【医药行业标准(YY)】 血液和体液防护装备 防护服材料抗血液传播病原体穿透性能测试Phi-X174噬菌体试验方法

10S 11. 100
中华人民共和国医药行业标准
YY/T 0689--2008/1S0 16604:2004加液和体液防护装备
防护服材料
抗咖液传播病原体穿透性能测试Pli-X174魔菌体试验方法
Clothing for proicction againmst contact with blood and body fiuidsDetermination of resistance ol protective clothing materials to penetration byhloosd-horne pathogens--Test method using Phi-X174 bacteriophage(1S0 16604:2004.IDT)
2008-10-17发布
国家食品药品监督管理周
2010-01-01实施
本标捷等尚采用IS0166042001
为便于使用。本标症假了下列继辑性修敢：“本国际标准”一司为\本标准”，用小数点代替推为小数点的遵“，”；丽去国际标准的言
本标准的附录A为资料性附录。
本标灌山函家食品药品监督管理扁提出。YY/T 0689—2008/150 16604:2004本标准出全国医用临检验实验室及体外诊断系统标摊化技术类员会（SAC/TC136)门L！本标滩的趋章单位：北京市医疗器械检验所。本标准丰要越草人：潘四春、下军，李动松，七静、岳卫华。........
YY/T 0689—2008/1SO 16604:2004引
工作人员，儿片是在车保健行业中对伤名战病人避行洽疗及护理哟工作人员易接触到间以传揭病的牛物液体。这些出齐种微生物引越的族病会牛命剂健康造战严重危害。九其是可引起肝炎L乙型肝炎病滞（FIBV)和闪整肝炎病毒（HCV)_和得性免疫缺陷综合症（AIDS)I人类免疫缺陷性病每（HIV门的血源性获病。由十程学控制不能消除所有接触目能·因此人们将注意力放存使用防护服来减少与皮肽接融。
本标准关范护服和设计用末抵抗证液和体液穿透的防护装备，声于卫生保健机构、活动及接触红滋或体液可能情说的客样性，对防护服的屏障要求闻因应用情况鹿改变。
不标雅播述广防扩服材料抗代表性病毒穿透能力的流体静力学用力测试为法，对或验方法的合理选择取决了防护服及其树料的待殊应用情况利预期用途。应对诚验方法的确楚进行风险评估本试验方法不适用上所有形式或条件下的血液传播病源体接触。试验人员应对作人员/衣服接触方试进行评价，并对该试验为法针对其特定用途的合现生进行评价。本试验方法已通进对肝炎病毒（乙肝和内肝）人类免疫缺陷病再等在煎液利其他其有潜在传染性的体液中传播的病毒楚文穿透模型间定义。用于该试验方法中的代表性微生物—-噬随体Phi-X174在人小和形状上与丙型师炎病毒（IICV）相似，所且过间代表乙型所炎病练（H13V）和人类免疫缺陷性病声（HIV），其他病原休对防护的影响应途例评价。
本试验方法只对树料或防护所使用的某些材料缔构（如接缝）的性能进行评价。本试验方法不对设计，总体结树和部件或服整接面或可以影响防护暇整体防护性能的其他因进行评价。值得照谢的是，本试验不必模拟实际使用时随护服材料接触液休的情况。因此，试验数据应限于对病毒穿透的抵抗能力而对材料进行-般比对性评价物理、化学和热力学因素可能降低材料的防护灶能：在这些医索产生影响之前行试验，可能会导致对材科防护性能的错觉。应该考意灭菌、健存条利效期对-次性产品，以改清洗和灭菌对可重复使用的产品抗穿透能力的影响的评价试验。防护屏障的究整性逆可风使用过程中变拆摩擦或出污染物始酒精和汗浸湿等因素的影响而受损。如采将这些情况考虑准内，防护服材料抗噬菌体Phi-X17!穿透的证能可用能够代表期望使用条件的合适的预处现技术进行评价。医用防护服材料预期用作对而液，体凌和其他潜在传染性物质的屏障。多种因素，阅如液体的表面张力、粘度和极能，以及缩构和亲水性或疏水性，可以影响体液的腿润和穿性能。血液和体液（懂液除外）的表霜张力范圈药为0.04%N/m~0.060N/。为有助了模拟液和体液的湿润性，将Phi-X171觉菌体悬浮液的表面张力调整到接近这-范的下限。得到的Phi-X174噬菌体悬浮液的表而张力为(0.042±0.002)N/
本适用方法中涉及将防护服材料样品与噬菌体Phi-X174感浮液接触的时需将测试槽压加到11.0kPzl（见试验北骤A和B），这-流体静力学压力的试验结果已经过验证与从人休因了获得的病囊穿透结果有关。然雨，些研究表期嘴床使用中可生超过345kPa的机械压力。国此，重聚的是解本试验方法不是模拟所有物理长力和幽加防护服上的实际压方。试验步骤利D使用逐步加压方法将压力升至20.k。这共试验步骤模拟可能的力以对材进行分级.
