【农业行业标准(NY)】 玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法

中华人民共和国农业行业标
NY/T449—2001
玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法Identilication purily of naize varietyusing salling in protein eletrohporcsis2001-08-20发布
中华人民共和国农业部发布
2001-11-01实施
NYT449
本标由业商市场与经济信息司球出本标准起单单位，农业部全国农作物种了质量点督检整两试中心，古林省农作物问兰质量监督险验站，北京种了质量监督检验站。中标满上要起互人：辛景树站建宗、丁万志、贾希海，丧庭平、王妆下、刘玉欣、苏菊来、徐军、吕小瑞、工香黄.环波.冯晓东，欧巷、条有海，班秀驱1英围
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玉米种子纯度盐溶蛋自电泳鉴定方法Identification purity of malzevarleryusing saling in protein eletrohporegin牢标准现定了玉米单交产及东本的真实性和品种的度的室内检测方法：本标准适同F玉来交种及案本的其实性和品种纯展监定2引用标准
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下列标准所么含的余文还过在本标准口引用而构成为本标准的系文。立标准版时，所求版车沟为有效。所有标非都会修订，使用本标兆的各探讨使同下划标最新成车的可能性，G1/T3513.21995农作物种：检验规杆样GBT3543.51995衣作恢种子拾验规实件和品种频整定GB44-—1！校食降欧种子未齐类3定文
本标准采下延义，
3.1了实性
供检站种文件记录(划标整等)是否扫符3.2温种的度
品种在将征特性方止典型一效的积度用本品的种千数谢命术性特样品种子效的百分牢表示，[G/[ 3513.5]
3.3分种家种了
再种家产成的波传性状稳定的品气疯求中种子的最衫·批种了用一进一求器验原的种了，4原理
从玉来引子心提取的盐陷蛋户在聚两频酰胺经咬的浓缩效应、分于筛效应和电录分典的电待效点作带一选行分两，迪逆染色显未向质谱非类型。不同比米品种由干造传组成的不同，种于内所含拍蛋自需类有举，这种签异可利用山涉图谱加以监别，从而对种了再实性利品种纯度进行监定。5仪器设备及试剂
5.1仪设备
电款议：00=5连续可调，-mA连读可调、通定输当边率2MW）、垂放来心式脉格、单格数券死器天平（感量C.、.OUE、0,CC1各一台酸度微授伴需商理高心机00D1/m以)电冰箱电上高心管(1.5ml.).高心前望，移受(10m1.,5ail.2l.各两支?,微量进抢器（:~中华人民共和街农业部20010820批准2001-1-91实
[00pL恒流箱.观！灯等
5.2试剂
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丙筛酰胶、，-业中基双内烯统胺乳酸、乳酿带，甘氧酸，扩不妇酿、南酸立铁，暴化钠，能轴、基漆、基终三氟之，过氧化氢、需新弃张R20.尤水乙游，止丁醇等《所币达剂均为分析纯，所月水均为离 r水).
6溶液配制
6.1电抵维冲设
称取甄酸00人2烧中ra去离水洋，用乳2H3.3.再去离水穿200/m.勺.
6.2科品提报液
称收鼠化钠5.B3g点特200.CCg币蒸绿0.15g，例人1UU0raL烧积中.元1太离一水8Fnm.游妍，刘热工微沸：故垒究湿温，再用卡离于水准容至1(1.。在：案件下保存，6.3分离股婴冲被
收1.13mL酸于1000m1.烧坏中.加两了水Snl，用乳酸两至\H3.1.再去离于水定容至1000ml.+棕色效，在1条件下识存。5.4分高胶溶液
联内烯酰胺112.5-亚甲双内筛胺3.%抗坏血胶%流酸.3用分胶频油穿录，不历分离胶级定容至10m过」床色瓶中在：件下保存！招过16-5浓瑞胶冲液
收30乳轻钠于20烧杯中去离子水1品乳睡满率52可款云离子水举接也施中在C件下保存，
6.6浓缩收率设
密取胺5.0.业本丙烯胺.抗坏血.0酸铁0.升效缩缓冲谈错解.再月液消胶缓冲波此容会111m！..过波下掠免版中，在亡条件下保存（不超过6）E.73义的过氧化氢矫设
取3长的过比或二m!.加9mE大离子来，此1惊中在4条作保么5-8染叁液
称取专马斯监R22.，生年初宁用1m:：无水之醇研府裕解，过滤」综包板户，取1)mT.读游策人例26om，的3%（W）=氯之酸降液十，泥实7电脉操作
7.：拆品备
核心1.2的发求，以送验折品中随机分取下米种子至枚，书单新粒树碎游树碎，放人1.5.两心、用商管加与帮品保积向能样品择取液与激量5m，再轻次斤典心机离心orrt/min)lorin.收1流液用干电证：7.2饿胶到备
7.2.1胶字剂备
格预先洗律晾干拍破璃极流人胶条中，然把胶固定在垂点裁心泳相内，保持水平，短板向止被，疗紧烯栓，各，
7.2、2封底
根量申格人小，收年分胶能于证中微量护样器3的车化（段5?
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分离胶游敏加C.3%过软化氢溶液）迅速控今，并从长变端板外创若破度板倒人，效动脉拍3次，改半。
7.2.3池岛液
底避对性后，开减源条插人两坡高板之间：吸去因聚台间书业的本，量取分离缩液适量，加人3近过氧化氢济落（一般每11.分离胶液3%过求化氧23迅速据与：电泳伸，将分商胶溶率例入两班确极之，高盘的知破俩极上沿1.2cm：放电冰物并在试验台上报动次后，迅人适景的止1醇封腔面。符凝胶录仓品：没出分身胶丧面工的止「醇，准用去离子水冲洗胶面3次，用滤纸费迁。7.2.4酒淋靠
量取依编胶道收过化急游液一吸5依缩腔液兴过化汽4C采搅针.闻人做班博板之间，马插样品梳，样品梳底部距分离胶预部心心m7.2.5点样
滋箱胶聚合后，找山栏品梳中将样而格清理干净，用说量进纤器在每个杯品悟加人不回灯的样品：请德15L，每点一粒后、都要用大离于水清既进样器3次，7. 7. 6性源
加样完毕后，供人自板凝冲然，上搭电缨冲液面要商丁划绒班板，下艳心报缎冲绒面要商销效，等原线正极接上码，负圾接下情長通电配，采用心我下进行电谋，待甲基保拒示剂下移至腔底火燃时，关电源。
7.2.7此板
例出电极滤从电冰拍内联出股室，间下胶然，定开费璃板.取山胶片没入柔色液中7.2. 9染色
在恒件下英单2~4h
7.2. 9洗板
取出胶片，用(5%的下加洗衣粉水洗净。日、结果计算
81定值算
待整个快检格品心冰结求，坐现片灯二鉴定胶片二心泳适带的特征和一致件、计数实检样品粘和非本品种检数.并依站1计要电试良定值Xx（）供检详痴粒效一非本品种粒效，100谢检新
8.2群品纯这位计算
将电逐测定供工代式）可归方程，计谨样品纯度值，再将与1户的纯度位进行比校，判定样品尽否合格，
Y52.9+0,46:X
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