【地方标准】 猪骨骼肌肌纤维直径测定方法-硝化法

ICS 11.220
B 41
DB37
山东省地方标准
DB37/T 2472-2014

猪骨骼肌肌纤维直径测定方法 硝化法
Determination Method of Pig Skeletal Muscle Fiber Diameter-nitrofication

2014-04-21发布
2014-06-01实施
山东省质量技术监督局 发布

前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由山东省畜牧兽医局提出。
本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所。
本标准主要起草人：呼红梅、武英、王彦平、郭建凤、张印、刘俊珍、魏华、韩红、徐敏丽。

1 范围
本标准规定了猪骨骼肌肌纤维直径测定中应用的试剂和仪器、样品处理、肌纤维直径测量，以及肌纤维直径校正值的计算。
本标准适用于猪及其他畜禽肌肉的肌纤维直径测定。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 肌纤维 muscle fibers
骨骼肌的单个细胞，呈纤维状，故肌细胞通常称为肌纤维。
3.2 肌纤维直径 muscle fiber diameter
肌纤维直径是度量肌纤维粗细的指标，单位um。
3.3 校正系数 correction coefficient
标尺对测微尺的校正值，校正肌纤维直径测量值，以提高肌纤维直径测定值的准确性。

4 原理
利用硝酸的氧化作用使猪骨骼肌中蛋白质氧化、硝化变性，破坏结构蛋白和骨架蛋白使肌纤维分离，然后分散于甘油中，以进行肌纤维直径测量。

5 试剂、仪器
5.1 基本要求
除另有说明外，试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。
5.2 硝酸溶液
使用浓度为65%～68%的分析纯硝酸配制体积百分比为20%的硝酸溶液，硝酸溶液需当天配制。
5.3 甘油
丙三醇，俗称甘油。直接滴于载玻片上的样品中，使肌纤维分离于甘油中。
5.4 显微镜
显微镜配备10倍目镜、40倍物镜，目镜可与镜筒拆离，装入测微尺，测定肌纤维直径。

6 样品处理
6.1 取样
取骨骼肌，剔除外周筋、腱、脂肪和肌膜后顺肌纤维走向取3cm×1cm×0.5cm（长×宽×高）肉块，肉块展平固定于硬纸片上（两端固定），做好标记。
6.2 试样处理
固定于硬纸片的试样置于硝酸溶液中，4~8℃放置22h～24h取出，或是室温条件下浸泡20h~22h至试样呈黄色。用手术刀横向切取试样1mm，用牙签剥去外围的肉样，中间的肉样置于干净的载玻片上，滴上一滴甘油，然后用牙签数次轻压肉样，分离肌纤维，使其均匀分布，盖上盖玻片。

7 测量
制作好的试样，置于10×40倍带目镜测微尺的显微镜下测量肌纤维直径。测量肌纤维直径时，选择边缘清晰完整的进行测量，测量时需清晰看到肌纤维的横纹。每个试样测定100～200根为宜。

8 计算
8.1 记录肌纤维直径的测量值，肌纤维直径的测量值乘显微镜的校正系数，即为肌纤维直径的校正测量值，测定结果以平均数表示。
CA=A×CF (1)
式中：
CA——肌纤维直径校正测量值（μm）；
A——肌纤维直径测量值；
CF——校正系数。
8.2 校正系数的计算：以显微镜为OLYMPUS BX51型倒置显微镜为例，标尺为0.01mm，测微尺10:1000为例：测微尺安装在显微镜镜筒中10倍目镜的下方，标尺放在载物台，在40倍物镜下标定测微尺，首先测微尺0起点对准标尺某一刻度，再观察标尺与测微尺那一刻度标尺对应，如标尺5个刻度即0.05mm对应测微尺19个刻度，那么测微尺每个刻度为5/19×0.01=0.00263mm，0.00263×1000=2.63，测微尺每个刻度为2.63μm。也就是说如果测微尺测定的肌纤维直径为24，那么肌纤维实际直径24×2.63=63.12μm。用显微镜为OLYMPUS BX51型倒置显微镜在10X40倍下测定肌纤维直径时，校正系数为2.63。
CF=T/CT×0.01×1000 (2)
式中：
T——标尺刻度数；
CT——对应测微尺刻度数。