！范围
YY/T 0689—2008/1S0 16604:2004雨液利体液防护装备防护搬材料抗妞液传播病源体穿透性能测试h74菌体试验方滋
本标准规定了测定防护服材料抗血液传播病原体穿透能力的实验案试验方法。本试验方法使用！一种含替代微生物的悬浮液：护服测试合格/不合格“是运用YY0599概定的成验仪器在-特范的流体静力学压力下测庭病穿透能力。本试验方法对较原，有衬垦易吸收试验液体的防护服材料明能无效。本试验方法中集些试验步骤灵被度较高。由于本方法对完成谢间有要求，因此本方法不造宫作为防护服或防护材料质量控或保证整序。2 规范性引用文件
下剪文件印的条款通过本标准的引用而成为求标准的条款。凡是注口期的求用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）战修订版均个适用于本标准，然而，鼓励根据本标难达战协议的各方翻究是否可使用这些文件的最新版本，比是不注日期的引用文件，其最新版本适开于本标准。GB/T382纺织品和纺织制品厚度的测定（CB/T38201997，c9V18O50841995）GB/T 4669
机织物机织物单位长度质量利单拉面积质量测定（GB/T46f9-—2008，IS0 3801,1977.M03)
GB/T5549表而活性用试剂拉起液膜法测定表询张力（CB/T55491990，ncqISO304.1985）分析实验室用水规格租试验方法（15(）36961987M0D)13/1 6682
YY/T Q699
液态化学品防护装备防护服材料杭斯液体穿透性能测就方然(YY/T 0699 -2008,ISO 13994:1958,IDT)YY/T07002008血液租体液荫护装备防护服材料抗血液租体液穿透差能测试合成而试验法(ISO16603:2004.IT)
3术语和定义
1列术语和定义适用于本标准.
用于支持细菌和其他微生生长的培养基的凝固剂。3.2
试验assay
对混合物进行分初以测定某特定组分的有在或含景。注：本试验方法守,被分价的组分指磁菌年PF-X174,3.3
试验滩asay fid
用于冲洗测试材料表的以决定微牛物穿透能力的无菌滋体。注：本试龄方法中，试验液即指营养肉荡，微生物病幸即格谢菌体PhiX174。用试验液把瞻菌体Pa-X17从测试学品的内装面莎洗下来。
YY/TG689-2008/15016604:2004
噬菌体hacieriopaage
能感染细菌的种病毒：
注：本试验才法中，噬菌体照指P-x174、PhiX17对人类不是数病病每，但可用产模拟对人炎有致病性的病毒，3.5
血波传播病原体
loot-borne pafhogen
而液或其他体液携带的具有传染生的分或排泄的细菌，病靠或其做致病微生物。注：本试验方法，血滋传婚病原体主要包括开炭病毒（乙肝利内汗）人类免按缺陷病毒（HV）。其他微作物应逐例考裳
体液bodyfluid
出身体产生（分秘或排泄的何）适：作本标准中，体波包括被血裤接遥病原体游在感染的液作，包括他不仅眼下血液、精液、阴道分泌物、脑弹液、消液、腹水，羊水，锤液以滚实随任何被症液明晶河架的体波和所有很难其还州能离分的体液。3.7
body fluist simul!
