【国家标准(GB)】 谷物中维生素B2测定

ICS 67. 060
中华人民共和国国家标准
GB/T7629—2008
代替GB/T76291987
谷物中维生素B测定
Determination of vitamin B, in cereals2008-05-27发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-10-01实施
GB/T 7629--2008
本标准参考了AACCMethod86-70《Riboflavin—FluorornetricMethod》（2000午英文版）。本标准是对GB/T7629—1987《谷物维生素B，测定方法》的修订。本标准与GB/T7629：1987在技术1的主要差异如下：规定了扦样、分样法；
-盐酸提取改为硫酸提取；
·增加广对高空白试样氧化条件的规定；一取消了按十基计算测定结果的要求；增加了谷物中维生素B低含量时测定重复性的要求。本标准由国家粮食局提出。
本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家粮食局武汉粮油饲料质量监督检验中心。本标准主要起草人：杨林、届利文、刘小敏、钱防、何帆。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-GB/T7629—1987。
1范围
谷物中维生素B2测定
GB/T 7629—2008
本标准规定了用荧光分光光度祛测定谷物中维生素13的原理、试剂和材料、仪器设备，试样制备、分析步骤、结果计算及重复性。本标准适用于谷物中维生素B，的测定。本标准检出限为0.061g。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随质所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682:1992，eqISO3696：1987）3原理
维生素Bz（核黄索）在445nm光激发下产生荧光，在一定浓度范围内其荧光强度与维生素B，浓度成正比。用硫酸提取试样中的维生素B，用连二亚硫酸钠还原维生素B2生成无荧光物质。根据还原前后荧光强度之差与内标维生素B标准溶液荧光强度的比值，计算样品中维生素B的含量。4试剂和材料
除非另有规定，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合（13/T6682中三级水的规格。4.1硫酸溶液c(1/2H,S0.)=0.1mol/L量取2.8mL浓硫酸加人水中，稀释率1000mL，4.2乙酸钠溶液 c(CH,COONa)=2.5 mol/L称取 310 g水合乙酸钠(CH:CO0Na-3H,0)溶解于水中,稀释至 1 000 mL。4.3高锰酸钾溶液c(KMn0）=0.04g/mL称取4g高锰酸钾（KMnO)溶解于水中，稀释至100mL，使用当日配制，贮存于棕色试剂瓶中。4.4过氧化氢溶液c(H,0z)=100mL/L量取10mL过氧化氢（H,02.30%>用水稀释至100mL，现用现配。4.5维生素B2标准溶液
4.5.1维生R储备溶液Ic=25/m
将维生素Bz置于装有五氛化二磷燥剂的T燥器内放置24li。准确称取50mg维生素B，于装有1500mL水和2.4ml冰乙酸的2000ml.烧瓶中，加热充分溶解，冷却，转移至容量瓶中，用水定容至2000mL，充分混匀后再转入棕色瓶中，滴加甲苯覆盖，贮存子冰箱（1℃）中。4. 5.2维生素Bz标准储备溶液（I)c10 g/mL推确吸取20mL维生素Bz储备溶液（I）(4.5.1）用水稀释定牟50ml：冷藏于冰箱（4℃）)中。4.5.3维生素B标准工作溶液（Ⅱ）c=1μg/mL准确吸取10mI.维生素Bz标准储备溶液（I)(4.5.2）用水稀释定容至100mL,现配现用，避光保存。GB/T 7629-2008
4.6连二亚硫酸钠(Na,S,04)
4.7荧光素标准溶液
4.7.1荧光素储备溶液c=（CgHzOs)50pg/mL准确称取荧光素（CmHz0）50mg，用水充分溶解，定容至1000mL，移入棕色瓶内，冷藏于冰箱(4℃)中。
4.7.2荧光素标准工作溶液c=（C2.Hi20,>0.05μg/ml准确吸取荧光素偌备游液（4.7.1）1mL，用水定容至1000mL，移人棕色瓶内，冷藏于冰箱(4℃)中。
5收器设备
5. 1 分析天平:感量 0. 1 mg。高斥灭锅或电热恒温水浴：100℃。5.2
15 mL具塞玻璃刻度试管。
容量瓶:100ml,1000mL,2000mL。移液管.0.5mL，kmL.5mL,10mL.
