【国家标准(GB)】 水质 组胺等五种生物胺的测定 高效液相色谱法

ICS 13. 060
中华人民共和国国家标准
GB/T21970—2008
组胺等五种生物胺的测定
高效液相色谱法
Waler quality-Determination of putrescine, cadaverine, spermidine,spermine and histamine--High performance liquid chromatography method2008-06-11发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-06-11实施
中华人民共和国
国家标准
组胺等五种生物胺的测定
高效液相色谱法
GB/T 21970—2008
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2008年7月第一版
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本标准的附录 A、附录 B、附录 C为资料性附录本标准由中华人民共和国科学技术部和中国分析测试协会共同提出。本标推由全国仪器分析测试标准化技术委员会归口。本标准负贡起草单位：中国医学科学院药物研究所，中国计量科学研究院。GB/T21970—2008
本标准参加起革单位：中国人民解放军军事医学科学院、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、中国科学院生态环境研究中心、北京理工大学、国家地质实验测试中心，岛津北京分析中心、北京市理化分析测试中心、中国农业科学院、中国地质大学（北京)、中国测试技术研究院。本标准主要起毕人：柱冠华、吕扬、李红梅、王琰、董方霆。1范围
水质车
组腰胺等五种生物胺的测定
高效液相色谱法
GB/T 219702008
本标推规定了用苯中酰氮桁生化-高效液相色谱紫外检测法测定水中腐胺.尸胺、亚精胺、精胺及组胺合量的方法。
本标准适用于水中 2. 0 mg/L.~40. 0 mg/1. 的腐胺、户胺、亚精胺、精胺及组胺的测定。2规范性引用女件
下列文件中的条款通过本标推的引用而成为本标准的条款。凡足注日期的引用文件，其随后斯有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1一2004测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义G白/T 6379.2—20U4测量方法与结果的雅确度(正确度与精密度）第 2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法
GB/T6682分析实验室用水规格和验方法（G3/T6682--[992，eISO3696：1987)GB/T12999水质采样样品的保存和管理技术规定3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3. 1
水样 water sanple
供实验室检验或测试的未经处现的水，3.2
试样 treatel water
经过衔生化和萃取处理后，供高效液相色谱仪测试用水样，4原理
水样经苯甲酰氯衍尘化后用乙醚萃取，萃取物经溶剂转换后用高效较相色谱紫外检测器检测，外标法定量。
5试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水为GB/T 6682规定的一级水。5.1苯甲酰氯(C,HsOCI)。
5. 2 乙醚(CHi1oO)。
5.3甲醇(CH,O):色谱纯。
5.4乙購(C,H3N):色谱纯。
5.5氯化钠(NaC1)。
5. 6 氮气(Nz);99. 99%。
GB/T 21970—2008
5.7滤膜:0.45 μm,水相，
5.8一次性过滤器：13mm~15mm，0.45±m，有机相。5.9氢氧化钠(NaOID)溶液：2.0mul/1.。称取4g氧氧化钳.用50ml.水溶解完全后，混匀。5.10乙酸铵(CH:COONH4)溶液：0.02mol/L称取1.54g乙酸铵于11.容量瓶中，用水完全溶解，稀释至刻度，经滤膜（5.7)过滤。5. 11腐胺标准贮备溶液:1. 00 mg/mL。准确称取0.1827g盐酸腐胺(CH12N2，2HC1纯度≥99%)推确至0.0001g，于100mL容量瓶中，用水溶解完全后，稀释至刻度，混匀。于4℃保存，有效期为3个月，5. 12户腰(CsH14Nz)标准贮备溶液： I.0 mg/mL准确称取0.1000g户胺（纯度99%>准确至0.0001名，于-100mL容量瓶中，用水究全溶解后，稀释至刻度，混勾。于4℃保存,有效期为3个月：5.13亚精胺（C，H1gNs）标准贮备溶液：1.00mg/mL。准确称取0.1000g亚精胺（纯度≥99%）准确至0.0001g，于100mL容量瓶中，用水完全溶解后，稀释至刻度，混勺。于4℃保存，有效期为3个月。5.14精胺(C1nH26N4）标准贴备溶液：1.00mg/mL。准确称取0.1000名精胺（纯度≥99%）准确至0.0001名，于100mL容量瓶中，用水完全溶解后，稀释至刻度，混匀。于4℃保存，有效期为3个月。5.15组胺(C,HgNs)标准败备溶液:1. 00 mg/mL。准确称取0.1000g组胺（纯度≥99%）准确至0.0001g，于100mL容量瓶中，用水完全溶解后，稀释至刻度，混匀。于4℃保存，有效期为3个月。5. 16 标准工作溶液:使用时配制。5.16.1分别移取10.0ml.腐胺（5.11）.户胺（5.12)、亚楷胺（5.13）)、精胺(5.14)及组胺（5.15)标准贮备溶液，置于100mL容量瓶中，用水稀释牟刻度，混勾，获得标准混合溶液。此标准混合溶液1ml含腐胺、尺胺、亚精胺、精胺及维胺各0.100mg5.16.2按表1分别移取不同体积的标准混合溶液（5.16.1)置于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混句。
标难混合溶液体积/ml.