体液模拟物
模拟人体液的
注：本试验方法中体旗拟物即为(0.042=0.0s2)N/毫
Thatenge suspensiot
含有能用于赋菌树料抗穿透能暴的生
注：本战验方法款部数感评液指唑验最液，即含有噬！
菌苔[an
培养血中源蹈尾生长致勤
让：本试收方法规释教希民大两福a
溶麟lysis
整个细菌细股裂解技
豪合体
链，本试验方祛中，病生细孵心网Phi-X174侵人而引起落解。3. 11
培养基diun/meai
培养细咆剪组织的营养系药
酸利体液（囊该除外)衰而张力的下限ws4xn
的营养肉汤薯
注：本试验方法中，培养基是指文持静完微物生长的复合物，创如噻菌您普养决汤利上层琼脂。3.12
形态morphoiogy
-特定有机体的形状结构
营养肉汤nutrient hroth
液体培养技：
注：不试验方法中，营养肉汤是指用于培养宿上案F.cotiC并助于衣程序的各个研段.Phi-X171增殖的噬菌体营养肉汤，阅妇穿透格中器净PH-X174挑战测试材料，测试材料内衰面，或按要来将试验液稀释制成平板。3.14
穿透penetration
在防护服材料上液体以非分了水平方式穿过包裹物，多孔材料，接经处，孔随惑其他缺陷处的现象。2
噬菌斑ae
YY/T 0689—2008/IS0 16604:2004（病龚学)理论上出单个活病声感染、溶解病主细跑洲形战的湾晰川见这域注：本试验方法中，噬菌强即据琼脂层上E，c&C的资路中的满新可用区域，埋论于是单个存证的hiX174感染和济细菌的结果。
空短形成单位plajue-orninguniPFU
通过感染和溶解琼脂上层的纽菌而产生嘴荫斑的病粒于。3. 17
平板plate
（微生物学)装有培养基的培养，3.38
protectiveclathing
防护服
特殊设计及结构的服装，预期用途是将全或部分人体与游在的危害隔离；或通过着装将外部环境污染隔离
替代微生物sargsle Eicrthe
用于模拟对人类有致病性的其他微生物的微少物。注：本试验方法小，代是微物即活磁菌作Phi-X171.用于模拟HV.HRV和HIV3.20
滴度tite
与另纤定量的底物作用或对应的底物量。征：本试验方法中，滴度用了端逐存活的谨款达的液度,用 F1/ml.表示。3.21
蜗毒vire
无猫立的代谢系统，只能在活的宿主细胞内复制的只有感染性的磺小生物：3.22
yirul penetratin
病毒穿透
病毒对某射料的穿透，
控：本试验方法中,病部穿透是指噬菌体Phi X174透过包衰物接验处、引隙针服就其他缺陷处的物理易位，3.23
抗病毒穿透viral resislarn:
在特定的实验室测战条伴和检测方法下材料阻止病毒穿透的能力。注：木试验方法中，概试盐某“合格”的陈护服过科被认为员有抵挖病毒案蒸的能力。4原理
将样品置下YY/T0699规定的測试装置上加人试验意挥效.按规定时间和压力进行诚验，接照本试验方法，即使在着不见液体穿透的情况下，仍能检测划等过材料的活病毒，实补充广日测穿透试验的不足。病幸穿透了测诚群品那认为该样品不合格：本试验方法要农具备基本的徽生物学技术，5微生物和试剂
5. 噬菌体Phi-X174(ATCC 13706-B1),满度至少为 ！. 0X10°PFU/m1让：中可懂菌体Phi-X7体积小球形（二面样，具有环境意性，对人炎不具有感染性，灵敏度高、生改快，满度高，离此选作最定的肌液传病原体模型，.....
