【地方标准】 鳗鲡疱疹病毒感染诊断技术规范

福建省地方标准 DB35/T2024—2021 鳗疱疹病毒感染诊断技术规范 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》起草，涉及鳗疱疹病毒（Herpesvirus anguillae）感染的诊断技术。文件由福建省农业科学院提出，福建省海洋与渔业局归口，主要起草单位为福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、福建省农业科学院生物技术研究所、福州海关技术中心、清流县畜牧兽医水产中心。主要起草人包括饶秋华、葛均青、张志灯等。 1 范围 本文件规定了日本鳗（Anguilla japonica）、欧洲鳗（A. anguilla）、美洲鳗（A. rostrata）、花鳗（A. marmorata）及太平洋双色鳗（A. bicolor pacifica）的鳗疱疹病毒感染诊断技术，适用于鳗疱疹病毒感染的诊断。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款，通过本文件的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有修改单（不包括期误的内容）或修订版均不适用于本标准，而应使用这些文件的最新版本。 - GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件： - CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（Cetyltrimethylammonium bromide） - dATP：脱氧腺苷三磷酸（Deoxyadenosine triphosphate） - dCTP：脱氧胞苷三磷酸（Deoxycytidine triphosphate） - dGTP：脱氧鸟苷三磷酸（Deoxyguanosine triphosphate） - dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（Deoxyribonucleoside triphosphates） - DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid） - dTTP：脱氧胸苷三磷酸（Deoxythymidine triphosphate） - EB：溴化乙啶（Ethidium bromide） - EDTA：乙二胺四乙酸（Ethylene diaminetetraacetate） - HVA：鳗疱疹病毒（Herpesvirus anguillae） - PCR：聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction） - Taq酶：DNA聚合酶（Thermus Aquaticus DNA Polymerase） 5 主要试剂和材料 5.1 水：应符合GB/T 6682中一级水的规定。 5.2 Taq酶：2U/μl，-20℃保存。 5.3 dNTP：dCTP、dGTP、dATP、dTTP，浓度为2.5mmol/L。 5.4 引物： 上游引物 HVA-F：5'-GTGTCGGGCCTTTGTGGTGA-3' 下游引物 HVA-R：5'-CATGCCGGGAGTCTTTTTGAT-3' 引物浓度为10μmol/L。 5.5 琼脂糖：电泳级。 6 主要仪器和设备 6.1 恒温培养箱：温度误差±2℃。 6.2 高速离心机：12000g以上。 6.3 PCR仪。 6.4 水平电泳仪。 6.5 凝胶成像仪。 6.6 匀浆器。 7 临床诊断 7.1 体表检查 观察鱼体是否出现以下症状：体表黏液脱落，鳃盖、颌部、胸鳍和腹鳍等部位出现瘀血和出血，尤其头部鳃盖和颌部出血、淤血明显，体表或形成明显脱黏斑。 7.2 解剖检查 解剖病鱼，观察是否出现以下症状：鳃红肿出血；肝脏肿大，有出血点和灰白色的坏死病灶；脾脏和肾脏肿大、出血；肠粘膜水肿、充血、发炎。 7.3 临床判定 根据体表检查和解剖检查结果，结合实验室分子检测结果进行综合判断。 附录A（资料性） 附录B（资料性）