表1标准工作溶液配制
腐胺,F1胺、亚精胺、精胺、纸胺浓度/(mg/L)定容体积/mL
6仪器
6.1高效液相色谱仪，紫外检测器：带梯度洗脱装置。6.2色谱耗：C1色谱柱，或性能相当者。6.3液体混匀器（或称涡旋混勾器）。6.4 恒温水浴箱。
6.5具塞刻度试管：10mL。
6.6 分析天平:感量 0. 1 mg
7样品的制备和保存
7. 1水样保存
水样密封，于4℃保存，保存期不超过7d。2
7.2试样保存
试样密封，于4℃保存，保存期不超过7d。8测定步骤
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警告：由于有机生物胺成分可能存在有一定的费副作用及过敏反应，实施本标准操作时建议配戴口罩和橡胶手套。
8.1水样的衍生和萃取
8.1.1移取2.00mL水样置于10L只塞刻度试管（6.5）中，加入1mL氧氧化钠溶液（5.9）、20ul茉甲氯（5.1），在液休混句器（6.3）上祸旋308，置于37水裕（6.4)摄荡，反应时间20min.反应期间每隔5min涡旋30%。
8.1.2衔衍牛反应完毕后，加人1g氯化钠5.5）、2mL乙醚（5.2)，振荡混匀，涡旋30s，静置。待溶液分层后，用滴管将乙链层完全格取至10 ml.具塞刻度试管(6.5)中，用氮气(5.6)或吸耳球缓缓吹于艺避，加1.00ml.甲醇（5.3)溶解，再用一次性过滤器（5.8)过滤片：作为高效液相色谱分析用试样。8.2不同浓度标准工作溶液的行生和萃取8.2.1移取2.00tnL不同液度的标准L作漆液分别置于5个10mL具塞刻度试管（6.5）中，加入1mL氢氧化钠溶液（5.9）、20μL苯甲酰氯（5.1)，在液体混勾器（6.3)1.涡旋30s充分混每8.2.2萃取步骤同 8.1.2。
8.3高效夜相色谱测定
8.3.1色谱条件
色谱柱：C1s色谱柱，5um，4.6mm×250mm，或性能相当者a)
拉温：室温；
流动相：A（乙腈）,B(0.02 mo1/L乙酸铵），梯度洗脱条件见表2;d
检测波长：254nm
避样量：20μL。
表 2 梯度洗脱条件
时向/min
8.3.2液相色谱分析测定
8.3.2.1仪器的准备
流理/(mL/tain)
A(艺睛)/%
开机，预热，使用流动相冲洗色谱柱，待基线稳定30 min后开始进样。8.3.2.2定性分析
B(0. 02 mol/L, 乙酸铵)/%
利用保留时问定性法，根据胺、户胺、亚精胺，精胺及组胺的标准色谱图（参见随录A）中各物质的保留时间，确定样品中物质。8.3.2.3定量分析
校准方法为外标法，
8.3.2.3.1校准曲线制作
使用衍生化的标准工作溶液（8.2.2分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，分别绘制腐胺、尸胺、亚精胺,精胺及组胺的校准曲线。3
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8.3.2.3.2试样测定
便用试样（8.1.2)分别进样，每个试样重复3，获得每个物质的峰商积。根据校准曲线计算被测试样中腐胺、户胺，亚精胺、精胺及组胺的含量(Ⅱ/L)。水样中各待测物质的响应值均应在本标准的线性范围内，注：当试样中某种生物胺的喇应值高丁本标准的线性范函时，应将水样释适当倍数后再进行衍生、萃取和测定。9结果计算
结果按式(1)计算：
式中：
x——水样中被测物质含量，单位为毫克每升(mg/L)；F-—稀释倍数；
