【国家标准(GB)】 肠衣中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS 67.120.99
中华人民共和国国家标准
GB/T 21166—2007
肠衣中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of nitrofuran metabolites residues in casingLC-MS/MS method
2007-10-31 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
术标推的附录A为资料性附录。
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提山并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。GB/T 21166.--2007
本标准主要起草人：陈惠兰、」涛、沈崇钰、吴斌、徐锦忠、林宏、李公海、张扬、蒋原、蔡宝亮、陶宏饰。.
http：//foodmate.net1范围
肠衣中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GR/T 21166--2007
本标准规定广肠衣中吹喃它酮的代谢物 5-中基吗嘛-3-氨基-2-嗯唑烷基酮（简称AMOZ）、味喃西林的代谢物氨基腺(简称SFM)、呋哺要因的代谢物1-氨基-2-内酰脲（简称AIID)和呋哺唑酮的代谢物3·氮基-2-哗烷基嗣（简称A0Z)残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。本标难适用于肠衣中硝基呋喃类代谢物残留最的测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注月期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标雅达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注H期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682--1992.nCAISO3696：1987)3方法提要
硝基呋哺类药物在动物体内迅速分解，其原位稳定性只有数小时，而其代谢物在动物体内容易和蛋白维织结合，分稳定，在酸性茶件下，与蛋白质组织键合的硝基呋喃类药物代谢物游离来，与衍生化试剂避光衔牛化16h，乙酸乙赠提敢后，浓缩定睿，用液相色谱-书联质谱仪测定，内标法是量。4试剂和材料
4.1水：应符合GB/T6682规定的一级水。4.2 甲醇;HPLC级。
4.3乙酸乙酯:HPLC级。
乙酸铵;IIPI.C级。
4.5无水磷酸氢二钾：分析纯。
4.6二甲基亚砜:分析纯，
邻硝基萃甲醛：分析纯，
4.8盐胶：3G%~-38%分析纯。
4.9间位素内标:AHI).13C3,AMO7-D5,A07-IM,SEM·HC1-(*C,*N2),100 μg/mL,纯度98%4.10AOZ、SEM·HCI、AMOZ和AHD·HCI标准品：纯度298%。4.11A(Z、SEM.AMOZ和AHI）标准储备游液：1mg/mI+。准确称取适量的AOZ、SEM·HCI、AMOZ和FAHD·HCl标推品（4.10)，用甲醇（4.2)配成1.0mg/mL的标雅储备腋。储备液贮存在4℃冰箱中,1年有效。
4.12AO7.,SFM.AM07.和AIII标准工作溶波：用甲醇分别配成浓度为100ng/mL、10ng/mL标准作溶液,标难工作落液在4℃保存，3个月有效。4.13内标溶液：用甲醇配制浓度为0 ng/ml.四种内标混合溶波，内标混合溶液在4℃保存，1代有效。
4.14衔生化溶液：50mmol/1.邻硝基苯甲醛，称取0.0378多的邻硝基苯扫醛（4.7)到50rml.烧杯品伙伴网ht
GB/T 21166—-2007
中,加人5 ml. 一甲基亚研(4. 6)溶解.现配。4.15磷酸氢二钾缓冲液(1mol/L).称取87.1g无水磷酸氢一钾(4.5),加人500mL水率解。5仪器
液相色谱-中联质谱仪（串联四极杆）：配有电喷雾离子源。5.1
5.2分析天平：感量0.01 g和0.1 mg各一台。5.3旋转发仪或相当者。
5.4水浴振荡器
5.5祸混匀器。
5.6些液器：50mL。
真空泵：真空度应达到8UkPa。
5.8离心机。
5.9移液器，5 mL,200 μl.。
离心管：50mL具塞。
6试样的制备与保存
6.1试样制备
将实验空样品绞碎均句.分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品袋中，密封，并做上标记。6.2试样保存