YY/T 0689-2008/IS0 16604 :20045.2纸菌
大杆菌（AT：13706）
5.3缠水依据GB/T66822008等级35.4营养肉涵。
5.5 第化钙(CACl)。
氯化舜(KC
氢氧化钠(NaOH).2,5mo1/L。
表面活性剂：策山梨醇酯80。
5.9脂，
装驾和树料
6.1穿送试验槽：见YY/T0G9用下在压鼠验液体接触过程中保接住样品。在试验精中，防护服材研作务竭离物，将噬菊作Phi-X174式验悬择该操试验楷的可视面分隔。试验槽的槽体固定在一-个支擎槽体可容纳药6ml噬菌体Phi-71试验悬浮液，试验槽还装有个法兰盖，其「有像行肉限观察泄阀用于试验搏中液的瓣裁。其网等。试验槽及其部生示意图见图1
透期盖：
法兰：
支学网：
5圈，
试验举品；
杜外还有
樽体·孔期于填充液体有一排
体上的乳连接钓适配件，垫圜、支撑7
上部人1
PTFE材料
9试验体
图1试验携结构
排故阀：
试验摘支架，
托缩实气城点气：
气件管路接头：
汽体调节阀：
可谢书网致气阅；
压力计：
阀门；
连接头：
带连接头橡胶梵；
安全外壳：
试验：
摇菠离；
·转动火：
防滋腐;
双片箍环。www.bzxz.net
其他设备
图2试验装置（三维视图）
测原仪：能测员药0.02 rtn 的厚度。/T0689-2008/15065042994
支撑：方状磨光潮料或金屑洲，用于支持可伸的或障性的物质，应满是以下特性：a)
藏区域≥50%；
b）试验样品变照.0mm。
6.2、3气源：能疑供20.0 kFa~-22.0Pa的压谱着箱：能保持溢度在(361)：
水浴锅：能获得（45+2)的湿度。6.2.55
天平：精度为0.001g
设流混匀器。
YY/Y 0689--2008/1S0 16604:20046.2.8冰箱：能维持溢度在（5三3)℃6.2.9正力蒸汽灭茵器，能维持温度在（121士！).绝对压在（214上7)Pa6. 2. 10 训时器，准确度至少为1 s。6.2. 11振荡器。
6.2. 12pH计,录度为0,1 pH单位。6.2. 13接种坏。
6.2.14扭短扳手：只有13.6N：m的扭矩，6、2.15分光光度计：能在6401m处测量吸光度6.2、16离心机：具有10000r/min加速度，6.3实验窄皱璃器血
6.3.1培养m，无闭。
6.3.2移液管:无菌，1 ml.5 ml..10 mL，6.3.3 试管:13 mmx100 mrilu
6. 3.4 试管架。
6.3.5玻璃瓶：无菌，100ml.500mL6.3.6移液器：能精确吸取2l.
7试验样品
7.1测试样品的选择
7.1.！从单一的材料样品或单个防扩服样品（如采适用，应灭菌）中选摔，可选--个单层或按正确顾序登在-一越的能代表防扩服实际绪构的多层材料，如果防护服设计中不而部位使用了不同的材料或规定了不间厚度，则各个部位均应样。如果防护服设计中声明接缝处能提供与基不材料同样的防护效果，则应对含有接缝的样品进行试验。
将舞一材料释品剪成边长垒少为70nm的正方形，75mm最传。从每一个勤护服材料、组成，部位（非均一性材料设计时）或其他条件下髓机选择3个样品进行试验
姆架本程序用于防扩服质最控制或为防护服材料抗病声纤避性能提供一般证据时，应对大批数据进行正确统计学设让租分析，丽不是用术标准中规定的试验方法。独样计划可参见如（B/T2828.1等参资料、
7.1.2如果防扩服材料在离个纤维层中英有·-层害封层，则材料边缘的毛细作用可导致试验结果出现假阳性随使结果不合格。在逃行试验前，应用合剂，帕抗胶漠、医体石蜡或附有粘育剂的范泳将试验样品的边缘封好以避免出现“毛纸作用”的影响层，只对试验样品的边缘进行过固，中心部位留一边长为5711的止方形区域供试验，封固剂不能对试验区域的样品结构产生干扰、破坏或阻筹。应选择与防护服材料相窄的封围剂程间方法，7.2测试样品的制备
每个防护服样品应布渠度为（216)℃)，相对视度为（60士10)%的环境中放置至少24h如渠适用，可应用灭等其恼预处理来评定防护股吗能的损害性变化。8试验步骤
8. ！培薪基的制
8.t.1噬菌体营养肉汤(Phi-X174)噬菌体萃养肉荡配方姐下：
登白陈（8.0上0.1)%；
----氯化钾（5.0±0.06)g;
一氯化钙（0.2±0.003)
纯水(1 000→12. 5)ml;
装菌活线剂(c.110.00125)nL：
用 2. 5 mbl/1.的氢氧化钠溺整pH 至(7. 3±0, 1),￥Y/T0689-2008/15016604:2004用9份噬菌体营养肉汤稀释1份0.1为的长面插归剂，为保证充分混合，灭菌前，边搅拌边加热噬菌体营养肉汤。推举最终浓度为0.%的表面活性剂以游整表面张为(0.0420.002)N/m。用压木蒸汽灭菌器对菊体膏养肉火菌。披撬C/T5549测试灭菌后羧体的表面张力，如果魔菌传肉汤的表面张水不在（0.012十0. 002)N/1范围内，谢不能使用。8. 1.2 下层琼脂
下层琼躺甄如下：
.琼眙（15.Q±0.19)g
：营养肉语（8.0±0.1)g：
戴化钟（5.010.06）
纯水5. 3)(1 000±12.53ml,
氯化（1.0±0.0125)mL（压灭菌后加人）激答1mo!.的氧化凝光紧用蒸汽灭菌萧。患2,5 ol/L的微化调整 p牟7.3三0.，用压力蒸汽对底部琼脂灭菌。
8.1.3上层琼脂
层琬胎配方如下:
Barto-游脂（7.00.09)g
营养肉汤（8.0士0.1）客
--氯化钾（5.0二0.06）g）
纯水(5. 3)( 000+12. 5)m1.