金属丝编织网试验筛孔径中0.84mm(20日）。千燥器;装有五氧化二磷「燥剂。实验磨。
荧光分光光度计。
6试样制备bzxZ.net
6.1按GB5191进行扦样，分样。
6.2用实验磨粉碎粒状谷物样品（如小麦、人米、玉米渣，玉米片、膨化谷物等），通过孔径Φ0.84mm(20 )筛,混勾,装人磨口瓶中备刑。7分析步骤
7.1称样
按表1推荐鼠称取试样m(精确至0.0001g）,置于100mL容量瓶中，表1称取试样推荐量
维牛素B.含量/(mg/kg）
0. 0~1. 6
1. 6.～ 4. 0
7.2制备样液
称样量/g
在装有试样的穿量瓶中加人0.1 mal/L 硫酸（4. 1)75 mL，混勾，置于高压灭菌锅中，在1.03×10°Pa相当于1.U2atm）的压力下加热30min，或浸人沸水浴加热30min，每5min摇动一次，防止结块。冷却至空温，加人2.5 mal/I.乙酸钠溶液(1.2)5mL,混勾，用水定容至[00 mL,即为试样初始体积V，此时溶液的pH约为4.5;用中速于滤纸过滤，弃去最初的10L～15nL滤液，收集滤液于100mL锥形瓶中
7.3杂质的氧化
取 15 mL具塞玻璃刻度试管 2支,分别标记为 A和 B,在 A和B试管中,按表 2排列顺序和剂量，分别依次加人试样溶液（7.2）、维牛素B.标准工作溶液（Ⅲ）（4.5.3）、水，高锰酸钾溶液（4.3)。每次加2
GB/T7629—2008
入高锰酸钾溶液（4.3)后，应旋摇混匀，充分氧化，氧化时间参照表2。然后，再分别加入过氧化氢溶液（4.4），摇荡试管，至试管中产生的气泡逸尽。以.L操作应避免直射光。表 2试剂量及氧化时间
具寒被璃刻度试管中依次加人的济液试样溶液/ml，
维生素B标准工作溶渡(4.5.3)/ml水/mL
高锰酸钾溶滋（4.3)/ml.
氧化时间/mir
过氧化氢(4.4)/ml）
7.4测定
低空白试样状态时
商空白试样状态时
用标准玻璃片或荧光索标准工作溶液（4.7.2)调芦荧光分光光度计，使其处于正常工.作状态。调整激发波长为445nm，发射波长为530nr，分别测定管A，管的荧光强度Λ、B。样液在仪器中受激发光照射时间应不超过10s。
向B管内的溶液加人20mg连二亚硫酸钠（4.6），振摇溶解.测定其荧光强度C。若溶液浑浊不能读数，应重新进行操作。
8结果计算
试样中维生素B，含量按式(1)计算：(B-C) × m ×V×1 000
(A-B)XmXVX1000
式中：
试样中维生素B含最，单位为毫克每千克（mg/kg)：加维生素B标雅工作液的试样溶液荧光强度；加水的试样溶液荧光强度；
-加入连二亚硫酸钠之后试样溶液的荧光强度；样品溶液加入的标准维生索素B，的量，单位为微克（g)：样品溶液的初始体积，单位为毫升（mL）；Vi—.测定时量取的试样溶液体积(10ml.),单位为毫升（mL）；m
试样质量，单位为克（g)。
每个样品进行平行试验，以算术平均值为测定结果。计算结果保留3位有效数字。9重复性
（1）
同分析者对同---试样在同样条件下同时进行两次测定：当维生素Bz含量X<5.0mg/kg时，其获得的两次独立测定结果的相对偏差应15%；当维生素Bz含量X5.0mg/kg时，其获得的两次独立测定结果的相对偏差应≤10%；当维生素B，含量X≥50.0mg/kg时，其获得的两次独立测定结果的相对偏差应5%。
GB/T 7629-2008
中华人民共和
国家标雅
谷物中维生素B测定
GB/T 7629
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字数？千字
2008年7川第-版 2008年7月第一次印刷*
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