【国家标准(GB)】 蜂胶中总黄酮含量的测定方法 分光光度比色法

ICS 65. 020. 01
中华人民共和国国家标准
GB/T20574-—2006
蜂胶中总黄酮含量的测定方法
分光光度比色法
Method for determination of total flavonoids in propolis-Colorimetricmethod
2006-09-14发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
数码防
2007-01-01实施
本标准由中华全国供销合作总社提出并归口。本标准起草单位：国家蜂产品质量监督检验中心。本标准主要起草人：马兰宇、曾纪琰。本标准为首次发布。
GB/T20574-2006
请注意本标准的某些内容有可能涉及专利。本标准的发布机构不应承担识别这些专利的责任。GB/T20574—2006
黄酮类化合物的测定有多种方法，如液相色谱法、分光光度法等。液相色谱法可以测定单一的黄酮成分，分光光度比色法可以测定黄酮成分的总量。本标准采用分光光度比色法，该方法具有设备要求简单、操作简便、易于推广普及的特点。CHINA
1范围
蜂胶中总黄酮含量的测定方法
分光光度比色法
本标准规定了蜂胶中黄酮类化合物的总含量测定方法。本标准适用于蜂胶，包括原始蜂胶、精制蜂胶及蜂胶的乙醇溶液本标准可用于测定黄酮类化合物的总含量在0.1%以的蜂胶P
2原理
溶于乙醇的黄醇美物在弱碱性条件下波长附近产生最大吸收。
较，可定量测定黄
试剂和材料
除非另有
3.1乙醇（95
3.2无水乙醛
GB/T20574—2006
与显色剂三价铝离子结合生成有色物质，可在415nm在一定浓度范围内·其吸光度与黄酮类化合物的含量成正比。与标准曲线比化合物的含量
G在分析中至少使用分析统
3.3硝酸铝溶
摇匀。
00g/L)：称取Al
武剂和兼馏水或去离子水。
.60g.加水溶解，定容于100mL容量瓶中，917
9.814g，加水溶解，定容于100mL容量瓶，摇匀。3.4醋酸钾溶液（9
8g/L)：称取醋酸钾
3.5芦丁标准活
香液(1.。
3.5.1芦丁对照
/L：精密称取经120C减压真空
干燥至恒重的声丁对照品50mg，置于50mL容量瓶火
加水乙醇
享（3.2）溶解并稀释
至刻度，搭匀。
3.5.2芦丁对照品健
液（O
瓶中，加无水乙醇（3.
仪器设备
可见分光光度计。
L：精密吸
，摇匀。
减压干燥箱（真空；温度200
高速组织擒碎机：8000r/min~12000试样的制备
原始蜂胶
原始蜂胶指未经过提纯处理的天然蜂胶。丁对照品储备液（35.1）0mL，置于50mL容量5.1.1将同一份样品的所有蜂胶块（取约50g～100g）置于冷冻条件下冷冻，待其变硬变脆后，用木锤敲打砸成小碎块，用高速组织捣碎机（4.3）粉碎后，过14目筛，混匀。5.1.2称取上述已粉碎的蜂胶样品约1g，精确到1mg。置烧杯中，加入乙醇（3.1)约30mL，烧杯置于65℃水浴中加热约45min，搅拌使之溶解。取出后冷却至室温，上清液使用快速滤纸过滤。烧杯、漏斗、滤渣及滤纸用少量乙醇（3.1）洗涤至滤液无色。最后用乙醇（3.1）稀释至50mL，摇匀，待测。GB/T20574—2006
5.2精制蜂胶
精制蜂胶指经过除去蜂蜡和砂石碎块等杂质的提纯蜂胶称取蜂胶样品0.5g，精确到1mg。置烧杯中，按5.1.2制备。5.3蜂胶溶液
蜂胶溶液指蜂胶的乙醇提取液。吸取蜂胶溶液样品5mL～10mL，置于50mL容量瓶中，加乙醇（3.1)稀释至刻度，摇匀，待测。或吸取蜂胶样品溶液5mL～10mL，置于50mL容量瓶中。称重，精确到1mg。加乙醇（3.1)稀释至刻度，摇匀，待测。
6分析步骤
6.1标准曲线的绘制
6.1.1精密吸取芦丁对照品使用溶液（3.5.2)1mL，2mL，3mL，4mL，5mL，6mL，分别置于50mL容量瓶中。
6.1.2加乙醇（3.1)至总体积为15mL，依次加人硝酸铝溶液（3.3)1mL，醋酸钾溶液（3.4)1mL，摇匀，加水至刻度，播匀。静置1h。6.1.3用1cm比色杯于415nm处，以30%乙醇溶液为空白，测定吸光度。6.1.4以50mL中芦丁质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线或按直线回归方程计算。线性工作范围0mg~1.2mg（50mL）。6.2空白试验
精密吸取待测试料溶液1.0mL，置于50mL容量瓶中，加乙醇（3.1）至总体积为15mL，加水稀释至刻度，摇匀。
6.3测定
6.3.1精密吸取待测试料溶液1.0mL，置于50mL容量瓶中，按6.1.2进行操作。6.3.2以空白试液（6.2)作参比，用1cm比色杯，在波长415nm处测定试料溶液的吸光度。6.3.3查标准曲线或通过回归方程计算，求出试料溶液中的黄酮类化合物含量（mg），7结果的表述
7.1蜂胶中黄酮类化合物的总含量按式(1)计算。式中：
X=w×dx1000×100%
X一黄酮类化合物的总含量，%；（1）
m一一由标准曲线上查出或由直线回归方程求出的样品比色液中芦丁质量，单位为毫克（mg）：W—-样品的质量或体积，单位为克（g）或毫升（mL）；d—稀释比例。
7.2计算结果表示到小数点后两位。8允许差
同一操作者两次平行测试结果允许：原始蜂胶
精制蜂胶及蜂胶溶液
相对相差≤8%；
相对相差≤5%。
GB/T20574-2006
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国家标准
蜂胶中总黄酮含量的测定方法
分光光度比色法
GB/T20574—2006
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开本880×1230
2007年1月第一版
印张0.5
字数6千字
2007年1月第一次印刷
书号：155066：1-28783
3定价8.00元
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