。9操作步骤
9.1样品的稀
按照6.1.1~6.L.2制备1：10的样品匀液店，用1mol/L氧氧化钠（NaOH)或1mol/L盐酸(HIC1)调节 pH 至 6. 6~7. 2.
9.2接种
根据对样本污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品勾液进行检验。将测试片置丁平坦实验台表面，揭开:层膜，用吸管或微量移液器吸取1mI.样品勾液，垂直滴加在测试片的中央，将上层膜盖下，允许上层膜直接落下，供不要滚动层膜，将压板（凹面底朝下)放置在上层膜中央，轻轻地压卜,使样蔽均勾覆盖于圆形的培养膜F:，切勿扭转压板。拿起压板，静置至少lmin 以使培养基凝周每个稀释度接种两张测试片
9.3培养
将测试片的透明面朝，水平置于培养箱内。可堆叠至20片，培养温度和时间同6.2。9.4计数
9.4.1培养结束后立即计数，可肉眼观察计数，或用菌落计数器、放大镜、PctrifilmT\自动判读仪计数。选取菌落数在30～300之间的测试片1计-数。9.4.2计数所有红色菌落。细菌浓度很高时，整个测试片会变成红色粉红色，将结果记录为“多不可计”。
9.4.3有时，当细菌浓很高时，測试片中央没有可见菌，但圆形培养膜的边缘有许多小的菌落，其辅果也记录为多不可计，进一步稀释样品可获得雅确的读数。9.4.4某些微生物会羧化凝胶，造成局部扩散或菌游模糊的现象。如果液化现象干扰计数，可以计数未化的面积来估算菌落数。
10结果的表述bzxz.net
冏第7章，
附录A
(规范性附录)
培养基和试剂
A,1平板计数琼脂(platecount agar,PCA)培养基4.1.1成分
胰蛋白陈
酵母浸膏
葡萄糖
燕馏水
PH 7. 0±0. 2
A.1.2制法
1000mL
GB/T4789.2—2008
将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，谢节pII。分装试管或锥形瓶，121C高压灭菌15min。A.2磷酸盐缓冲液
A.2.1成分
磷酸二氢钾(KH,PO)
蒸馏水
A.2.2制法
贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶丁50GtnL蒸馅水中，用人约175mL的1mo1/L氢氧化钠溶液谢节pH至7.2，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存丁冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用馏水稀释至1000mL，分装丁适宜容器中，121℃高压灭菌15min
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菌落总数测定
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2009年3月第一版 2009年3月第·-次印刷*
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