一一从标准工作曲线得到试样溶中被测物质的含量，单位为毫克每升（m/L）。10精密度
本标准精密度数据按照GB/T6379.1--2001和GB/T6379.2--2004规定确定，重复性和再现性值以95%的置信度计算，精案度结果应满足表3要求。表3水质中五种生物胺含盘范国及重复性和再现性方程截分
业精鞍
水平范围/(mg/T)
2. 0--40. 0
2. 0~40. 0
2, 0~-40.0
2. 0~40. 0
重复性限(r)
T0. 726 5 +0. 250 1 m
F=0.090 8+0, 305 4 m
r=0. 003 4+0, 295 1 m
=-0.1886+0.3585m
-0,3334+0.3731
再现性限(R)
R--0. 908 1+0. 381 4 m
R=0. 471 6+0. 433 3 m
K=0. 776 6+0. 391 0 m
R=1. 393 0+0. 609 7 m
R-0. 335 9+0. 589 7 m
注：m表示两次测定结果的算术平均值，单位为衰克你升（mg/1.）如果两次测定值的差值超过重复性限「，应舍弃试验结果非重新完成两次单个试验的测定。精密度实验结果参见附录B.图示参见附录C。11实验报告
实验报告应包括下列内容：
鉴别水样、实验室和分析H期等资料；遵守本标准规定的程度；
分析结果及其表示；
测定中观察到的异常现象，
c）对分析结果可能有影响而本部分未包括的操作或者任选的操作。12质量控制与质量保证
实验人员.仪器设备标准物质及水样的采集与保存等应满足如下要求：操作人员应按照国家相关规定，并真备从事相应实验的技术能力；h)
仅器应通过检定或校准，在有效使用期内；建议采用有证标准物质，若采用自配标样，应使用有证标准物质对自配标样进行验证；水样采集科保存应严格执行本标准，GB/T12999及国家其他相关规定，实施全过程质量控制和质量保证。
附录A
(资料性附录》
五种生物胺标准物质衍生物色谱图五种生物胺标准物质衍生物的色谱图，见图A.1。mAL:
腐胺；
2-户胺；
3--业精胶，
一精胺；
5组胺;
反应副产物。
图A，1五种生物胺标准物质衍生物的色谱图12
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附录B
资料性渐录）
五种生物胺的精密度实验结果
五种生物胺的精密度实验结果见表B.1。表 B. 1五种生物胺糖密度实验结果成
亚精胺
理论值
实验结果/(ng/L)
测定结果平均值
重复性限（r）
再现性限(R)
附录C
【替料性附录】
五种生物胺的精密度数据图示
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五种生物胺的精密度图示分别见图C.1～图C.5，对应的公式见本标准第10章。其中R表示再现性限，7表示重复性限。
浓度（nu/L）
腐腰的精密度数据图示
浓度/(mg/l.)
图C.2户胺的精密度数据图示免费标准bzxz.net
浓度/(mg/L)
亚精胺的精密度数据图示
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(I/w)/
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浓度(mg/L)
精胺的精密接数据图示
浓度/mg/L)
组胺的精密度数据图示
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