将试样于冷冻状态下保存（一18℃)。7测定步骤
7.1提取
准确称2.00g试样，置于50mL其塞离心管中，准硫加人0.100ml.50ng/ml.四种内标混合溶液（4.13）、4ml.水，0.5mL1mol/LHCl.150L邻硝基萍甲醛落液（4.14），于旋涡混器上快速滤合30，37℃水浴振满过夜（16h）。取出样品，冷却到室湿后，加入3.5mL磷酸一钾缓冲液（1.15）调节样品溶液pH77.5。加人8mL乙酸乙酷，混合30，2500r/mi离心5min，取上层z酸乙酯溶液到50mL玻璃试管中，再加人8mL乙酸Z酯，重复[:述提取步骤，合并提取液，40C水浴旋转蒸发干。用甲醇水溶液（1+6)1.0mL定容，过0.45um的滤膜到进样瓶中，供液相色谱-串联质谱仪测定，7.2标准溶液的衍生化
分别准确移取100ng/mL和10mg/ml四种标准混合游液（1.12)0.20mL.0.10mL和0.050mL到相应F净的50mL玻璃离心管中，准确加人（.100mL四种标准内标混合溶液（4.13）.0.5mL1mol/1IICI、150L邻硝基苯甲醛溶液（4.14），下旋涡混器上快速混合305，37℃水浴振荡过夜（1Gh）。按照样品提取步骤处理(7.1)后，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.3测定
7.3.1参考液相色谱条件
色谱柱：Ce，5μm，150tmm×2.1mm（内径），或相者；a）
流动相：甲醇（A）十0.5mmol/L乙酸铵水溶液（B)；b)
流速:0. 25 mL/min;
梯度洗脱程序：0min~6.0min20%~60%A,6min8min60%A,8min~9min60%~d)
80%A,9min~9.1min80%~20%A,9.1min~10.5tnin20%A;耗温：室温；
f）挑样章：25 μl.，
合原伴网ht：
串联质谱条件
离了源;电喷筹离了化电离源(ESI),正离子监测，扫方式：选摔离子检测(SRM)；
塞化气汽为高纯氨气，碰撑气灯高纯氮气喷雾电压、碰搅电压等电压值均优化至最佳灵敏度；选释离子对见表1。www.bzxz.net
表1选择离子对
定物质
SEM-(1C,\N2)
AII>-\C3
AMOZ-D5
定母离子。
7.3.3液相色谱-串联质谱测定
母离了
GB/T 21166---2007
子离子
134″
衍生化庐的标雅下作溶液(7.2)在液相色谱联质谱设定条件下分别进样，以标准与内标物峰面积比值为纵坐标，工作溶液浓度（tg/ml)为横标，绘谢6点标准:工作线(0.5 ng/ml.--20 ng/mL），用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中标准的响应值均应在仪器測定的线性范围内。在上述位谱条件下,其相应的标准物质、内标色谱图和串联质谱图参见图A.1和图A.2。7.4空白试验
除不加人试样外，按上述步骤进行。8结果计算
结果用色谱数据处理机或按式(1)计算样品中硝基峡喃代谢物的浓度，结果扣除空门值：C.
武中：
样品中硝基峡腩代谢物的浓度：单位为微克每下克（g/kg)；A
样品中硝基以喃代谢物的峰面积与成内标峰面积比值；硝基映哺代谢物标证的质量，单位为纳点（g）；m.
A。一标混品中硝游峡响代谢物的峰面积与相应内标峰面积比值；m
静品质量，单位为克(g）
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GB/T21166---2007
测定低限和回收率范围
本方法中四种硝基峡喃类代谢物测定低限均为0.5μg/kg，肠衣中叫种硝基峡嘴类代谢物添加浓度及问收率范围（内标校正）的试验数据（\一10）：0.5/kg添加水平，国收率范围在92%~-104%；1.0μg/kg添加水平，同收率范围在87%～120%；2.0ug/kg涨加水乎,向收率范围在91%~112%。4
http：//foodmate.net100
附录及
（资料性附录）
标准品色谱图及二级质谱碎片图AHD 240>134
[S.AHD 252>134
AO2236>134
1S-A07. 240>134
SEM 209166
IS-SFM 212>168
AMO2335>-291
3S-AMO2.340>296
硝基呋喃类代谢物和其相应内标离子流色谱图ht
TTITTIT:
GB/T21166—-2007
GB/T21166—2007
109,975
133.90号
四种硝基喃代谢物二级质谱碎片图图 A.2
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