【地方标准】 水产生物种质检验技术规程 同工酶电泳分析法

ICS 67.120.30 B50 辽宁省地方标准 DB21/T1861.1—2010 水产生物种质检验技术规程 同工酶电泳分析法 Isozyme procedure to detect germplasm for aquaculture species 2010-12-31 发布 辽宁省质量技术监督局 2011-02-01 实施 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009的规则起草。 本标准由辽宁省海洋水产科学研究院提出。 归口单位：辽宁省海洋与渔业厅。 本标准主要起草人：刘卫东、赫崇波、高祥刚、李云峰、鲍相渤、李宏俊、苏浩。 附录A、B、C均为资料性附录。 1 范围 本标准规定了水产动植物同工酶电泳分析所涉及的原理、试剂、仪器设备、抽样、样品制备、电泳、染色和分析方法等。 本标准适用于水产动植物品种内群体酶位点与等位基因分析及遗传异质性分析。 2 术语和定义 2.1 同工酶（isozyme） 同工酶是生物体内催化相同反应但一级结构不同的酶。 2.2 等位基因（allele） 基因的一种变异体。在二倍体个体中每个基因具有两个等位基因，分别来自父本和母本。 在群体中，一个基因可能存在多个等位基因。 2.3 平均遗传杂合度（average heterozygosity） 用H表示群体平均各座位为杂合子的比例，用于衡量遗传标记的信息含量。 3 原理 同工酶为具有相同催化功能但结构不同的酶蛋白表达产物。 由于电荷、分子大小和形状不同，在电场与凝胶中迁移率不同。 通过电泳分离、染色及扫描分析酶带迁移距离与数量，从而判断物种及种群遗传特性。 4 试剂 除非另有说明，本规程所用试剂均为分析纯。 4.1 95%乙醇 4.2 甘油 4.3 盐酸（HCl） 4.4 氢氧化钠（NaOH） 4.5 硼酸 4.6 柠檬酸 4.7 乙二胺四乙酸（EDTA） 4.8 三羟甲基氨基甲烷（Tris） 4.9 L-组氨酸 4.10 丙烯酰胺（Acr） 4.11 乳酸 4.12 N,N'-亚甲基双丙烯酰胺（Bis） 4.13 四甲基乙二胺（TEMED） 4.14 过硫酸铵（AP） 4.15 DL-苹果酸 4.16 α-磷酸甘油钠 4.17 磷酸氢二钠（Na2HPO4） 4.18 磷酸二氢钠二水合物（NaH2PO4·2H2O） 4.19 辅酶I（NAD） 4.20 辅酶II（NADP） 4.21 吩嗪甲酯硫酸盐（PMS） 4.22 氯化硝基四氮唑蓝（NBT） 4.23 山梨醇 4.24 DL-异柠檬酸三钠 4.25 6-磷酸葡萄糖酸钠 4.26 α-乙酸萘酯 4.27 β-乙酸萘酯 4.28 丙酮 4.29 坚牢蓝RR盐 4.30 氨基黑10B 4.31 固定液：乙醇3份、甘油1份、蒸馏水5份混合 4.32 1 mol/L盐酸：82.5 ml浓盐酸加水定容至1000 ml 4.33 浓缩胶缓冲液（Tris-HCl pH6.8） 4.34 分离胶缓冲液（Tris-HCl pH8.8） 4.35 电极缓冲液（Tris-甘氨酸 pH8.3） 4.36 丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液（Arc-Bis） 4.37 1.5%过硫酸铵溶液 4.38 不连续聚丙烯酰胺凝胶制备方法（按附录A、B配制） （后续试剂与凝胶配制步骤在原文中继续）