氯化钙（1.0±0.0125)L商压灭菌后加入）。备1o的氟化钙溶液并经压蒸汽灭菌。用2.5 mo1/1.的氢气化钠调整P1至(7.3±0,1)。压力蒸汽对顶部琼脂灭菊。
8.2制备对照物
对每·件防护服或防护服材料进行战验时要同时倾用下列对照物：2）气溶胶/空气污染对照物：测定Phi-X174噬菌体时，用板或其跑适烹的方法剃定悬浮的或空气书的本底数目：
我天成罕少一次假册下刻对疆榨翻翻：的随性照试登样品：严落防渗的单膜成节样品医最包扎聚萌膜c
阻性对照试验样品：凹微孔过源介质制成的样品，孔餐为（0.050工0.005)μ比Pii-×17t曦荫体的直径（0.027um）略大。
8。3材料相容性测定
国为怀疑其影响曦茵体试验悬浮液的漓度，应避行防扩服材料相容性试验.
YY/T0689—2008/I8016604:2004测试二个能代装试样的样品；
6）将战验槽水平放置在实验台上，无菌操作将己火菌的样品的正常外表面面间试验槽放人槽内：
心）试验槽的释个部件灭菌所按图I所示组装；d）将试验槽的螺钉拧至扭矩 13.f N*m;e）保持试验樽水平放置，将2.0μL含S00PFtj1200PFU的噬菌体营养肉汤放在样品的中央部位，加5m己炎菌的噬菌体培养肉汤；将2.0ML噬菌体悬浮液高接加5mI.已灭菌的噬菌体培养肉汤中，制得对照物，）10 min后，按8.9定堂测试；
h）计算质控物满度与测试栏品滴之比；保持试验悬浮液的滴度（尼3.4），用下试验暴露的过程（见8.8），等同下2×10*PFU/mL~3×10*PFU/mnT.如果计算值火于5.0，则噬菌体试验悬浮被应为1×10°PFU/m.8.4噬菌体悬浮液的制备程序
噬菌体悬浮液的制备程序如下
a）将101mL~2m1噬菌体营养肉涵证人2501.二角瓶中，用接押环将大肠杆菌接种上培养液中，在温度为（36土1），转递为（225上2$）r/min的条件下培券过夜：6）用100.新鲜制备的噬菌体营养肉汤将1迷培养过夜的纽菌培养液1*100稀释，置于1T.的三角瓶中。在温（36士1），转速为（225土25）r/min的条件下培养，大约3斤，继菌增殖全浓魔为（3十1)×10*CFU/ml，与此对应的在分光光度计.上测得的6401的培养液吸光度为0. 3~0. 5,
c）将5mL~~10mL噬菌体PhiX174接种到上述细菌培养滋中，便体的满度为1.0×10PFL/mL1.0X10\PPU/mLr。确保曦体个数与缩菌个数之比在01和2.0之间，将亲种层纸菌培养液在（36土1)℃培养，剧烈露药1n-5h，真牟缔菌裂解，当培葬液640m下的吸光度不尚下降时可认为细菊完全裂解。）将培养液在10（00r/min下离心20min以去掉细跑碎片，将E层液倒入一干净的试管中f将含有噬菌体的悬浮液用心.22的膜过滤，以纯化噬菌体溶液。测定噬菌体溶液的滴度并（5二3)C保存。此时测得的噬菌体滴度一般在（5.0十2）×10FFU/nI.的范国内，
将慌菌休培养液稀释至8，3要求的浓度以制得壁菌体试验感浮液。按8.9规定的试验雄序测h
定噬菌体最终的浓皮度
8.5沉降平板制备
