【地方标准】 饲料中喹乙醇的测定 酶联免疫吸附法

DB43/T789—2013 饲料中喹乙醇的测定酶联免疫吸附法于2013年8月15日发布，并于2013年10月15日实施。本标准由湖南省质量技术监督局发布，湖南省畜禽水产品质量检验检测中心起草，主要起草人包括李裕、谭美英、吴礼龙、徐丽枚、陈启友、黄勇、曹峰、周玉洁、周灿、刘芬。 1 范围 本标准规定了饲料中喹乙醇的酶联免疫吸附测定方法。适用于配合饲料、浓缩饲料中喹乙醇的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的： - GB/T6682 国家实验室用水规格和试验方法 - GB/T14699.1 饲料采样 - GB/T20195 动物饲料试样的制备 3 原理 通过抗原抗体反应，酶标记物将底物转化为有色产物。经酶标仪测定其吸光度，计算试样喹乙醇的含量。 4 试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682二级水的规定。 4.1 甲醇 4.2 喹乙醇标准品（含量99.6%） 4.3 喹乙醇标准溶液：精确称取喹乙醇标准品10.0mg，用少量水溶解后，用甲醇稀释至100mL。取此液10mL，再用甲醇稀释至100mL，保存期为1个月，避光存放于棕色容量瓶内，冷藏于4℃。 4.4 喹乙醇酶联免疫试剂盒（不同试剂盒产品组成或名称可能有所不同）： 4.4.1 喹乙醇系列标准溶液 4.4.2 酶标板 4.4.3 酶标记物 4.4.4 喹乙醇抗体 4.4.5 底物溶液 4.4.6 显色溶液 4.4.7 终止液 5 仪器与设备 5.1 酶标仪（配相应滤光片） 5.2 精密天平：感度0.01g和感量0.00001g 5.3 离心机 5.4 离心管 5.5 旋涡混合器 5.6 微移液器：20μL, 50μL, 100μL, 1000μL 6 采样 按GB/T14699.1的规定执行。 7 试样的制备 按GB/T20195的规定执行。取制备好的供试样品，作为供试试料。取制备好的空白样品，作为阴性试料。称取适量空白试料，添加喹乙醇标准溶液，使其喹乙醇含量为200μg/kg，作为阳性添加试料。 8 提取与测定 样品的提取与测定按试剂盒说明书的要求执行。 9 结果计算 所获得的标准溶液或供试样品的平均吸光度值除以零浓度标准溶液的平均吸光度值再乘以100%，得到以百分比给出的吸光度值。以公式（1.1）表示： 百分吸光度值 = (B / Bo) × 100% 式中： B = 标准溶液或供试样品的平均吸光度值 Bo = 零浓度标准溶液的平均吸光度值 然后以标准溶液中喹乙醇浓度（ng/mL）为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线，求出回归曲线的方程，计算供试液中喹乙醇的浓度。饲料中喹乙醇的含量按实际稀释倍数计算。 10 结果判断 10.1 实验有效性判定 标准曲线应线性良好，且R≥0.9900。阴性试料不得呈喹乙醇阳性或假阳性率≤5%。阳性添加试料回收率应在60.0%~120.0%之间。