可选择在已次菌的试验样品效人，装液、试验、排液和测试过轻中，将平板放在关键的位置，这样有助于识别与点！气溶胶或空气传播PX174有关的潜在问题。按下述步骤制备平板：）将2.5ml.融化的已灭菌的上层琼脂倒人已火菌的试管中，保持「层琼脂的温衔（45土2）℃。低：平板制备一试售，将100uI.过俊放置的大肠杆菌培养液加人到上层琼脂试符中：b)
）充分混合试管后倒人下层琼脂平板上，）让惊腊凝，制备好的平板应文即使；便用房，随同试验样品平被、阴性谢照、即性对照·超培养8. 6本测
如果样品需要火菌，应在灭菌前按照心B/T3820对每一样品的厚度进行测量，精确至0.02mm:
YY/T 9689—2008/1S0 16604:2004如柴样品曾要灭菌.应在灭菌前按照B1669定每一样品的质量，龙以每单位面积的质最形式报告，精确至10g/m
用支撑网支持时伸展的或弹性材释。按版83痴定的方法定每一个试验链品的相容性，8,7试验携的准备
在(121-1)C,214主7)kPal下将试验压力蒸汽灭菌15 min,然后冷却至蜜温，将试验水平放置在试验台上，无南条件下将样品的正常外表而面向试验擅容器插人槽内;稻伪将会被盛满噬菌体Phi-X174试验愿浮液按照如下方式组装试验槽的个已灭菌的部件！a）如图1所示，在战验和试验样品芝解读验样保租支撑网之间，以及支撑网和法兰之间安装垫图：
盖1法兰盖都透剪善封闭试验槽（可用一火荣透明的塑料酵膜代赞透明盖）。建议准穿透试b)
验槽和试样间使用亲断烯（PTE的垫港以防止出现液体泄漏将纤透试验档岛蝶针幸扭
如图2听尔，新贰骏槽以垂
关闭排放凝。
8.8材料与噬修贰验悬浮液授
接下述步摄验材料与有
）从表播一适宜的
b）小心地ml.Phi-x綫幽漆
到战檀健，在争人的
将空气管道连接到试验
在作的压力和时
现察样
象，一皇发，记录发整维
如果术看亮孩体穿透现学
以（3.5±05的将试验槽至下
下）们不能将控气管道连接刻试验R
瑞斗或洋射器)从部的人口处洋人，测试验终让），
美否发生液慧穿遗现象战其他湿润现将所力维持在窥宠季平到规定的吋间，h）当气压返刚至实气压、美闭气压并将试验槽的阀门打开至通风置；i）到时间后，打开排墩阀馨噬菌体试验悬浮液从试验檀排放；试验后，稀释并测试疾余少每组重每试验的最君个试验集到的噬菌体 Phi-x174试验悬浮液，以确保试验过翟中燃落体的活性未丧失；将试验楷水平放置在试验台上打开逐期菱k
打开蔬届：紧接将5.0毛无菌营养肉汤（两活能剂添厚为001%缓慢班样品的正常内表面的暴露位置：轻轻播动藏验擦约1mir，确保试验与试验样品的整个！视面接糖。用无南服头将试验尽可能地吸到己灭卤的小瓶中。些材料吸收试验液，因些要更天量的清洗，这独情况下，要谓整诚验报告中的噬菌体滴度的算筐；按照8，9的规定逆速测试。如累能证明试验液中的菌体稳定，收集试验液和实际测试之间m
充许时间长一些：
拆开装置，清洗试验。定期对空气管路进行毒以防止污染。用10的漂户液冲洗试验n)
樽然盾干(121)C(214主7)kPa下压力蒸汽灭蕃15 min;o）测试余下的祥品。
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